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沙門氏菌
#細菌# 0 0
沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生禽獸不同形式的總稱。據統計在世界各國的種類細菌性食物中毒中,沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。嬰兒、老年人、免疫功能低下的患者則可能因沙門氏菌進入血液而出現嚴重且危及生命的菌血癥,少數還會合并腦膜炎或骨髓炎。沙門氏菌有兩種是致命的,一種是腸道沙門氏菌,一種是傷寒沙門氏菌。
詳(xiang)細介紹 PROFILE +

沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌是(shi)一種(zhong)常(chang)見的(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)源性致(zhi)病(bing)菌。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌鑒定的(de)(de)(de)(de)(de)傳(chuan)統(tong)方法主(zhu)要是(shi)根據(ju)形(xing)態(tai)學特(te)征(zheng)、培養特(te)征(zheng)、生理生化特(te)征(zheng)、抗原特(te)征(zheng)、噬菌體(ti)特(te)征(zheng)等(deng)。1885年沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)等(deng)在霍(huo)亂流行時分(fen)離到豬霍(huo)亂沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌,故(gu)定名為(wei)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌屬(shu)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌屬(shu)有的(de)(de)(de)(de)(de)專(zhuan)對(dui)(dui)人類(lei)致(zhi)病(bing),有的(de)(de)(de)(de)(de)只對(dui)(dui)動(dong)物(wu)致(zhi)病(bing),也有對(dui)(dui)人和動(dong)物(wu)都致(zhi)病(bing)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌病(bing)是(shi)指(zhi)由各(ge)種(zhong)類(lei)型(xing)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌所引(yin)起(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)對(dui)(dui)人類(lei)、家(jia)畜以及野生禽獸不同(tong)形(xing)式的(de)(de)(de)(de)(de)總稱(cheng)。感染(ran)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌的(de)(de)(de)(de)(de)人或帶菌者(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)糞便污染(ran)食(shi)(shi)(shi)品,可使(shi)人發生食(shi)(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)。據(ju)統(tong)計在世界各(ge)國的(de)(de)(de)(de)(de)種(zhong)類(lei)細(xi)菌性食(shi)(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)中(zhong),沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌引(yin)起(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)常(chang)列(lie)榜(bang)首。我國內陸地區也以沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌為(wei)首位(wei)。

簡介

沙門氏菌(jun)病的病原體(ti)。屬腸(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)科,革蘭氏陰性腸(chang)道桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)。已發(fa)現的近一千種(或菌(jun)株)。按其抗原成分,可(ke)分為(wei)甲(jia)(jia)(jia)、乙、丙(bing)、丁(ding)(ding)、戊等基本菌(jun)組(zu)。其中與人體(ti)疾病有關的主要有甲(jia)(jia)(jia)組(zu)的副(fu)傷(shang)寒甲(jia)(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),乙組(zu)的副(fu)傷(shang)寒乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和鼠傷(shang)寒桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),丙(bing)組(zu)的副(fu)傷(shang)寒丙(bing)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和豬(zhu)霍亂桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),丁(ding)(ding)組(zu)的傷(shang)寒桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和腸(chang)炎桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)等。除傷(shang)寒桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)、副(fu)傷(shang)寒甲(jia)(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和副(fu)傷(shang)寒乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)引(yin)(yin)起人類的疾病外,大多數僅能引(yin)(yin)起家(jia)畜、鼠類和禽(qin)類等動(dong)物(wu)的疾病,但(dan)有時(shi)也可(ke)污染人類的食物(wu)而(er)引(yin)(yin)起食物(wu)中毒。

沙門(men)氏菌在(zai)水中不易(yi)繁(fan)殖,但可(ke)生存(cun)2-3周(zhou),冰箱中可(ke)生存(cun)3-4個月,在(zai)自(zi)然環境的糞便中可(ke)存(cun)活(huo)1-2個月。沙門(men)氏菌最(zui)適繁(fan)殖溫度為37℃,在(zai)20℃以上(shang)即能(neng)大量繁(fan)殖,因此,低溫儲存(cun)食品是一項重要預(yu)防措施。

沙門氏菌屬

菌(jun)體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽(ya)胞,一般無莢膜(mo),除(chu)雞(ji)白痢沙門氏(shi)菌(jun)和(he)雞(ji)傷(shang)寒沙門氏(shi)菌(jun)外,大多(duo)有周身鞭毛。營養要(yao)求(qiu)不(bu)(bu)高,分(fen)離培(pei)養常采(cai)用腸道選擇鑒別培(pei)養基。生(sheng)化反應對本(ben)屬菌(jun)的(de)(de)鑒別具有重要(yao)參(can)考(kao)意(yi)義(見表)。不(bu)(bu)液化明膠,不(bu)(bu)分(fen)解尿(niao)素,不(bu)(bu)產生(sheng)吲哚,不(bu)(bu)發酵乳(ru)糖和(he)蔗糖,能發酵葡萄糖、甘露醇(chun)、麥(mai)芽(ya)糖和(he)衛(wei)芽(ya)糖,大多(duo)產酸產氣,少數只產酸不(bu)(bu)產氣。VP試驗陰性(xing),有賴氨(an)酸脫(tuo)羧酶。DNA的(de)(de)G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不(bu)(bu)強,在60℃15分(fen)鐘(zhong)可(ke)被(bei)殺死。在水中存活2~3周。在5%的(de)(de)石炭(tan)酸中,5分(fen)鐘(zhong)死亡。

本屬(shu)(shu)菌(jun)按生(sheng)(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)分(fen)為4個亞(ya)屬(shu)(shu)。亞(ya)屬(shu)(shu)Ⅰ是生(sheng)(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)典型的和最(zui)常見的沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun);亞(ya)屬(shu)(shu)Ⅱ和Ⅳ是生(sheng)(sheng)化(hua)(hua)反應(ying)不(bu)典型的沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun);亞(ya)屬(shu)(shu)Ⅲ是亞(ya)利桑那沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)。

沙(sha)門氏菌(jun)具有復雜(za)的抗(kang)(kang)原(yuan)結構(gou),一(yi)般可分為菌(jun)體(O)抗(kang)(kang)原(yuan)、鞭毛(H)抗(kang)(kang)原(yuan)和表面(Vi)抗(kang)(kang)原(yuan)3種(zhong)。

理化特性

生化反應(ying)很活潑,能分解多種糖(tang)類和(he)醇。

培養特性

1)需(xu)氧及(ji)兼(jian)性(xing)厭氧菌(jun)。

2)在普通瓊(qiong)脂培(pei)養(yang)基上生長良好,培(pei)養(yang)24h后,形成(cheng)中等大(da)小、圓形、表面光(guang)滑、無色半透明、邊緣整齊(qi)的菌落,其菌落特征亦(yi)與大(da)腸桿菌相似(無糞臭味)。

3)鑒別(bie)培養基(麥康凱、SS、伊紅美(mei)藍):一般無色菌落(luo)。

4)三糖鐵瓊脂斜面(mian):斜面(mian)為紅(hong)色,底部變黑并產氣。

生化特性

1)發酵(jiao)葡萄糖(tang),麥芽(ya)糖(tang),甘露(lu)醇和山梨醇產氣;

2)不發酵乳糖(tang)、蔗(zhe)糖(tang)和側金盞花醇;

3)不(bu)產(chan)吲哚、V-P反應陰性;

4)不(bu)水(shui)解尿素和對苯丙氨酸不(bu)脫氨。

傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、雞(ji)傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌及一部(bu)分(fen)雞(ji)白痢沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌發酵糖不(bu)產氣,大多數雞(ji)白痢沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌不(bu)發酵麥芽糖;除雞(ji)白痢沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、豬傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、甲型(xing)副傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌、傷(shang)寒(han)(han)沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌和仙臺沙門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌等外(wai),均能利用枸櫞(yuan)酸鹽。

血清學特性

沙門氏菌具(ju)有(you)復雜的抗原(yuan)結構,一般沙門氏菌具(ju)有(you)菌體(O)抗原(yuan)、鞭毛(H)抗原(yuan)和(he)表面抗原(yuan)(莢膜(mo)或包膜(mo)抗原(yuan))三種抗原(yuan)。

傳播途徑

肉的污染

肉(rou)及其制品的(de)(de)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率美國(guo)為20%-25%、英國(guo)為9.9%、日本檢查進口家禽的(de)(de)污染(ran)率為10.3%,國(guo)內肉(rou)類(lei)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率在1.1%-39.5%。

蛋的污染

中國蛋及其制品(pin)沙門氏(shi)菌檢(jian)出率為(wei)3.9%-43.7%,由于吃蛋引起鼠(shu)傷(shang)寒病(bing)的病(bing)例(li)報告逐漸(jian)有增加的趨勢(shi)。

環境污染

食品在(zai)加工、運輸、出(chu)售過程中往往被沙(sha)(sha)門氏菌污染。沙(sha)(sha)門氏菌在(zai)糞便、土(tu)壤(rang)、食品、水(shui)中可生存5個月至2年之(zhi)久(jiu)。

傳播問題

恢復期患(huan)者(zhe)和無癥狀的帶菌(jun)者(zhe)也是常(chang)見(jian)的傳染(ran)源。

分布

廣泛分布于自然界,常常寄(ji)居在人(ren)和(he)(he)動物(wu)體內,特別(bie)是家禽、家畜及(ji)寵物(wu)的腸(chang)道(dao)中(zhong)。主要污染(ran)的食品有:肉和(he)(he)肉制(zhi)品、蛋和(he)(he)蛋制(zhi)品、奶和(he)(he)奶制(zhi)品等。由于沙門氏菌不分解(jie)蛋白質,食物(wu)被其(qi)污染(ran)后表面(mian)看起來似乎(hu)并沒有變化.

感染癥

沙門(men)氏菌感染(ran)癥為人畜(chu)共患感染(ran)性疾病,主要由(you)食用遭受污染(ran)的食物(wu)導致,是(shi)許多國家(jia)食物(wu)中毒的重要病源。

癥狀

典(dian)型癥狀(zhuang)包括發熱、惡心(xin)、嘔吐、腹瀉及腹部(bu)絞痛等(deng)癥狀(zhuang),通常(chang)在發熱后72小(xiao)時內(nei)會(hui)好(hao)轉。嬰兒、老年人(ren)、免疫功能低下的患者則(ze)可能因沙門氏菌進入血液而(er)出(chu)現嚴(yan)重(zhong)且危(wei)及生命(ming)的菌血癥,少數還會(hui)合并腦膜炎(yan)或骨髓炎(yan)。

治療

一般沙門氏菌造成的腸胃炎不需(xu)要給予(yu)(yu)抗生(sheng)素治療(liao);而以補充水分與電解(jie)質為主(zhu);但對于新(xin)生(sheng)兒、免(mian)疫功能低(di)下(xia)患(huan)者(zhe)及特殊傷員;則需(xu)要視(shi)情(qing)況紿(dai)予(yu)(yu)抗生(sheng)素治療(liao)。

預防

1、餐前、便后、接觸(chu)(chu)食物前、接觸(chu)(chu)動物或生蛋后應仔細(xi)洗凈雙(shuang)手。

2、處理生食(shi)和熟食(shi)的砧(zhen)板要分開。

3、食物要熟透再(zai)吃(尤其是雞(ji)蛋與家禽(qin)類)。

4、非現做現吃的食物應(ying)以保鮮膜包覆后放進冰箱保存,再次食用前應(ying)加熱(re)或煮熟。

5、撲滅并(bing)阻隔(ge)蒼(cang)蠅等(deng)病媒。被蒼(cang)蠅沾染、過(guo)期或腐敗(bai)的不潔食物(wu)均應(ying)丟(diu)棄,切勿食用。

6、水塔應經常清洗、消毒。

7、旅行或(huo)野營時的飲(yin)用水應煮沸并消(xiao)毒。

8、如有(you)嘔(ou)吐、腹瀉或(huo)發熱等癥(zheng)狀,應盡快就醫。

感染

沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)(shi)美國(guo)(guo)(guo)(guo)食(shi)物中(zhong)(zhong)毒致死(si)的(de)(de)(de)主要(yao)原因(yin)。美國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)對這種病(bing)菌(jun)(jun)(jun)一(yi)點都(dou)不(bu)(bu)(bu)陌生(sheng)(sheng)(sheng),每(mei)(mei)年(nian)(nian)全(quan)國(guo)(guo)(guo)(guo)大約報告40000例(li)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)病(bing)例(li)。但實(shi)際的(de)(de)(de)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)人(ren)(ren)數可(ke)能要(yao)達20倍(bei)以(yi)上,因(yin)為(wei)許多輕型(xing)病(bing)人(ren)(ren)可(ke)能未確診,據不(bu)(bu)(bu)完全(quan)統(tong)計,每(mei)(mei)年(nian)(nian)大約有1000人(ren)(ren)死(si)于急性沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)。但是(shi)(shi),以(yi)前各州爆發(fa)的(de)(de)(de)疫情幾乎都(dou)與(yu)人(ren)(ren)們(men)吃了(le)染(ran)(ran)(ran)上沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)肉(rou)類、蛋(dan)(dan)(dan)類、乳類有關,但迄今為(wei)止,很少(shao)聽(ting)說吃蔬果(guo)大面積(ji)受沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)(ran)甚(shen)(shen)至(zhi)在(zai)(zai)(zai)人(ren)(ren)群中(zhong)(zhong)引發(fa)大疫情的(de)(de)(de)。對此,周福(fu)生(sheng)(sheng)(sheng)教授(shou)解釋說,這可(ke)能是(shi)(shi)西(xi)(xi)紅柿(shi)在(zai)(zai)(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)的(de)(de)(de)過程中(zhong)(zhong),由(you)于空氣(qi)中(zhong)(zhong)紫(zi)外線不(bu)(bu)(bu)夠強烈,植物在(zai)(zai)(zai)灌(guan)溉過程或(huo)因(yin)土壤中(zhong)(zhong)含有沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),這樣(yang)才(cai)使西(xi)(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)表皮上沾(zhan)染(ran)(ran)(ran)了(le)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),加上不(bu)(bu)(bu)少(shao)人(ren)(ren)有生(sheng)(sheng)(sheng)食(shi)西(xi)(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)習(xi)慣(guan),如(ru)果(guo)沒(mei)有清(qing)洗干凈,就完全(quan)有可(ke)能發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)。不(bu)(bu)(bu)光是(shi)(shi)食(shi)用西(xi)(xi)紅柿(shi),其他瓜(gua)果(guo)蔬菜(cai)也(ye)一(yi)樣(yang)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)主要(yao)污(wu)染(ran)(ran)(ran)肉(rou)類食(shi)品,魚、禽、奶、蛋(dan)(dan)(dan)類食(shi)品也(ye)可(ke)受此菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)(ran)(ran)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)物中(zhong)(zhong)毒全(quan)年(nian)(nian)都(dou)可(ke)發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng),吃了(le)未煮透(tou)的(de)(de)(de)病(bing)、死(si)牲畜肉(rou)或(huo)在(zai)(zai)(zai)屠宰后其他環節污(wu)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)牲畜肉(rou)是(shi)(shi)引起沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)物中(zhong)(zhong)毒的(de)(de)(de)最主要(yao)原因(yin)。有食(shi)品專(zhuan)家指出美國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)吃雞蛋(dan)(dan)(dan)的(de)(de)(de)習(xi)慣(guan)與(yu)國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)不(bu)(bu)(bu)同,他們(men)喜歡吃半(ban)熟的(de)(de)(de)雞蛋(dan)(dan)(dan)甚(shen)(shen)至(zhi)是(shi)(shi)生(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)(dan)(dan),所以(yi)一(yi)旦雞蛋(dan)(dan)(dan)里含有沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)幾率就比較高。“在(zai)(zai)(zai)國(guo)(guo)(guo)(guo)內,生(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)(dan)(dan)里含有沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)其實(shi)并(bing)不(bu)(bu)(bu)奇怪,只不(bu)(bu)(bu)過國(guo)(guo)(guo)(guo)人(ren)(ren)喜歡將雞蛋(dan)(dan)(dan)煮熟吃,這樣(yang)就大大減少(shao)了(le)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)幾率。”

癥狀及原因

由(you)沙門氏菌(jun)(jun)引起的(de)食品(pin)中(zhong)毒癥狀主要有惡心、嘔吐、腹痛(tong)、頭痛(tong)、畏寒和(he)(he)腹瀉等,還伴有乏力、肌(ji)肉酸痛(tong)、視覺模糊、中(zhong)等程度發熱、躁動不(bu)安(an)和(he)(he)嗜睡,延續時間2~3d,平(ping)均致(zhi)死率為4.1%。其主要原因是由(you)于攝入了(le)含(han)有大(da)量(liang)沙門氏菌(jun)(jun)屬的(de)非(fei)寄主專一(yi)(yi)性菌(jun)(jun)種(zhong)或(huo)血清型的(de)食品(pin)所引起的(de)。在攝入含(han)毒食品(pin)之后.癥狀一(yi)(yi)般在12~14h內出現,有些潛伏期較長。

預防措施

防止沙門(men)氏(shi)菌(jun)污染食品(pin);控制食品(pin)中(zhong)沙門(men)氏(shi)菌(jun)的繁殖(zhi);加(jia)熱(re)以徹底殺滅病原菌(jun)。

沙門氏菌(jun)不耐(nai)高溫,食物的中心溫度(du)達70℃以上,持(chi)續(xu)5分鐘一(yi)般(ban)都可以殺死包括沙門氏菌(jun)等常見食源(yuan)性致病(bing)菌(jun)。家庭中一(yi)般(ban)的熱(re)處(chu)理烹調方式都可有效殺滅該菌(jun)。

檢測方法

前增菌

稱(cheng)取25g(mL)樣(yang)品放入(ru)盛(sheng)有225 mL BPW的(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)杯中,以(yi)8000 r/min~10 000 r/min均(jun)質(zhi)(zhi)1min~2min,或(huo)置于盛(sheng)有225 mL BPW的(de)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)袋(dai)中,用(yong)(yong)拍擊式均(jun)質(zhi)(zhi)器拍打1min~2min。若樣(yang)品為液態,不需要(yao)均(jun)質(zhi)(zhi),振蕩混(hun)勻(yun)。如(ru)需測(ce)定pH值,用(yong)(yong)1mol/mL無(wu)(wu)菌(jun)(jun)NaOH或(huo)HCl調pH至6.8±0.2。無(wu)(wu)菌(jun)(jun)操作將樣(yang)品轉至500mL錐形瓶(ping)中,如(ru)使用(yong)(yong)均(jun)質(zhi)(zhi)袋(dai),可直接進行培(pei)養(yang),于36 ℃±1℃培(pei)養(yang)8h~18h。

如為冷凍產品,應在(zai)45℃以下不超(chao)過15min,或(huo)2℃~5℃不超(chao)過18h解凍。

增菌

輕輕搖(yao)動培養過的樣品混合物,移取1mL,轉(zhuan)種于10mL TTB內(nei),于42℃±1℃培養18h~24h。同時,另取1mL,轉(zhuan)種于10 mL SC內(nei),于36℃±1℃培養18h~24h。

分離

分(fen)別用接種環取(qu)增菌(jun)液1環,劃線接種于一(yi)個(ge)BS瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)和一(yi)個(ge)XLD瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)(或(huo)HE瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)或(huo)沙門(men)(men)氏菌(jun)屬顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban))。于36℃±1℃分(fen)別培養(yang)18h~24h(XLD瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)、HE瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)、沙門(men)(men)氏菌(jun)屬顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban))或(huo)40h~48h (BS瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)),觀察各(ge)個(ge)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)上生(sheng)長的菌(jun)落,各(ge)個(ge)平(ping)(ping)(ping)(ping)板(ban)上的菌(jun)落特征見表1。

表 1 沙(sha)門(men)氏菌(jun)屬在不同選(xuan)擇(ze)性瓊脂平板上(shang)的菌(jun)落(luo)特征

選擇性瓊(qiong)脂平(ping)板 沙(sha)門氏菌

BS 瓊脂 菌(jun)落(luo)為黑色(se)有(you)金屬光澤、棕褐色(se)或灰色(se),菌(jun)落(luo)周圍培(pei)養基可呈(cheng)黑色(se)或棕色(se);有(you)些(xie)菌(jun)株形成灰綠色(se)的(de)菌(jun)落(luo),周圍培(pei)養基不變。

HE 瓊脂(zhi) 藍綠色(se)(se)(se)或(huo)(huo)藍色(se)(se)(se),多(duo)數菌落中心黑(hei)(hei)色(se)(se)(se)或(huo)(huo)幾乎全黑(hei)(hei)色(se)(se)(se);有些菌株為(wei)黃色(se)(se)(se),中心黑(hei)(hei)色(se)(se)(se)或(huo)(huo)幾乎全黑(hei)(hei)色(se)(se)(se)。

XLD 瓊(qiong)脂 菌落(luo)呈(cheng)粉(fen)紅色(se),帶(dai)(dai)(dai)或不(bu)帶(dai)(dai)(dai)黑(hei)色(se)中(zhong)心,有些(xie)菌株(zhu)可呈(cheng)現大的帶(dai)(dai)(dai)光澤的黑(hei)色(se)中(zhong)心,或呈(cheng)現全部黑(hei)色(se)的菌落(luo);有些(xie)菌株(zhu)為黃色(se)菌落(luo),帶(dai)(dai)(dai)或不(bu)帶(dai)(dai)(dai)黑(hei)色(se)中(zhong)心。

沙門氏菌屬顯色(se)培養 按照(zhao)顯色(se)培養基的說明進行判定。

自19世紀后期,沙門氏(shi)(shi)菌(jun)首次被鑒定(ding)為(wei)(wei)(wei)(wei)人(ren)類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種病(bing)原(yuan)(yuan)以(yi)(yi)來,檢(jian)(jian)測方(fang)(fang)(fang)法學都是建立在(zai)采(cai)取感(gan)染(ran)病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便或(huo)血液作(zuo)為(wei)(wei)(wei)(wei)臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎上。此后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年(nian)間(jian),用(yong)于從食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)沙門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法實質上與(yu)那(nei)些用(yong)于臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法是相同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但(dan)至少有三個因素限制(zhi)了用(yong)于臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法應(ying)用(yong)在(zai)食(shi)(shi)品(pin)(pin)分(fen)析上。第一(yi)(yi),通(tong)常(chang),沙門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)水平在(zai)污染(ran)食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)比有感(gan)染(ran)病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)料中(zhong)(zhong)(zhong)要低(di)很(hen)多;第二,食(shi)(shi)品(pin)(pin)本身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性質會干(gan)擾病(bing)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測,例(li)如,某些食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)固有菌(jun)群可能(neng)處在(zai)一(yi)(yi)個很(hen)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水平,從而影響特(te)定(ding)細菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選(xuan)擇(ze)性分(fen)離(li)和鑒定(ding);第三,與(yu)臨床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是,經(jing)過加工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)(pin),由于加熱、干(gan)燥、高含(han)鹽(yan)量(liang)、酸(suan)和冷凍(dong)等(deng)因素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong),其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙門氏(shi)(shi)菌(jun)受(shou)到(dao)了尚(shang)不(bu)致命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷(shang)或(huo)稱(cheng)“致傷(shang)”。這(zhe)就形成(cheng)了一(yi)(yi)個具有不(bu)同生(sheng)長特(te)性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細菌(jun)群。這(zhe)種現象對(dui)(dui)那(nei)些希望從食(shi)(shi)物樣(yang)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)出沙門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)(pin)分(fen)析家來說有很(hen)大影響,因為(wei)(wei)(wei)(wei)在(zai)選(xuan)擇(ze)培養基(ji)上直接培養“致傷(shang)”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙門氏(shi)(shi)菌(jun)通(tong)常(chang)是以(yi)(yi)細菌(jun)死(si)亡和試驗失敗而告終(zhong)。為(wei)(wei)(wei)(wei)克服這(zhe)些困難,人(ren)們建立了一(yi)(yi)種簡單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生(sheng)物增殖步驟,專門針對(dui)(dui)以(yi)(yi)食(shi)(shi)品(pin)(pin)為(wei)(wei)(wei)(wei)傳播載體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)原(yuan)(yuan)。雖然這(zhe)些方(fang)(fang)(fang)法本身證明是可靠(kao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),但(dan)卻很(hen)費力、耗時(shi),需(xu)要4~7天(tian)才(cai)能(neng)完成(cheng)。因此,在(zai)需(xu)要及時(shi)、快速評價食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)微生(sheng)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全(quan)性時(shi),通(tong)常(chang)不(bu)被采(cai)用(yong)。隨(sui)著(zhu)DNA和抗體技術的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展,近10~15年(nian)間(jian)發展了無數改進(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法,其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)許多可以(yi)(yi)在(zai)48h內檢(jian)(jian)出沙門氏(shi)(shi)菌(jun),這(zhe)些方(fang)(fang)(fang)法通(tong)稱(cheng)為(wei)(wei)(wei)(wei)快速檢(jian)(jian)測。

抗體檢測

利用(yong)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)反應(ying)(ying)的(de)(de)顯著特異(yi)性,來(lai)進(jin)行細菌(jun)(jun)的(de)(de)鑒別和血清學定(ding)型,已(yi)有半(ban)個多世紀的(de)(de)歷史。細菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)體(ti)(ti)或(huo)鞭(bian)毛抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)特異(yi)性抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)存(cun)在(zai)(zai),使(shi)得人們可以建立一些快速方法(fa)(fa)(fa)來(lai)檢測(ce)以食(shi)品(pin)為(wei)載體(ti)(ti)的(de)(de)病原(yuan)。已(yi)經建立的(de)(de)沙門氏菌(jun)(jun)免(mian)(mian)疫(yi)學檢測(ce)方法(fa)(fa)(fa)有許多種(zhong),大致可分(fen)(fen)(fen)為(wei)以酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ELISA),熒光抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)染(ran)色(免(mian)(mian)疫(yi)熒光法(fa)(fa)(fa)),同(tong)(tong)位(wei)素(su)標(biao)(biao)記(ji)(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(放射免(mian)(mian)疫(yi)試(shi)驗)為(wei)基(ji)(ji)礎(chu)的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)及(ji)(ji)其(qi)它多種(zhong)以抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)為(wei)基(ji)(ji)礎(chu),利用(yong)乳膠凝(ning)集、免(mian)(mian)疫(yi)傳感器(qi)、免(mian)(mian)疫(yi)擴散及(ji)(ji)免(mian)(mian)疫(yi)色譜技術的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)。但常(chang)規中最廣泛(fan)采用(yong)的(de)(de)是以雙位(wei)點ELISA技術即(ji)夾心ELISA為(wei)基(ji)(ji)礎(chu)的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)。此法(fa)(fa)(fa)改(gai)進(jin)后用(yong)有放射活(huo)性的(de)(de)同(tong)(tong)位(wei)素(su)替代(dai)標(biao)(biao)記(ji)(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),概括地說(shuo),是指(zhi)以固(gu)定(ding)在(zai)(zai)固(gu)體(ti)(ti)基(ji)(ji)質上的(de)(de)“捕(bu)(bu)捉”抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)來(lai)捕(bu)(bu)捉目(mu)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan),經洗(xi)滌(di)除去(qu)未結(jie)合的(de)(de)成(cheng)分(fen)(fen)(fen),加入(ru)第(di)二種(zhong)酶(mei)(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),此者結(jie)合在(zai)(zai)捕(bu)(bu)捉到的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)不同(tong)(tong)位(wei)點上,第(di)二次洗(xi)滌(di)后加入(ru)酶(mei)(mei)作用(yong)基(ji)(ji)質,并令其(qi)與(yu)顏色成(cheng)分(fen)(fen)(fen)反應(ying)(ying),然后用(yong)分(fen)(fen)(fen)光光度法(fa)(fa)(fa)即(ji)很容易檢測(ce)到目(mu)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)。采用(yong)微量滴定(ding)板作為(wei)固(gu)態基(ji)(ji)質使(shi)反應(ying)(ying)形(xing)式標(biao)(biao)準(zhun)化,并促成(cheng)其(qi)自(zi)動化。

黎兆滾(gun)等(deng)人首(shou)次(ci)在國內(nei)(nei)口(kou)岸(an)系統應用(yong)(yong)(yong)(yong)微(wei)量(liang)板ELISA法(fa)(Salmonelletest1)對進(jin)出(chu)口(kou)動物產品(pin)(pin)(pin)(魚粉(fen)、肉骨粉(fen)等(deng))進(jin)行(xing)(xing)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)。該法(fa)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)預先(xian)(xian)包(bao)被了沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(A-E群)單克(ke)隆抗(kang)體的(de)(de)(de)(de)微(wei)量(liang)板,加入(ru)經增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li)的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin),反應后再(zai)加入(ru)一定(ding)(ding)的(de)(de)(de)(de)指示劑,作用(yong)(yong)(yong)(yong)畢(bi)后用(yong)(yong)(yong)(yong)酶標儀測(ce)定(ding)(ding)OD值(zhi)來(lai)判定(ding)(ding)結果(guo)(guo)。食物樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)經適當的(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li),也可(ke)(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)此(ci)法(fa)進(jin)行(xing)(xing)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)。ELISA法(fa)檢(jian)出(chu)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)極限范圍在105~106個細胞/ml,因此(ci),要(yao)得出(chu)可(ke)(ke)(ke)靠的(de)(de)(de)(de)結果(guo)(guo),食物樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)首(shou)先(xian)(xian)必需進(jin)行(xing)(xing)預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)、選擇(ze)性(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),通常還要(yao)在含有D-甘露糖的(de)(de)(de)(de)肉湯(M肉湯)中進(jin)行(xing)(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),以(yi)促進(jin)鞭毛發育(yu)。總的(de)(de)(de)(de)來(lai)說,標準(zhun)的(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei),約需要(yao)經過(guo)(guo)(guo)40~48h的(de)(de)(de)(de)孵育(yu)才能完(wan)成。黎兆滾(gun)等(deng)人的(de)(de)(de)(de)微(wei)量(liang)板ELISA法(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)過(guo)(guo)(guo)程(cheng)(cheng)分三(san)步,共(gong)耗時(shi)(shi)24h:①選用(yong)(yong)(yong)(yong)營(ying)(ying)養肉湯進(jin)行(xing)(xing)預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(6h),使“致傷”、冷凍的(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)復蘇。②使用(yong)(yong)(yong)(yong)選擇(ze)性(xing)培養基RV進(jin)行(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(14h),使沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)大量(liang)繁(fan)殖,同時(shi)(shi)抑制(zhi)(zhi)其它雜菌(jun)(jun)(jun)(jun)生長。③使用(yong)(yong)(yong)(yong)營(ying)(ying)養肉湯(蛋白(bai)胨(dong)水)進(jin)行(xing)(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(4h),使沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)數量(liang)大大增(zeng)加。比(bi)上(shang)述標準(zhun)的(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)過(guo)(guo)(guo)程(cheng)(cheng)縮(suo)短了一半的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian)。ELISA方法(fa)本身(shen),則(ze)僅(jin)需要(yao)大約2h而(er)已(其中30min是(shi)操作時(shi)(shi)間(jian),90min是(shi)孵育(yu)時(shi)(shi)間(jian))。相比(bi)之下,黎兆滾(gun)等(deng)人的(de)(de)(de)(de)方法(fa)可(ke)(ke)(ke)在27h內(nei)(nei)完(wan)成,比(bi)上(shang)述方法(fa)縮(suo)短了一半的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian),頗值(zhi)得推廣應用(yong)(yong)(yong)(yong)。最新式的(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)免(mian)(mian)(mian)疫(yi)學檢(jian)測(ce)法(fa),利(li)用(yong)(yong)(yong)(yong)經特異性(xing)抗(kang)體敏化的(de)(de)(de)(de)免(mian)(mian)(mian)疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)為基礎(chu)。幾滴樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加到(dao)卡(ka)片(pian)上(shang),結果(guo)(guo)可(ke)(ke)(ke)以(yi)直接用(yong)(yong)(yong)(yong)肉眼讀(du)出(chu)。免(mian)(mian)(mian)疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)極易操作,且由于無(wu)需要(yao)特殊(shu)設(she)備(bei),很適合小(xiao)型實(shi)驗室使用(yong)(yong)(yong)(yong)。盡管卡(ka)片(pian)檢(jian)測(ce)法(fa)與ELISA法(fa)一樣(yang)(yang)(yang)(yang)需要(yao)對樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)進(jin)行(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li),但(dan)它(卡(ka)片(pian)法(fa))本身(shen)通常需時(shi)(shi)不超(chao)過(guo)(guo)(guo)10min,如果(guo)(guo)采(cai)用(yong)(yong)(yong)(yong)黎兆滾(gun)等(deng)人的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)法(fa),則(ze)可(ke)(ke)(ke)使操作時(shi)(shi)間(jian)更為縮(suo)短。

核酸法

細(xi)胞核(he)酸DNA和(he)RNA是唯一(yi)(yi)(yi)一(yi)(yi)(yi)類(lei)可(ke)(ke)以(yi)(yi)攜帶信息的(de)(de)(de)(de)大(da)分子。由于(yu)(yu)(yu)所(suo)有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)細(xi)胞都含有(you)(you)這(zhe)種分子,可(ke)(ke)以(yi)(yi)利用(yong)(yong)(yong)它(ta)(ta)作為(wei)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)靶(ba)。標(biao)(biao)靶(ba)通常是一(yi)(yi)(yi)個特異性(xing)(xing)(xing)核(he)酸序列(lie),它(ta)(ta)可(ke)(ke)通過以(yi)(yi)補體(ti)核(he)酸分子作為(wei)探(tan)針(zhen)來檢(jian)(jian)出。與免疫(yi)學方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)似,探(tan)針(zhen)也需(xu)(xu)要(yao)(yao)加附(fu)適當的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)記,如放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su)、酶或發(fa)光的(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)識物。Fitts等人在食(shi)品沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)中(zhong)引(yin)入了(le)(le)第一(yi)(yi)(yi)代DNA—RNA雜交技(ji)術,此法(fa)(fa)(fa)(fa)應(ying)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)探(tan)針(zhen)含有(you)(you)用(yong)(yong)(yong)放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su)標(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)DNA片段(duan),其敏(min)感性(xing)(xing)(xing)高(gao)(gao),經大(da)約48h的(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)步驟(zou)后,檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)極(ji)限可(ke)(ke)達108個細(xi)菌(jun)(jun)/ml,但(dan)(dan)由于(yu)(yu)(yu)要(yao)(yao)使用(yong)(yong)(yong)放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su),只能(neng)(neng)在專門(men)的(de)(de)(de)(de)實驗室應(ying)用(yong)(yong)(yong),此方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)優點都被抵消了(le)(le)。為(wei)此,以(yi)(yi)核(he)酸雜交為(wei)基(ji)礎的(de)(de)(de)(de)第二代技(ji)術—比(bi)(bi)色(se)計(ji)已(yi)發(fa)展(zhan)起來。這(zhe)種方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)依賴(lai)于(yu)(yu)(yu)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)核(he)糖(tang)體(ti)RNA(rRNA)—核(he)糖(tang)體(ti)發(fa)育過程(cheng)中(zhong)儲(chu)存(cun)的(de)(de)(de)(de)核(he)酸成(cheng)(cheng)(cheng)分的(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)。核(he)糖(tang)體(ti)是細(xi)胞蛋(dan)白(bai)質合成(cheng)(cheng)(cheng)器的(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)(yi)部分,每個細(xi)菌(jun)(jun)細(xi)胞中(zhong)存(cun)在5000~20000個復制(zhi)(zhi)體(ti),而相(xiang)比(bi)(bi)之下染色(se)體(ti)DNA復制(zhi)(zhi)體(ti)僅2~10個。這(zhe)種天然富含rRNA標(biao)(biao)靶(ba)序列(lie)的(de)(de)(de)(de)情(qing)況(kuang)使得用(yong)(yong)(yong)無輻射(she)(she)計(ji)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)成(cheng)(cheng)(cheng)為(wei)可(ke)(ke)能(neng)(neng),同時又保持了(le)(le)與放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)(wei)素(su)(su)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)當或更(geng)高(gao)(gao)的(de)(de)(de)(de)敏(min)感性(xing)(xing)(xing)。其另一(yi)(yi)(yi)優點是由于(yu)(yu)(yu)rRNA為(wei)單鏈(而DNA為(wei)雙鏈),雜交前無需(xu)(xu)經過變性(xing)(xing)(xing)步驟(zou)。要(yao)(yao)得到陽(yang)性(xing)(xing)(xing)結果(guo),此法(fa)(fa)(fa)(fa)需(xu)(xu)要(yao)(yao)105個靶(ba)細(xi)胞/ml,因(yin)此對(dui)(dui)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)來說,需(xu)(xu)要(yao)(yao)進(jin)(jin)行預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)和(he)選擇性(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun),總共約50h。rRNA探(tan)針(zhen)法(fa)(fa)(fa)(fa)比(bi)(bi)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(酶聯免疫(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa))更(geng)耗時,但(dan)(dan)二者成(cheng)(cheng)(cheng)本相(xiang)近。食(shi)品細(xi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)最(zui)新進(jin)(jin)展(zhan)是在化學擴(kuo)(kuo)增(zeng)體(ti)系方(fang)面的(de)(de)(de)(de)發(fa)展(zhan),即聚(ju)合酶鏈反應(ying)(PCR),用(yong)(yong)(yong)該體(ti)系可(ke)(ke)對(dui)(dui)制(zhi)(zhi)備好的(de)(de)(de)(de)樣品進(jin)(jin)行細(xi)菌(jun)(jun)DNA擴(kuo)(kuo)增(zeng),以(yi)(yi)便更(geng)易于(yu)(yu)(yu)用(yong)(yong)(yong)諸如凝膠電(dian)泳(yong)法(fa)(fa)(fa)(fa)或比(bi)(bi)色(se)型ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)。用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)(yu)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)和(he)其它(ta)(ta)以(yi)(yi)食(shi)物為(wei)載體(ti)的(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)業已(yi)建立,其中(zhong)一(yi)(yi)(yi)些(xie)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)顯(xian)示了(le)(le)極(ji)好的(de)(de)(de)(de)敏(min)感性(xing)(xing)(xing)。但(dan)(dan)該法(fa)(fa)(fa)(fa)較難自動化,且必需(xu)(xu)經選擇性(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)以(yi)(yi)稀釋可(ke)(ke)能(neng)(neng)干擾檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)(ce)(ce)反應(ying)的(de)(de)(de)(de)某(mou)些(xie)成(cheng)(cheng)(cheng)分。一(yi)(yi)(yi)個完(wan)整的(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)PCR為(wei)基(ji)礎的(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa),需(xu)(xu)要(yao)(yao)2天才能(neng)(neng)完(wan)成(cheng)(cheng)(cheng),很大(da)程(cheng)度上抵銷了(le)(le)其高(gao)(gao)敏(min)感性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)優點,但(dan)(dan)這(zhe)種方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)對(dui)(dui)那(nei)些(xie)含沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)較少(shao)或沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)“致傷”嚴重難以(yi)(yi)復蘇而仍保有(you)(you)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)樣品尤其有(you)(you)效。

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