美洲大赤魷(DosidicusGigas)在食品加工過(guo)程中的(de)(de)(de)軟骨(gu)廢棄物(wu)為原(yuan)料(liao),建立包括粉碎、脫水脫脂、酶解、除(chu)蛋(dan)白(bai)(bai)、醇(chun)沉(chen)、離(li)子交換、脫鹽等操作流程的(de)(de)(de)CS制備(bei)(bei)方法(fa),制備(bei)(bei)得到(dao)新(xin)(xin)型(xing)CS。最終產(chan)品的(de)(de)(de)產(chan)率(lv)達(da)到(dao)16±2%。用(yong)(yong)(yong)(yong)商品化(hua)的(de)(de)(de)硫酸軟骨(gu)素(su)(su)ABC酶、硫酸皮膚素(su)(su)酶、透明質酸酶(來(lai)自于(yu)StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗室自有(you)產(chan)權的(de)(de)(de)rHCLase降(jiang)解所得多(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang),根據酶的(de)(de)(de)底物(wu)專一(yi)性(xing)(xing),確(que)認所制備(bei)(bei)的(de)(de)(de)多(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)為CS；通過(guo)咔唑反應檢(jian)測樣(yang)品中新(xin)(xin)型(xing)CS含量(liang)(liang),BCA蛋(dan)白(bai)(bai)定(ding)量(liang)(liang)法(fa)檢(jian)測樣(yang)品中蛋(dan)白(bai)(bai)含量(liang)(liang)。結果提示(shi)：樣(yang)品中新(xin)(xin)型(xing)CS含量(liang)(liang)達(da)到(dao)97%以上,蛋(dan)白(bai)(bai)含量(liang)(liang)低于(yu)2%。2.新(xin)(xin)型(xing)CS多(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)結構(gou)的(de)(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)：參照葡聚(ju)糖(tang)(tang)(tang)分(fen)(fen)(fen)(fen)子量(liang)(liang)標準物(wu),經凝膠過(guo)濾HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi),確(que)定(ding)所制備(bei)(bei)的(de)(de)(de)NER-CS多(duo)(duo)糖(tang)(tang)(tang)平均分(fen)(fen)(fen)(fen)子量(liang)(liang)約為623.2 kDa。再通過(guo)硫酸軟骨(gu)素(su)(su)ABC酶完(wan)全降(jiang)解,結合HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)二糖(tang)(tang)(tang)組(zu)成,發現NER-CS主要含有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其(qi)中E-unit含量(liang)(liang)最高(gao)可達(da)44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含量(liang)(liang)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為7.1%、12.6%、35.8%,總硫酸化(hua)度為1.37。是一(yi)種新(xin)(xin)型(xing)高(gao)硫酸化(hua)CS。3NER-CS生(sheng)物(wu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)：1)用(yong)(yong)(yong)(yong)Aglyco試劑(ji)盒檢(jian)測NER-CS的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)凝血活(huo)(huo)性(xing)(xing),結果顯(xian)示(shi)：NER-CS抗(kang)(kang)(kang)(kang)FⅡa和抗(kang)(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為20±2U/mg和0.9±0.2U/mg,是陽(yang)性(xing)(xing)對照肝素(su)(su)抗(kang)(kang)(kang)(kang)FⅡa活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)10%左右(you),抗(kang)(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)4%左右(you)；2)利用(yong)(yong)(yong)(yong)乳腺癌4T1細胞試驗轉(zhuan)移(yi)模型(xing),分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS在小(xiao)鼠(shu)體內抗(kang)(kang)(kang)(kang)腫瘤(liu)轉(zhuan)移(yi)活(huo)(huo)性(xing)(xing),結果顯(xian)示(shi)：50、100和200μgNER-CS的(de)(de)(de)抑瘤(liu)率(lv)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽(yang)性(xing)(xing)對照100μg肝素(su)(su)的(de)(de)(de)抑瘤(liu)率(lv)為74.6±1.8%；3)用(yong)(yong)(yong)(yong)親和素(su)(su)修(xiu)飾的(de)(de)(de)CM5芯片固定(ding)生(sheng)物(wu)素(su)(su)化(hua)NER-CS,分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS與(yu)五種生(sheng)長因子、三種選(xuan)擇素(su)(su)的(de)(de)(de)相(xiang)互(hu)作用(yong)(yong)(yong)(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing),結果顯(xian)示(shi)NER-CS與(yu)生(sheng)長因子HGF、bFGF相(xiang)互(hu)作用(yong)(yong)(yong)(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)較高(gao),親和力常(chang)數(shu)分(fen)(fen)(fen)(fen)別(bie)為(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)(tang)(tang)的(de)(de)(de)制備(bei)(bei)及其(qi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)腫瘤(liu)活(huo)(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。