美洲大赤魷(DosidicusGigas)在(zai)食品(pin)加工過程中(zhong)的(de)(de)(de)(de)軟骨廢棄物為(wei)(wei)原料,建立包(bao)括粉碎、脫(tuo)水脫(tuo)脂、酶(mei)(mei)(mei)解(jie)、除蛋白(bai)、醇沉、離(li)子(zi)交換、脫(tuo)鹽等操作流(liu)程的(de)(de)(de)(de)CS制備(bei)方法,制備(bei)得到(dao)新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS。最(zui)(zui)終產(chan)品(pin)的(de)(de)(de)(de)產(chan)率達到(dao)16±2%。用(yong)商品(pin)化(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)硫酸軟骨素(su)ABC酶(mei)(mei)(mei)、硫酸皮膚(fu)素(su)酶(mei)(mei)(mei)、透明質酸酶(mei)(mei)(mei)(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗室自有產(chan)權的(de)(de)(de)(de)rHCLase降解(jie)所得多(duo)糖(tang)(tang),根據酶(mei)(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)底物專(zhuan)一性(xing)(xing),確認所制備(bei)的(de)(de)(de)(de)多(duo)糖(tang)(tang)為(wei)(wei)CS；通過咔(ka)唑(zuo)反應(ying)檢測樣品(pin)中(zhong)新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS含量(liang)(liang)(liang),BCA蛋白(bai)定(ding)(ding)量(liang)(liang)(liang)法檢測樣品(pin)中(zhong)蛋白(bai)含量(liang)(liang)(liang)。結果提示(shi)(shi)：樣品(pin)中(zhong)新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS含量(liang)(liang)(liang)達到(dao)97%以上,蛋白(bai)含量(liang)(liang)(liang)低(di)于2%。2.新(xin)型(xing)(xing)(xing)CS多(duo)糖(tang)(tang)結構的(de)(de)(de)(de)初步分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析：參照(zhao)葡聚糖(tang)(tang)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)(liang)標準(zhun)物,經凝膠過濾HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析,確定(ding)(ding)所制備(bei)的(de)(de)(de)(de)NER-CS多(duo)糖(tang)(tang)平均(jun)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)(liang)約(yue)為(wei)(wei)623.2 kDa。再通過硫酸軟骨素(su)ABC酶(mei)(mei)(mei)完全降解(jie),結合HPLC分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析二糖(tang)(tang)組成,發現(xian)NER-CS主要含有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)E-unit含量(liang)(liang)(liang)最(zui)(zui)高(gao)可達44.5%,同時(shi)GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含量(liang)(liang)(liang)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫酸化(hua)(hua)度為(wei)(wei)1.37。是一種(zhong)新(xin)型(xing)(xing)(xing)高(gao)硫酸化(hua)(hua)CS。3NER-CS生(sheng)物活性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)初步分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析：1)用(yong)Aglyco試劑盒檢測NER-CS的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)凝血(xue)活性(xing)(xing),結果顯(xian)示(shi)(shi)：NER-CS抗(kang)(kang)FⅡa和(he)(he)抗(kang)(kang)FXa活性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)(he)0.9±0.2U/mg,是陽(yang)性(xing)(xing)對照(zhao)肝(gan)素(su)抗(kang)(kang)FⅡa活性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)10%左右,抗(kang)(kang)FXa活性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)4%左右；2)利用(yong)乳腺癌4T1細胞試驗轉(zhuan)移模型(xing)(xing)(xing),分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析NER-CS在(zai)小鼠體內抗(kang)(kang)腫瘤(liu)轉(zhuan)移活性(xing)(xing),結果顯(xian)示(shi)(shi)：50、100和(he)(he)200μgNER-CS的(de)(de)(de)(de)抑(yi)瘤(liu)率分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同時(shi)陽(yang)性(xing)(xing)對照(zhao)100μg肝(gan)素(su)的(de)(de)(de)(de)抑(yi)瘤(liu)率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親和(he)(he)素(su)修飾的(de)(de)(de)(de)CM5芯(xin)片固定(ding)(ding)生(sheng)物素(su)化(hua)(hua)NER-CS,分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析NER-CS與五(wu)種(zhong)生(sheng)長因子(zi)、三種(zhong)選擇(ze)素(su)的(de)(de)(de)(de)相互作用(yong)活性(xing)(xing),結果顯(xian)示(shi)(shi)NER-CS與生(sheng)長因子(zi)HGF、bFGF相互作用(yong)活性(xing)(xing)較高(gao),親和(he)(he)力常數分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)別為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)(tang)的(de)(de)(de)(de)制備(bei)及其抗(kang)(kang)腫瘤(liu)活性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)(fen)(fen)析。