沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌是(shi)一種(zhong)常(chang)見的(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)源性致(zhi)病(bing)菌。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌鑒定的(de)(de)(de)(de)(de)傳(chuan)統(tong)方法主(zhu)要是(shi)根據(ju)形(xing)態(tai)學特(te)征(zheng)、培養特(te)征(zheng)、生理生化特(te)征(zheng)、抗原特(te)征(zheng)、噬菌體(ti)特(te)征(zheng)等(deng)。1885年沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)等(deng)在霍(huo)亂流行時分(fen)離到豬霍(huo)亂沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌,故(gu)定名為(wei)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌屬(shu)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌屬(shu)有的(de)(de)(de)(de)(de)專(zhuan)對(dui)(dui)人類(lei)致(zhi)病(bing),有的(de)(de)(de)(de)(de)只對(dui)(dui)動(dong)物(wu)致(zhi)病(bing),也有對(dui)(dui)人和動(dong)物(wu)都致(zhi)病(bing)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌病(bing)是(shi)指(zhi)由各(ge)種(zhong)類(lei)型(xing)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌所引(yin)起(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)對(dui)(dui)人類(lei)、家(jia)畜以及野生禽獸不同(tong)形(xing)式的(de)(de)(de)(de)(de)總稱(cheng)。感染(ran)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌的(de)(de)(de)(de)(de)人或帶菌者(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)糞便污染(ran)食(shi)(shi)(shi)品,可使(shi)人發生食(shi)(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)。據(ju)統(tong)計在世界各(ge)國的(de)(de)(de)(de)(de)種(zhong)類(lei)細(xi)菌性食(shi)(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)中(zhong),沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌引(yin)起(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)常(chang)列(lie)榜(bang)首。我國內陸地區也以沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌為(wei)首位(wei)。
沙門氏菌(jun)病的病原體(ti)。屬腸(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)科,革蘭氏陰性腸(chang)道桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)。已發(fa)現的近一千種(或菌(jun)株)。按其抗原成分,可(ke)分為(wei)甲(jia)(jia)(jia)、乙、丙(bing)、丁(ding)(ding)、戊等基本菌(jun)組(zu)。其中與人體(ti)疾病有關的主要有甲(jia)(jia)(jia)組(zu)的副(fu)傷(shang)寒甲(jia)(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),乙組(zu)的副(fu)傷(shang)寒乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和鼠傷(shang)寒桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),丙(bing)組(zu)的副(fu)傷(shang)寒丙(bing)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和豬(zhu)霍亂桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),丁(ding)(ding)組(zu)的傷(shang)寒桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和腸(chang)炎桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)等。除傷(shang)寒桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)、副(fu)傷(shang)寒甲(jia)(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和副(fu)傷(shang)寒乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)引(yin)(yin)起人類的疾病外,大多數僅能引(yin)(yin)起家(jia)畜、鼠類和禽(qin)類等動(dong)物(wu)的疾病,但(dan)有時(shi)也可(ke)污染人類的食物(wu)而(er)引(yin)(yin)起食物(wu)中毒。
沙門(men)氏菌在(zai)水中不易(yi)繁(fan)殖,但可(ke)生存(cun)2-3周(zhou),冰箱中可(ke)生存(cun)3-4個月,在(zai)自(zi)然環境的糞便中可(ke)存(cun)活(huo)1-2個月。沙門(men)氏菌最(zui)適繁(fan)殖溫度為37℃,在(zai)20℃以上(shang)即能(neng)大量繁(fan)殖,因此,低溫儲存(cun)食品是一項重要預(yu)防措施。
菌(jun)體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽(ya)胞,一般無莢膜(mo),除(chu)雞(ji)白痢沙門氏(shi)菌(jun)和(he)雞(ji)傷(shang)寒沙門氏(shi)菌(jun)外,大多(duo)有周身鞭毛。營養要(yao)求(qiu)不(bu)(bu)高,分(fen)離培(pei)養常采(cai)用腸道選擇鑒別培(pei)養基。生(sheng)化反應對本(ben)屬菌(jun)的(de)(de)鑒別具有重要(yao)參(can)考(kao)意(yi)義(見表)。不(bu)(bu)液化明膠,不(bu)(bu)分(fen)解尿(niao)素,不(bu)(bu)產生(sheng)吲哚,不(bu)(bu)發酵乳(ru)糖和(he)蔗糖,能發酵葡萄糖、甘露醇(chun)、麥(mai)芽(ya)糖和(he)衛(wei)芽(ya)糖,大多(duo)產酸產氣,少數只產酸不(bu)(bu)產氣。VP試驗陰性(xing),有賴氨(an)酸脫(tuo)羧酶。DNA的(de)(de)G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不(bu)(bu)強,在60℃15分(fen)鐘(zhong)可(ke)被(bei)殺死。在水中存活2~3周。在5%的(de)(de)石炭(tan)酸中,5分(fen)鐘(zhong)死亡。
本屬(shu)(shu)菌(jun)按生(sheng)(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)分(fen)為4個亞(ya)屬(shu)(shu)。亞(ya)屬(shu)(shu)Ⅰ是生(sheng)(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)典型的和最(zui)常見的沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun);亞(ya)屬(shu)(shu)Ⅱ和Ⅳ是生(sheng)(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)不(bu)典型的沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun);亞(ya)屬(shu)(shu)Ⅲ是亞(ya)利桑那沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)。
沙(sha)門氏菌(jun)具有復雜(za)的抗(kang)(kang)原(yuan)結構(gou),一(yi)般可分為菌(jun)體(O)抗(kang)(kang)原(yuan)、鞭毛(H)抗(kang)(kang)原(yuan)和表面(Vi)抗(kang)(kang)原(yuan)3種(zhong)。
生化反應(ying)很活潑,能分解多種糖(tang)類和(he)醇。
1)需(xu)氧及(ji)兼(jian)性(xing)厭氧菌(jun)。
2)在普通瓊(qiong)脂培(pei)養(yang)基上生長良好,培(pei)養(yang)24h后,形成(cheng)中等大(da)小、圓形、表面光(guang)滑、無色半透明、邊緣整齊(qi)的菌落,其菌落特征亦(yi)與大(da)腸桿菌相似(無糞臭味)。
3)鑒別(bie)培養基(麥康凱、SS、伊紅美(mei)藍):一般無色菌落(luo)。
4)三糖鐵瓊脂斜面(mian):斜面(mian)為紅(hong)色,底部變黑并產氣。
1)發酵(jiao)葡萄糖(tang),麥芽(ya)糖(tang),甘露(lu)醇和山梨醇產氣;
2)不發酵乳糖(tang)、蔗(zhe)糖(tang)和側金盞花醇;
3)不(bu)產(chan)吲哚、V-P反應陰性;
4)不(bu)水(shui)解尿素和對苯丙氨酸不(bu)脫氨。
傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、雞(ji)傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌及一部(bu)分(fen)雞(ji)白痢沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌發酵糖不(bu)產氣,大多數雞(ji)白痢沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌不(bu)發酵麥芽糖;除雞(ji)白痢沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、豬傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、甲型(xing)副傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌和仙臺沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌等外(wai),均能利用枸櫞(yuan)酸鹽。
沙門氏菌具(ju)有(you)復雜的抗原(yuan)結構,一般沙門氏菌具(ju)有(you)菌體(O)抗原(yuan)、鞭毛(H)抗原(yuan)和(he)表面抗原(yuan)(莢膜(mo)或包膜(mo)抗原(yuan))三種抗原(yuan)。
肉(rou)及其制品的(de)(de)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率美國(guo)為20%-25%、英國(guo)為9.9%、日本檢查進口家禽的(de)(de)污染(ran)率為10.3%,國(guo)內肉(rou)類(lei)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率在1.1%-39.5%。
中國蛋及其制品(pin)沙門氏(shi)菌檢(jian)出率為(wei)3.9%-43.7%,由于吃蛋引起鼠(shu)傷(shang)寒病(bing)的病(bing)例(li)報告逐漸(jian)有增加的趨勢(shi)。
食品在(zai)加工、運輸、出(chu)售過程中往往被沙(sha)(sha)門氏菌污染。沙(sha)(sha)門氏菌在(zai)糞便、土(tu)壤(rang)、食品、水(shui)中可生存5個月至2年之(zhi)久(jiu)。
恢復期患(huan)者(zhe)和無癥狀的帶菌(jun)者(zhe)也是常(chang)見(jian)的傳染(ran)源。
廣泛分布于自然界,常常寄(ji)居在人(ren)和(he)(he)動物(wu)體內,特別(bie)是家禽、家畜及(ji)寵物(wu)的腸(chang)道(dao)中(zhong)。主要污染(ran)的食品有:肉和(he)(he)肉制(zhi)品、蛋和(he)(he)蛋制(zhi)品、奶和(he)(he)奶制(zhi)品等。由于沙門氏菌不分解(jie)蛋白質,食物(wu)被其(qi)污染(ran)后表面(mian)看起來似乎(hu)并沒有變化.
沙門(men)氏菌感染(ran)癥為人畜(chu)共患感染(ran)性疾病,主要由(you)食用遭受污染(ran)的食物(wu)導致,是(shi)許多國家(jia)食物(wu)中毒的重要病源。
典(dian)型癥狀(zhuang)包括發熱、惡心(xin)、嘔吐、腹瀉及腹部(bu)絞痛等(deng)癥狀(zhuang),通常(chang)在發熱后72小(xiao)時內(nei)會(hui)好(hao)轉。嬰兒、老年人(ren)、免疫功能低下的患者則(ze)可能因沙門氏菌進入血液而(er)出(chu)現嚴(yan)重(zhong)且危(wei)及生命(ming)的菌血癥,少數還會(hui)合并腦膜炎(yan)或骨髓炎(yan)。
一般沙門氏菌造成的腸胃炎不需(xu)要給予(yu)(yu)抗生(sheng)素治療(liao);而以補充水分與電解(jie)質為主(zhu);但對于新(xin)生(sheng)兒、免(mian)疫功能低(di)下(xia)患(huan)者(zhe)及特殊傷員;則需(xu)要視(shi)情(qing)況紿(dai)予(yu)(yu)抗生(sheng)素治療(liao)。
1、餐前、便后、接觸(chu)(chu)食物前、接觸(chu)(chu)動物或生蛋后應仔細(xi)洗凈雙(shuang)手。
2、處理生食(shi)和熟食(shi)的砧(zhen)板要分開。
3、食物要熟透再(zai)吃(尤其是雞(ji)蛋與家禽(qin)類)。
4、非現做現吃的食物應(ying)以保鮮膜包覆后放進冰箱保存,再次食用前應(ying)加熱(re)或煮熟。
5、撲滅并(bing)阻隔(ge)蒼(cang)蠅等(deng)病媒。被蒼(cang)蠅沾染、過(guo)期或腐敗(bai)的不潔食物(wu)均應(ying)丟(diu)棄,切勿食用。
6、水塔應經常清洗、消毒。
7、旅行或(huo)野營時的飲(yin)用水應煮沸并消(xiao)毒。
8、如有(you)嘔(ou)吐、腹瀉或(huo)發熱等癥(zheng)狀,應盡快就醫。
沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)(shi)美國(guo)(guo)(guo)(guo)食(shi)物中(zhong)(zhong)毒致死(si)的(de)(de)(de)主要(yao)原因(yin)。美國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)對這種病(bing)菌(jun)(jun)(jun)一(yi)點都(dou)不(bu)(bu)(bu)陌生(sheng)(sheng)(sheng),每(mei)(mei)年(nian)(nian)全(quan)國(guo)(guo)(guo)(guo)大約報告40000例(li)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)病(bing)例(li)。但實(shi)際的(de)(de)(de)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)人(ren)(ren)數可(ke)能要(yao)達20倍(bei)以(yi)上,因(yin)為(wei)許多輕型(xing)病(bing)人(ren)(ren)可(ke)能未確診,據不(bu)(bu)(bu)完全(quan)統(tong)計,每(mei)(mei)年(nian)(nian)大約有1000人(ren)(ren)死(si)于急性沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)。但是(shi)(shi),以(yi)前各州爆發(fa)的(de)(de)(de)疫情幾乎都(dou)與(yu)人(ren)(ren)們(men)吃了(le)染(ran)(ran)(ran)上沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)肉(rou)類、蛋(dan)(dan)(dan)類、乳類有關,但迄今為(wei)止,很少(shao)聽(ting)說吃蔬果(guo)大面積(ji)受沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)(ran)甚(shen)(shen)至(zhi)在(zai)(zai)(zai)人(ren)(ren)群中(zhong)(zhong)引發(fa)大疫情的(de)(de)(de)。對此,周福(fu)生(sheng)(sheng)(sheng)教授(shou)解釋說,這可(ke)能是(shi)(shi)西(xi)(xi)紅柿(shi)在(zai)(zai)(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)的(de)(de)(de)過程中(zhong)(zhong),由(you)于空氣(qi)中(zhong)(zhong)紫(zi)外線不(bu)(bu)(bu)夠強烈,植物在(zai)(zai)(zai)灌(guan)溉過程或(huo)因(yin)土壤中(zhong)(zhong)含有沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),這樣(yang)才(cai)使西(xi)(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)表皮上沾(zhan)染(ran)(ran)(ran)了(le)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),加上不(bu)(bu)(bu)少(shao)人(ren)(ren)有生(sheng)(sheng)(sheng)食(shi)西(xi)(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)習(xi)慣(guan),如(ru)果(guo)沒(mei)有清(qing)洗干凈,就完全(quan)有可(ke)能發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)。不(bu)(bu)(bu)光是(shi)(shi)食(shi)用西(xi)(xi)紅柿(shi),其他瓜(gua)果(guo)蔬菜(cai)也(ye)一(yi)樣(yang)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)主要(yao)污(wu)染(ran)(ran)(ran)肉(rou)類食(shi)品,魚、禽、奶、蛋(dan)(dan)(dan)類食(shi)品也(ye)可(ke)受此菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)(ran)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)物中(zhong)(zhong)毒全(quan)年(nian)(nian)都(dou)可(ke)發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng),吃了(le)未煮透(tou)的(de)(de)(de)病(bing)、死(si)牲畜肉(rou)或(huo)在(zai)(zai)(zai)屠宰后其他環節污(wu)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)牲畜肉(rou)是(shi)(shi)引起沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)物中(zhong)(zhong)毒的(de)(de)(de)最主要(yao)原因(yin)。有食(shi)品專(zhuan)家指出美國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)吃雞蛋(dan)(dan)(dan)的(de)(de)(de)習(xi)慣(guan)與(yu)國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)不(bu)(bu)(bu)同,他們(men)喜歡吃半(ban)熟的(de)(de)(de)雞蛋(dan)(dan)(dan)甚(shen)(shen)至(zhi)是(shi)(shi)生(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)(dan)(dan),所以(yi)一(yi)旦雞蛋(dan)(dan)(dan)里含有沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)幾率就比較高。“在(zai)(zai)(zai)國(guo)(guo)(guo)(guo)內,生(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)(dan)(dan)里含有沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)其實(shi)并(bing)不(bu)(bu)(bu)奇怪,只不(bu)(bu)(bu)過國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)喜歡將雞蛋(dan)(dan)(dan)煮熟吃,這樣(yang)就大大減少(shao)了(le)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)幾率。”
由(you)沙門氏菌(jun)(jun)引起的(de)食品(pin)中(zhong)毒癥狀主要有惡心、嘔吐、腹痛(tong)、頭痛(tong)、畏寒和(he)(he)腹瀉等,還伴有乏力、肌(ji)肉酸痛(tong)、視覺模糊、中(zhong)等程度發熱、躁動不(bu)安(an)和(he)(he)嗜睡,延續時間2~3d,平(ping)均致(zhi)死率為4.1%。其主要原因是由(you)于攝入了(le)含(han)有大(da)量(liang)沙門氏菌(jun)(jun)屬的(de)非(fei)寄主專一(yi)(yi)性菌(jun)(jun)種(zhong)或(huo)血清型的(de)食品(pin)所引起的(de)。在攝入含(han)毒食品(pin)之后.癥狀一(yi)(yi)般在12~14h內出現,有些潛伏期較長。
防止沙門(men)氏(shi)菌(jun)污染食品(pin);控制食品(pin)中(zhong)沙門(men)氏(shi)菌(jun)的繁殖(zhi);加(jia)熱(re)以徹底殺滅病原菌(jun)。
沙門氏菌(jun)不耐(nai)高溫,食物的中心溫度(du)達70℃以上,持(chi)續(xu)5分鐘一(yi)般(ban)都可以殺死包括沙門氏菌(jun)等常見食源(yuan)性致病(bing)菌(jun)。家庭中一(yi)般(ban)的熱(re)處(chu)理烹調方式都可有效殺滅該菌(jun)。
稱(cheng)取25g(mL)樣(yang)品放入(ru)盛(sheng)有225 mL BPW的(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)杯中,以(yi)8000 r/min~10 000 r/min均(jun)質(zhi)(zhi)1min~2min,或(huo)置于盛(sheng)有225 mL BPW的(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)袋(dai)中,用(yong)(yong)拍擊式均(jun)質(zhi)(zhi)器拍打1min~2min。若樣(yang)品為液態,不需要(yao)均(jun)質(zhi)(zhi),振蕩混(hun)勻(yun)。如(ru)需測(ce)定pH值,用(yong)(yong)1mol/mL無(wu)(wu)菌(jun)(jun)NaOH或(huo)HCl調pH至6.8±0.2。無(wu)(wu)菌(jun)(jun)操作將樣(yang)品轉至500mL錐形瓶(ping)中,如(ru)使用(yong)(yong)均(jun)質(zhi)(zhi)袋(dai),可直接進行培(pei)養(yang),于36 ℃±1℃培(pei)養(yang)8h~18h。
如為冷凍產品,應在(zai)45℃以下不超(chao)過15min,或(huo)2℃~5℃不超(chao)過18h解凍。
輕輕搖(yao)動培養過的樣品混合物,移取1mL,轉(zhuan)種于10mL TTB內(nei),于42℃±1℃培養18h~24h。同時,另取1mL,轉(zhuan)種于10 mL SC內(nei),于36℃±1℃培養18h~24h。
分(fen)別用接種環取(qu)增菌(jun)液1環,劃線接種于一(yi)個(ge)BS瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)和一(yi)個(ge)XLD瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(或(huo)HE瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)或(huo)沙門(men)(men)氏菌(jun)屬顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban))。于36℃±1℃分(fen)別培養(yang)18h~24h(XLD瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)、HE瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)、沙門(men)(men)氏菌(jun)屬顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban))或(huo)40h~48h (BS瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)),觀察各(ge)個(ge)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)上生(sheng)長的菌(jun)落,各(ge)個(ge)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)上的菌(jun)落特征見表1。
表 1 沙(sha)門(men)氏菌(jun)屬在不同選(xuan)擇(ze)性瓊脂平板上(shang)的菌(jun)落(luo)特征
選擇性瓊(qiong)脂平(ping)板 沙(sha)門氏菌
BS 瓊脂 菌(jun)落(luo)為黑色(se)有(you)金屬光澤、棕褐色(se)或灰色(se),菌(jun)落(luo)周圍培(pei)養基可呈(cheng)黑色(se)或棕色(se);有(you)些(xie)菌(jun)株形成灰綠色(se)的(de)菌(jun)落(luo),周圍培(pei)養基不變。
HE 瓊脂(zhi) 藍綠色(se)(se)(se)或(huo)(huo)藍色(se)(se)(se),多(duo)數菌落中心黑(hei)(hei)色(se)(se)(se)或(huo)(huo)幾乎全黑(hei)(hei)色(se)(se)(se);有些菌株為(wei)黃色(se)(se)(se),中心黑(hei)(hei)色(se)(se)(se)或(huo)(huo)幾乎全黑(hei)(hei)色(se)(se)(se)。
XLD 瓊(qiong)脂 菌落(luo)呈(cheng)粉(fen)紅色(se),帶(dai)(dai)(dai)或不(bu)帶(dai)(dai)(dai)黑(hei)色(se)中(zhong)心,有些(xie)菌株(zhu)可呈(cheng)現大的帶(dai)(dai)(dai)光澤的黑(hei)色(se)中(zhong)心,或呈(cheng)現全部黑(hei)色(se)的菌落(luo);有些(xie)菌株(zhu)為黃色(se)菌落(luo),帶(dai)(dai)(dai)或不(bu)帶(dai)(dai)(dai)黑(hei)色(se)中(zhong)心。
沙門氏菌屬顯色(se)培養 按照(zhao)顯色(se)培養基的說明進行判定。
自19世紀后期,沙門氏(shi)(shi)菌(jun)首次被鑒定(ding)為(wei)(wei)(wei)(wei)人(ren)類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種病(bing)原(yuan)(yuan)以(yi)(yi)來,檢(jian)(jian)測方(fang)(fang)(fang)法學都是建立在(zai)采(cai)取感(gan)染(ran)病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便或(huo)血液作(zuo)為(wei)(wei)(wei)(wei)臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎上。此后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年(nian)間(jian),用(yong)于從食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)沙門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法實質上與(yu)那(nei)些用(yong)于臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法是相同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但(dan)至少有三個因素限制(zhi)了用(yong)于臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法應(ying)用(yong)在(zai)食(shi)(shi)品(pin)(pin)分(fen)析上。第一(yi)(yi),通(tong)常(chang),沙門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)水平在(zai)污染(ran)食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)比有感(gan)染(ran)病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)料中(zhong)(zhong)(zhong)要低(di)很(hen)多;第二,食(shi)(shi)品(pin)(pin)本身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性質會干(gan)擾病(bing)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測,例(li)如,某些食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)固有菌(jun)群可能(neng)處在(zai)一(yi)(yi)個很(hen)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水平,從而影響特(te)定(ding)細菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選(xuan)擇(ze)性分(fen)離(li)和鑒定(ding);第三,與(yu)臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是,經(jing)過加工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)(pin),由于加熱、干(gan)燥、高含(han)鹽(yan)量(liang)、酸(suan)和冷凍(dong)等(deng)因素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong),其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙門氏(shi)(shi)菌(jun)受(shou)到(dao)了尚(shang)不(bu)致命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷(shang)或(huo)稱(cheng)“致傷(shang)”。這(zhe)就形成(cheng)了一(yi)(yi)個具有不(bu)同生(sheng)長特(te)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細菌(jun)群。這(zhe)種現象對(dui)(dui)那(nei)些希望從食(shi)(shi)物樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)出沙門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)(pin)分(fen)析家來說有很(hen)大影響,因為(wei)(wei)(wei)(wei)在(zai)選(xuan)擇(ze)培養基(ji)上直接培養“致傷(shang)”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙門氏(shi)(shi)菌(jun)通(tong)常(chang)是以(yi)(yi)細菌(jun)死(si)亡和試驗失敗而告終(zhong)。為(wei)(wei)(wei)(wei)克服這(zhe)些困難,人(ren)們建立了一(yi)(yi)種簡單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生(sheng)物增殖步驟,專門針對(dui)(dui)以(yi)(yi)食(shi)(shi)品(pin)(pin)為(wei)(wei)(wei)(wei)傳播載體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)原(yuan)(yuan)。雖然這(zhe)些方(fang)(fang)(fang)法本身證明是可靠(kao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),但(dan)卻很(hen)費力、耗時(shi),需(xu)要4~7天(tian)才(cai)能(neng)完成(cheng)。因此,在(zai)需(xu)要及時(shi)、快速評價食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)微生(sheng)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全(quan)性時(shi),通(tong)常(chang)不(bu)被采(cai)用(yong)。隨(sui)著(zhu)DNA和抗體技術的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展,近10~15年(nian)間(jian)發展了無數改進(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法,其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)許多可以(yi)(yi)在(zai)48h內檢(jian)(jian)出沙門氏(shi)(shi)菌(jun),這(zhe)些方(fang)(fang)(fang)法通(tong)稱(cheng)為(wei)(wei)(wei)(wei)快速檢(jian)(jian)測。
利用(yong)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)反應(ying)(ying)的(de)(de)顯著特異(yi)性,來(lai)進(jin)行細菌(jun)(jun)的(de)(de)鑒別和血清學定(ding)型,已(yi)有半(ban)個多世紀的(de)(de)歷史。細菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)體(ti)(ti)或(huo)鞭(bian)毛抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)特異(yi)性抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)存(cun)在(zai)(zai),使(shi)得人們可以建立一些快速方法(fa)(fa)(fa)來(lai)檢測(ce)以食(shi)品(pin)為(wei)載體(ti)(ti)的(de)(de)病原(yuan)。已(yi)經建立的(de)(de)沙門氏菌(jun)(jun)免(mian)(mian)疫(yi)學檢測(ce)方法(fa)(fa)(fa)有許多種(zhong),大致可分(fen)(fen)(fen)為(wei)以酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ELISA),熒光抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)染(ran)色(免(mian)(mian)疫(yi)熒光法(fa)(fa)(fa)),同(tong)(tong)位(wei)素(su)標(biao)(biao)記(ji)(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(放射免(mian)(mian)疫(yi)試(shi)驗)為(wei)基(ji)(ji)礎(chu)的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)及(ji)(ji)其(qi)它多種(zhong)以抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)為(wei)基(ji)(ji)礎(chu),利用(yong)乳膠凝(ning)集、免(mian)(mian)疫(yi)傳感器(qi)、免(mian)(mian)疫(yi)擴散及(ji)(ji)免(mian)(mian)疫(yi)色譜技術的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)。但常(chang)規中最廣泛(fan)采用(yong)的(de)(de)是以雙位(wei)點ELISA技術即(ji)夾心ELISA為(wei)基(ji)(ji)礎(chu)的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)。此法(fa)(fa)(fa)改(gai)進(jin)后用(yong)有放射活(huo)性的(de)(de)同(tong)(tong)位(wei)素(su)替代(dai)標(biao)(biao)記(ji)(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),概括地說(shuo),是指(zhi)以固(gu)定(ding)在(zai)(zai)固(gu)體(ti)(ti)基(ji)(ji)質上的(de)(de)“捕(bu)(bu)捉”抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)來(lai)捕(bu)(bu)捉目(mu)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan),經洗(xi)滌(di)除去(qu)未結(jie)合的(de)(de)成(cheng)分(fen)(fen)(fen),加入(ru)第(di)二種(zhong)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),此者結(jie)合在(zai)(zai)捕(bu)(bu)捉到的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)不同(tong)(tong)位(wei)點上,第(di)二次洗(xi)滌(di)后加入(ru)酶(mei)(mei)作用(yong)基(ji)(ji)質,并令其(qi)與(yu)顏色成(cheng)分(fen)(fen)(fen)反應(ying)(ying),然后用(yong)分(fen)(fen)(fen)光光度法(fa)(fa)(fa)即(ji)很容易檢測(ce)到目(mu)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)。采用(yong)微量滴定(ding)板作為(wei)固(gu)態基(ji)(ji)質使(shi)反應(ying)(ying)形(xing)式標(biao)(biao)準(zhun)化,并促成(cheng)其(qi)自(zi)動化。
黎兆滾(gun)等(deng)人首(shou)次(ci)在國內(nei)(nei)口(kou)岸(an)系統應用(yong)(yong)(yong)(yong)微(wei)量(liang)板ELISA法(fa)(Salmonelletest1)對進(jin)出(chu)口(kou)動物產品(pin)(pin)(pin)(魚粉(fen)、肉骨粉(fen)等(deng))進(jin)行(xing)(xing)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)。該法(fa)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)預先(xian)(xian)包(bao)被了沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(A-E群)單克(ke)隆抗(kang)體的(de)(de)(de)(de)微(wei)量(liang)板,加入(ru)經增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li)的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin),反應后再(zai)加入(ru)一定(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)指示劑,作用(yong)(yong)(yong)(yong)畢(bi)后用(yong)(yong)(yong)(yong)酶標儀測(ce)定(ding)(ding)OD值(zhi)來(lai)判定(ding)(ding)結果(guo)(guo)。食物樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)經適當的(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li),也可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)此(ci)法(fa)進(jin)行(xing)(xing)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)。ELISA法(fa)檢(jian)出(chu)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)極限范圍在105~106個細胞/ml,因此(ci),要(yao)得出(chu)可(ke)(ke)(ke)靠的(de)(de)(de)(de)結果(guo)(guo),食物樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)首(shou)先(xian)(xian)必需進(jin)行(xing)(xing)預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)、選擇(ze)性(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),通常還要(yao)在含有D-甘露糖的(de)(de)(de)(de)肉湯(M肉湯)中進(jin)行(xing)(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),以(yi)促進(jin)鞭毛發育(yu)。總的(de)(de)(de)(de)來(lai)說,標準(zhun)的(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei),約需要(yao)經過(guo)(guo)(guo)40~48h的(de)(de)(de)(de)孵育(yu)才能完(wan)成。黎兆滾(gun)等(deng)人的(de)(de)(de)(de)微(wei)量(liang)板ELISA法(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)過(guo)(guo)(guo)程(cheng)(cheng)分三(san)步,共(gong)耗時(shi)(shi)24h:①選用(yong)(yong)(yong)(yong)營(ying)(ying)養肉湯進(jin)行(xing)(xing)預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(6h),使“致傷”、冷凍的(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)復蘇。②使用(yong)(yong)(yong)(yong)選擇(ze)性(xing)培養基RV進(jin)行(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(14h),使沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)大量(liang)繁(fan)殖,同時(shi)(shi)抑制(zhi)(zhi)其它雜菌(jun)(jun)(jun)(jun)生長。③使用(yong)(yong)(yong)(yong)營(ying)(ying)養肉湯(蛋白(bai)胨(dong)水)進(jin)行(xing)(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(4h),使沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)數量(liang)大大增(zeng)加。比(bi)上(shang)述標準(zhun)的(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)過(guo)(guo)(guo)程(cheng)(cheng)縮(suo)短了一半的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian)。ELISA方法(fa)本身(shen),則(ze)僅(jin)需要(yao)大約2h而(er)已(其中30min是(shi)操作時(shi)(shi)間(jian),90min是(shi)孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian))。相比(bi)之下,黎兆滾(gun)等(deng)人的(de)(de)(de)(de)方法(fa)可(ke)(ke)(ke)在27h內(nei)(nei)完(wan)成,比(bi)上(shang)述方法(fa)縮(suo)短了一半的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian),頗值(zhi)得推廣應用(yong)(yong)(yong)(yong)。最新式的(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)免(mian)(mian)(mian)疫(yi)學檢(jian)測(ce)法(fa),利(li)用(yong)(yong)(yong)(yong)經特異性(xing)抗(kang)體敏化的(de)(de)(de)(de)免(mian)(mian)(mian)疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)為基礎(chu)。幾滴樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加到(dao)卡(ka)片(pian)上(shang),結果(guo)(guo)可(ke)(ke)(ke)以(yi)直接用(yong)(yong)(yong)(yong)肉眼讀(du)出(chu)。免(mian)(mian)(mian)疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)極易操作,且由于無(wu)需要(yao)特殊(shu)設(she)備(bei),很適合小(xiao)型實(shi)驗室使用(yong)(yong)(yong)(yong)。盡管卡(ka)片(pian)檢(jian)測(ce)法(fa)與ELISA法(fa)一樣(yang)(yang)(yang)(yang)需要(yao)對樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)進(jin)行(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li),但(dan)它(卡(ka)片(pian)法(fa))本身(shen)通常需時(shi)(shi)不超(chao)過(guo)(guo)(guo)10min,如果(guo)(guo)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)黎兆滾(gun)等(deng)人的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)法(fa),則(ze)可(ke)(ke)(ke)使操作時(shi)(shi)間(jian)更為縮(suo)短。
細(xi)胞核(he)酸DNA和(he)RNA是唯一(yi)(yi)(yi)一(yi)(yi)(yi)類(lei)可(ke)(ke)以(yi)(yi)攜帶信息的(de)(de)(de)(de)大(da)分子。由于(yu)(yu)(yu)所(suo)有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)細(xi)胞都含有(you)(you)這(zhe)種分子,可(ke)(ke)以(yi)(yi)利用(yong)(yong)(yong)它(ta)(ta)作為(wei)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)靶(ba)。標(biao)(biao)靶(ba)通常是一(yi)(yi)(yi)個特異性(xing)(xing)(xing)核(he)酸序列(lie),它(ta)(ta)可(ke)(ke)通過以(yi)(yi)補體(ti)核(he)酸分子作為(wei)探(tan)針(zhen)來檢(jian)(jian)出。與免疫(yi)學方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)似,探(tan)針(zhen)也需(xu)(xu)要(yao)(yao)加附(fu)適當的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)記,如放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su)、酶或發(fa)光的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)識物。Fitts等人在食(shi)品沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)中(zhong)引(yin)入了(le)(le)第一(yi)(yi)(yi)代DNA—RNA雜交技(ji)術,此法(fa)(fa)(fa)(fa)應(ying)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)探(tan)針(zhen)含有(you)(you)用(yong)(yong)(yong)放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su)標(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)DNA片段(duan),其敏(min)感性(xing)(xing)(xing)高(gao)(gao),經大(da)約48h的(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)步驟(zou)后,檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)極(ji)限可(ke)(ke)達108個細(xi)菌(jun)(jun)/ml,但(dan)(dan)由于(yu)(yu)(yu)要(yao)(yao)使用(yong)(yong)(yong)放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su),只能(neng)(neng)在專門(men)的(de)(de)(de)(de)實驗室應(ying)用(yong)(yong)(yong),此方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)優點都被抵消了(le)(le)。為(wei)此,以(yi)(yi)核(he)酸雜交為(wei)基(ji)礎的(de)(de)(de)(de)第二代技(ji)術—比(bi)(bi)色(se)計(ji)已(yi)發(fa)展(zhan)起來。這(zhe)種方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)依賴(lai)于(yu)(yu)(yu)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)核(he)糖(tang)體(ti)RNA(rRNA)—核(he)糖(tang)體(ti)發(fa)育過程(cheng)中(zhong)儲(chu)存(cun)的(de)(de)(de)(de)核(he)酸成(cheng)(cheng)(cheng)分的(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)。核(he)糖(tang)體(ti)是細(xi)胞蛋(dan)白(bai)質合成(cheng)(cheng)(cheng)器的(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)(yi)部分,每個細(xi)菌(jun)(jun)細(xi)胞中(zhong)存(cun)在5000~20000個復制(zhi)(zhi)體(ti),而相(xiang)比(bi)(bi)之下染色(se)體(ti)DNA復制(zhi)(zhi)體(ti)僅2~10個。這(zhe)種天然富含rRNA標(biao)(biao)靶(ba)序列(lie)的(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)使得用(yong)(yong)(yong)無輻射(she)(she)計(ji)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)(cheng)為(wei)可(ke)(ke)能(neng)(neng),同時又保持了(le)(le)與放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)當或更(geng)高(gao)(gao)的(de)(de)(de)(de)敏(min)感性(xing)(xing)(xing)。其另一(yi)(yi)(yi)優點是由于(yu)(yu)(yu)rRNA為(wei)單鏈(而DNA為(wei)雙鏈),雜交前無需(xu)(xu)經過變性(xing)(xing)(xing)步驟(zou)。要(yao)(yao)得到陽(yang)性(xing)(xing)(xing)結果(guo),此法(fa)(fa)(fa)(fa)需(xu)(xu)要(yao)(yao)105個靶(ba)細(xi)胞/ml,因(yin)此對(dui)(dui)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)來說,需(xu)(xu)要(yao)(yao)進(jin)(jin)行預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)和(he)選擇性(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun),總共約50h。rRNA探(tan)針(zhen)法(fa)(fa)(fa)(fa)比(bi)(bi)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(酶聯免疫(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa))更(geng)耗時,但(dan)(dan)二者成(cheng)(cheng)(cheng)本相(xiang)近。食(shi)品細(xi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)最(zui)新進(jin)(jin)展(zhan)是在化學擴(kuo)(kuo)增(zeng)體(ti)系方(fang)面的(de)(de)(de)(de)發(fa)展(zhan),即聚(ju)合酶鏈反應(ying)(PCR),用(yong)(yong)(yong)該體(ti)系可(ke)(ke)對(dui)(dui)制(zhi)(zhi)備好的(de)(de)(de)(de)樣品進(jin)(jin)行細(xi)菌(jun)(jun)DNA擴(kuo)(kuo)增(zeng),以(yi)(yi)便更(geng)易于(yu)(yu)(yu)用(yong)(yong)(yong)諸如凝膠電(dian)泳(yong)法(fa)(fa)(fa)(fa)或比(bi)(bi)色(se)型ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)。用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)(yu)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)和(he)其它(ta)(ta)以(yi)(yi)食(shi)物為(wei)載體(ti)的(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)業已(yi)建立,其中(zhong)一(yi)(yi)(yi)些(xie)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)顯(xian)示了(le)(le)極(ji)好的(de)(de)(de)(de)敏(min)感性(xing)(xing)(xing)。但(dan)(dan)該法(fa)(fa)(fa)(fa)較難自動化,且必需(xu)(xu)經選擇性(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)以(yi)(yi)稀釋可(ke)(ke)能(neng)(neng)干擾檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)反應(ying)的(de)(de)(de)(de)某(mou)些(xie)成(cheng)(cheng)(cheng)分。一(yi)(yi)(yi)個完(wan)整的(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)PCR為(wei)基(ji)礎的(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa),需(xu)(xu)要(yao)(yao)2天才能(neng)(neng)完(wan)成(cheng)(cheng)(cheng),很大(da)程(cheng)度上抵銷了(le)(le)其高(gao)(gao)敏(min)感性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)優點,但(dan)(dan)這(zhe)種方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)對(dui)(dui)那(nei)些(xie)含沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)較少(shao)或沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)“致傷”嚴重難以(yi)(yi)復蘇而仍保有(you)(you)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)樣品尤其有(you)(you)效。