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沙門氏菌
#細菌# 0 0
沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生禽獸不同形式的總稱。據統計在世界各國的種類細菌性食物中毒中,沙門氏菌引起的食物中毒常列榜首。嬰兒、老年人、免疫功能低下的患者則可能因沙門氏菌進入血液而出現嚴重且危及生命的菌血癥,少數還會合并腦膜炎或骨髓炎。沙門氏菌有兩種是致命的,一種是腸道沙門氏菌,一種是傷寒沙門氏菌。
詳細介紹 PROFILE +

沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)是一種常見的(de)食(shi)源(yuan)性致病(bing)(bing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)鑒定的(de)傳(chuan)統方法主要(yao)是根據形態學特(te)征(zheng)、培養特(te)征(zheng)、生理(li)生化特(te)征(zheng)、抗原特(te)征(zheng)、噬菌(jun)(jun)(jun)(jun)體特(te)征(zheng)等(deng)。1885年(nian)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏等(deng)在(zai)霍亂(luan)流行時分離到豬霍亂(luan)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun),故定名為沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)屬(shu)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)屬(shu)有的(de)專對(dui)(dui)人(ren)類(lei)(lei)致病(bing)(bing),有的(de)只對(dui)(dui)動物(wu)致病(bing)(bing),也(ye)有對(dui)(dui)人(ren)和動物(wu)都致病(bing)(bing)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)病(bing)(bing)是指由各種類(lei)(lei)型沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)所引起(qi)的(de)對(dui)(dui)人(ren)類(lei)(lei)、家畜以及(ji)野生禽(qin)獸不同(tong)形式的(de)總稱(cheng)。感染沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)人(ren)或帶(dai)菌(jun)(jun)(jun)(jun)者的(de)糞便污染食(shi)品,可使人(ren)發生食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)。據統計在(zai)世(shi)界各國的(de)種類(lei)(lei)細菌(jun)(jun)(jun)(jun)性食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)中(zhong),沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)引起(qi)的(de)食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)常列榜(bang)首。我(wo)國內陸地區也(ye)以沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)為首位。

簡介

沙門氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)病(bing)的病(bing)原(yuan)體。屬腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)科,革(ge)蘭氏陰性腸道桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)。已(yi)發現的近一千種(或菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)株)。按其抗(kang)原(yuan)成分,可分為甲、乙(yi)、丙、丁(ding)、戊(wu)等基本菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)組(zu)。其中與人體疾病(bing)有關的主要有甲組(zu)的副(fu)傷(shang)(shang)寒甲桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),乙(yi)組(zu)的副(fu)傷(shang)(shang)寒乙(yi)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)鼠(shu)傷(shang)(shang)寒桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丙組(zu)的副(fu)傷(shang)(shang)寒丙桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)豬霍亂桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丁(ding)組(zu)的傷(shang)(shang)寒桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)腸炎桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)等。除傷(shang)(shang)寒桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)、副(fu)傷(shang)(shang)寒甲桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)副(fu)傷(shang)(shang)寒乙(yi)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)引(yin)起(qi)人類(lei)(lei)的疾病(bing)外,大(da)多數僅能引(yin)起(qi)家畜、鼠(shu)類(lei)(lei)和(he)禽類(lei)(lei)等動物(wu)的疾病(bing),但(dan)有時(shi)也可污染人類(lei)(lei)的食(shi)物(wu)而引(yin)起(qi)食(shi)物(wu)中毒。

沙門氏(shi)菌在水中不易繁殖,但可生存2-3周,冰箱中可生存3-4個月,在自然環境(jing)的糞便中可存活1-2個月。沙門氏(shi)菌最適(shi)繁殖溫度為(wei)37℃,在20℃以上即能大量繁殖,因此(ci),低溫儲存食(shi)品是(shi)一項重要(yao)預防措施。

沙門氏菌屬

菌(jun)體(ti)大(da)小(0.6~0.9)×(1~3)微米無(wu)芽(ya)胞(bao),一(yi)般(ban)無(wu)莢(jia)膜,除雞白痢沙門(men)(men)氏菌(jun)和(he)(he)雞傷(shang)寒沙門(men)(men)氏菌(jun)外,大(da)多有(you)周(zhou)身鞭毛(mao)。營養要求(qiu)不高(gao),分(fen)(fen)離培(pei)養常采用腸(chang)道選擇鑒別培(pei)養基(ji)。生化(hua)反應對本(ben)屬菌(jun)的(de)(de)鑒別具有(you)重(zhong)要參考意義(見表)。不液化(hua)明膠,不分(fen)(fen)解(jie)尿素,不產(chan)生吲哚,不發(fa)酵乳糖(tang)和(he)(he)蔗糖(tang),能發(fa)酵葡萄糖(tang)、甘(gan)露醇、麥芽(ya)糖(tang)和(he)(he)衛芽(ya)糖(tang),大(da)多產(chan)酸(suan)產(chan)氣(qi)(qi),少數只產(chan)酸(suan)不產(chan)氣(qi)(qi)。VP試驗陰性,有(you)賴(lai)氨(an)酸(suan)脫羧酶。DNA的(de)(de)G+C含(han)量為50~53%。對熱抵抗力不強,在(zai)60℃15分(fen)(fen)鐘可被殺死(si)。在(zai)水(shui)中存活2~3周(zhou)。在(zai)5%的(de)(de)石炭酸(suan)中,5分(fen)(fen)鐘死(si)亡。

本屬菌按(an)生化反應分為4個亞(ya)屬。亞(ya)屬Ⅰ是(shi)生化反應典型(xing)的(de)和最常見的(de)沙門氏菌;亞(ya)屬Ⅱ和Ⅳ是(shi)生化反應不典型(xing)的(de)沙門氏菌;亞(ya)屬Ⅲ是(shi)亞(ya)利桑那沙門氏菌。

沙門氏菌(jun)具有復(fu)雜的抗(kang)原(yuan)結構,一(yi)般可(ke)分為菌(jun)體(ti)(O)抗(kang)原(yuan)、鞭(bian)毛(mao)(H)抗(kang)原(yuan)和表(biao)面(Vi)抗(kang)原(yuan)3種。

理化特性

生化反應很活潑,能分解多種糖類和醇(chun)。

培養特性

1)需氧及兼性厭氧菌。

2)在普通瓊脂培(pei)養基上生長良好,培(pei)養24h后,形(xing)成(cheng)中等(deng)大小、圓形(xing)、表(biao)面光(guang)滑(hua)、無色(se)半(ban)透明、邊(bian)緣(yuan)整(zheng)齊的(de)菌落,其菌落特(te)征亦與大腸桿(gan)菌相似(si)(無糞(fen)臭味)。

3)鑒(jian)別培(pei)養基(麥(mai)康凱、SS、伊紅美藍(lan)):一般(ban)無色菌落。

4)三(san)糖鐵瓊脂(zhi)斜面:斜面為紅色,底部變黑(hei)并(bing)產氣。

生化特性

1)發酵葡萄(tao)糖,麥芽糖,甘露(lu)醇(chun)和(he)山梨(li)醇(chun)產氣(qi);

2)不發酵(jiao)乳糖、蔗糖和(he)側金盞花醇;

3)不產吲哚(duo)、V-P反應陰性;

4)不(bu)水解尿素和對苯丙氨酸不(bu)脫氨。

傷寒沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)、雞(ji)(ji)傷寒沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)及(ji)一部分(fen)雞(ji)(ji)白痢(li)沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)發(fa)酵糖(tang)不產(chan)氣,大多數雞(ji)(ji)白痢(li)沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)不發(fa)酵麥芽糖(tang);除雞(ji)(ji)白痢(li)沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)、豬傷寒沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)、甲型副(fu)傷寒沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)、傷寒沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)和仙臺沙(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)等(deng)外,均能利用枸(gou)櫞酸鹽。

血清學特性

沙門氏菌具(ju)有復(fu)雜的抗(kang)原(yuan)結構,一般(ban)沙門氏菌具(ju)有菌體(O)抗(kang)原(yuan)、鞭毛(H)抗(kang)原(yuan)和表面抗(kang)原(yuan)(莢膜或包(bao)膜抗(kang)原(yuan))三種(zhong)抗(kang)原(yuan)。

傳播途徑

肉的污染

肉及其制品的(de)沙門氏菌(jun)檢(jian)出率美國(guo)為20%-25%、英國(guo)為9.9%、日本檢(jian)查(cha)進(jin)口家禽的(de)污染率為10.3%,國(guo)內肉類沙門氏菌(jun)檢(jian)出率在1.1%-39.5%。

蛋的污染

中國(guo)蛋(dan)及其(qi)制品沙門氏菌檢出率為3.9%-43.7%,由(you)于吃蛋(dan)引起鼠傷寒病的病例報告(gao)逐漸有(you)增加(jia)的趨(qu)勢(shi)。

環境污染

食(shi)品在加工、運輸、出售過程中往往被沙(sha)門氏(shi)(shi)菌污染(ran)。沙(sha)門氏(shi)(shi)菌在糞便、土壤、食(shi)品、水(shui)中可生存5個月至2年之久。

傳播問題

恢復期患者和無癥狀(zhuang)的(de)帶菌者也(ye)是常見的(de)傳染源。

分布

廣泛分(fen)布于(yu)自然界,常(chang)常(chang)寄居在人和(he)動物體內,特別是(shi)家禽、家畜及寵物的腸道中。主要(yao)污(wu)染的食品(pin)有(you):肉(rou)和(he)肉(rou)制(zhi)品(pin)、蛋(dan)(dan)和(he)蛋(dan)(dan)制(zhi)品(pin)、奶和(he)奶制(zhi)品(pin)等。由(you)于(yu)沙門(men)氏(shi)菌(jun)不分(fen)解(jie)蛋(dan)(dan)白質,食物被其(qi)污(wu)染后表(biao)面看起來似乎并沒(mei)有(you)變化.

感染癥

沙門氏菌感染(ran)癥為人畜共(gong)患感染(ran)性疾病(bing),主(zhu)要由食(shi)用遭(zao)受污染(ran)的食(shi)物導致,是許多國(guo)家食(shi)物中毒(du)的重要病(bing)源。

癥狀

典型癥(zheng)狀包括發(fa)熱、惡(e)心、嘔吐、腹瀉及腹部絞痛等癥(zheng)狀,通(tong)常(chang)在發(fa)熱后72小時內會好轉。嬰兒(er)、老(lao)年人、免疫功能低下(xia)的(de)(de)患(huan)者則可能因(yin)沙(sha)門氏菌進入血(xue)液(ye)而出現(xian)嚴(yan)重且危及生命(ming)的(de)(de)菌血(xue)癥(zheng),少數(shu)還(huan)會合(he)并腦膜(mo)炎或骨髓(sui)炎。

治療

一般沙門氏菌造成的腸胃(wei)炎不需要給予(yu)抗(kang)生(sheng)素(su)治(zhi)療(liao);而以補(bu)充水分與電解質為(wei)主(zhu);但對于(yu)新生(sheng)兒(er)、免疫功能低下患者及特殊(shu)傷員;則(ze)需要視情(qing)況紿予(yu)抗(kang)生(sheng)素(su)治(zhi)療(liao)。

預防

1、餐(can)前、便后、接(jie)觸(chu)食物前、接(jie)觸(chu)動物或生蛋后應仔細(xi)洗凈(jing)雙手。

2、處理生食和(he)熟食的砧板要分開。

3、食(shi)物要熟透再吃(尤(you)其是雞蛋與家禽(qin)類)。

4、非現做現吃(chi)的食物應(ying)以保鮮膜包覆后放進冰箱保存,再次食用前應(ying)加熱(re)或煮(zhu)熟。

5、撲滅并阻隔蒼(cang)蠅等病媒。被蒼(cang)蠅沾染、過期或腐敗的不(bu)潔食物均應丟棄,切勿食用。

6、水塔應經常清洗、消毒。

7、旅行(xing)或野營(ying)時的飲用水應(ying)煮沸(fei)并消毒。

8、如有嘔吐(tu)、腹(fu)瀉或發熱等癥狀,應盡快就醫。

感染

沙(sha)門氏菌(jun)是(shi)美(mei)國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)食(shi)(shi)物中毒(du)致死(si)(si)的(de)(de)(de)主要(yao)原因(yin)(yin)。美(mei)國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)人對這(zhe)(zhe)種病菌(jun)一(yi)點(dian)都(dou)不(bu)(bu)陌(mo)生(sheng)(sheng)(sheng),每年(nian)(nian)全國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)大(da)約(yue)報(bao)告(gao)40000例(li)沙(sha)門氏菌(jun)感(gan)染(ran)病例(li)。但實(shi)際(ji)的(de)(de)(de)感(gan)染(ran)人數可(ke)(ke)能要(yao)達20倍(bei)以上(shang)(shang),因(yin)(yin)為(wei)許多輕型(xing)病人可(ke)(ke)能未(wei)確診,據(ju)不(bu)(bu)完(wan)全統計,每年(nian)(nian)大(da)約(yue)有(you)1000人死(si)(si)于急性沙(sha)門氏菌(jun)感(gan)染(ran)。但是(shi),以前(qian)各州爆發(fa)(fa)的(de)(de)(de)疫情幾(ji)乎都(dou)與人們吃(chi)了染(ran)上(shang)(shang)沙(sha)門氏菌(jun)的(de)(de)(de)肉類(lei)、蛋(dan)(dan)(dan)類(lei)、乳(ru)類(lei)有(you)關,但迄今為(wei)止,很少(shao)聽說吃(chi)蔬果(guo)(guo)大(da)面積受(shou)沙(sha)門氏菌(jun)污染(ran)甚至在(zai)人群(qun)中引(yin)(yin)發(fa)(fa)大(da)疫情的(de)(de)(de)。對此,周福生(sheng)(sheng)(sheng)教授解釋說,這(zhe)(zhe)可(ke)(ke)能是(shi)西(xi)紅柿(shi)在(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)長的(de)(de)(de)過程中,由于空氣中紫(zi)外線不(bu)(bu)夠(gou)強(qiang)烈,植物在(zai)灌溉過程或(huo)因(yin)(yin)土壤(rang)中含有(you)沙(sha)門氏菌(jun),這(zhe)(zhe)樣(yang)才使(shi)西(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)表皮上(shang)(shang)沾染(ran)了沙(sha)門氏菌(jun),加上(shang)(shang)不(bu)(bu)少(shao)人有(you)生(sheng)(sheng)(sheng)食(shi)(shi)西(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)習慣,如果(guo)(guo)沒有(you)清洗干凈,就(jiu)完(wan)全有(you)可(ke)(ke)能發(fa)(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)沙(sha)門氏菌(jun)感(gan)染(ran)。不(bu)(bu)光是(shi)食(shi)(shi)用西(xi)紅柿(shi),其他瓜(gua)果(guo)(guo)蔬菜也一(yi)樣(yang)。沙(sha)門氏菌(jun)主要(yao)污染(ran)肉類(lei)食(shi)(shi)品(pin)(pin)(pin),魚、禽(qin)、奶、蛋(dan)(dan)(dan)類(lei)食(shi)(shi)品(pin)(pin)(pin)也可(ke)(ke)受(shou)此菌(jun)污染(ran)。沙(sha)門氏菌(jun)食(shi)(shi)物中毒(du)全年(nian)(nian)都(dou)可(ke)(ke)發(fa)(fa)生(sheng)(sheng)(sheng),吃(chi)了未(wei)煮透的(de)(de)(de)病、死(si)(si)牲畜(chu)肉或(huo)在(zai)屠宰后其他環節污染(ran)的(de)(de)(de)牲畜(chu)肉是(shi)引(yin)(yin)起沙(sha)門氏菌(jun)食(shi)(shi)物中毒(du)的(de)(de)(de)最主要(yao)原因(yin)(yin)。有(you)食(shi)(shi)品(pin)(pin)(pin)專家指(zhi)出(chu)美(mei)國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)人吃(chi)雞蛋(dan)(dan)(dan)的(de)(de)(de)習慣與國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)人不(bu)(bu)同,他們喜歡吃(chi)半熟(shu)的(de)(de)(de)雞蛋(dan)(dan)(dan)甚至是(shi)生(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)(dan)(dan),所以一(yi)旦雞蛋(dan)(dan)(dan)里含有(you)沙(sha)門氏菌(jun),感(gan)染(ran)的(de)(de)(de)幾(ji)率就(jiu)比較高(gao)。“在(zai)國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)內,生(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)(dan)(dan)里含有(you)沙(sha)門氏菌(jun)其實(shi)并不(bu)(bu)奇怪(guai),只不(bu)(bu)過國(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)人喜歡將雞蛋(dan)(dan)(dan)煮熟(shu)吃(chi),這(zhe)(zhe)樣(yang)就(jiu)大(da)大(da)減少(shao)了感(gan)染(ran)的(de)(de)(de)幾(ji)率。”

癥狀及原因

由沙(sha)(sha)門氏菌(jun)引起(qi)的食品(pin)中毒癥狀主(zhu)要(yao)有(you)惡心、嘔吐、腹痛、頭痛、畏寒和腹瀉(xie)等,還伴有(you)乏力、肌肉酸痛、視覺模糊、中等程度(du)發熱、躁動(dong)不安和嗜睡,延(yan)續時間2~3d,平均致死(si)率為4.1%。其主(zhu)要(yao)原(yuan)因是由于攝入了(le)含有(you)大量沙(sha)(sha)門氏菌(jun)屬的非(fei)寄主(zhu)專一性菌(jun)種(zhong)或血清型的食品(pin)所引起(qi)的。在攝入含毒食品(pin)之(zhi)后.癥狀一般在12~14h內出現,有(you)些潛伏期較長。

預防措施

防止沙門(men)氏菌污染食(shi)品(pin);控制食(shi)品(pin)中沙門(men)氏菌的繁(fan)殖;加熱以徹(che)底(di)殺滅病原菌。

沙(sha)門氏菌(jun)不耐(nai)高溫,食物(wu)的(de)中心(xin)溫度達70℃以(yi)上,持續5分鐘(zhong)一(yi)般都可以(yi)殺(sha)死包括沙(sha)門氏菌(jun)等(deng)常見(jian)食源性(xing)致病(bing)菌(jun)。家庭(ting)中一(yi)般的(de)熱(re)處(chu)理烹(peng)調方(fang)式都可有(you)效殺(sha)滅該菌(jun)。

檢測方法

前增菌

稱取(qu)25g(mL)樣(yang)品放入盛(sheng)有225 mL BPW的無(wu)菌(jun)均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)(zhi)杯中,以8000 r/min~10 000 r/min均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)(zhi)1min~2min,或置(zhi)于(yu)盛(sheng)有225 mL BPW的無(wu)菌(jun)均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)(zhi)袋中,用拍擊(ji)式(shi)均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)(zhi)器拍打1min~2min。若樣(yang)品為液態,不(bu)需(xu)要均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)(zhi),振蕩混(hun)勻。如(ru)需(xu)測定(ding)pH值,用1mol/mL無(wu)菌(jun)NaOH或HCl調(diao)pH至6.8±0.2。無(wu)菌(jun)操作將樣(yang)品轉至500mL錐(zhui)形瓶中,如(ru)使用均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)(zhi)袋,可直(zhi)接進行培(pei)養,于(yu)36 ℃±1℃培(pei)養8h~18h。

如(ru)為冷凍(dong)產品,應在(zai)45℃以(yi)下不超過(guo)15min,或(huo)2℃~5℃不超過(guo)18h解凍(dong)。

增菌

輕輕搖動培(pei)養過的(de)樣品混合物(wu),移取1mL,轉種(zhong)于(yu)10mL TTB內,于(yu)42℃±1℃培(pei)養18h~24h。同(tong)時,另取1mL,轉種(zhong)于(yu)10 mL SC內,于(yu)36℃±1℃培(pei)養18h~24h。

分離

分(fen)別用接種環取增菌(jun)液1環,劃線接種于一(yi)個BS瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)和一(yi)個XLD瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)(或(huo)HE瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)或(huo)沙門(men)氏菌(jun)屬顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban))。于36℃±1℃分(fen)別培養(yang)18h~24h(XLD瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)、HE瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)、沙門(men)氏菌(jun)屬顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban))或(huo)40h~48h (BS瓊脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)),觀(guan)察各個平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)上(shang)生長(chang)的菌(jun)落,各個平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(ban)上(shang)的菌(jun)落特征見表(biao)1。

表(biao) 1 沙門氏菌(jun)屬(shu)在不同選擇性(xing)瓊(qiong)脂平板上的菌(jun)落(luo)特征

選擇性(xing)瓊脂平板 沙門氏菌

BS 瓊脂 菌(jun)(jun)落為黑色(se)(se)(se)有(you)金屬(shu)光澤、棕褐(he)色(se)(se)(se)或灰(hui)色(se)(se)(se),菌(jun)(jun)落周(zhou)圍(wei)培養基可呈(cheng)黑色(se)(se)(se)或棕色(se)(se)(se);有(you)些菌(jun)(jun)株形成灰(hui)綠(lv)色(se)(se)(se)的(de)菌(jun)(jun)落,周(zhou)圍(wei)培養基不變。

HE 瓊脂 藍綠色(se)(se)或藍色(se)(se),多(duo)數(shu)菌落(luo)中心黑(hei)色(se)(se)或幾乎全黑(hei)色(se)(se);有(you)些菌株(zhu)為黃色(se)(se),中心黑(hei)色(se)(se)或幾乎全黑(hei)色(se)(se)。

XLD 瓊脂 菌(jun)(jun)落(luo)呈(cheng)粉紅色,帶(dai)(dai)或(huo)不(bu)帶(dai)(dai)黑(hei)色中(zhong)心,有(you)些菌(jun)(jun)株可呈(cheng)現大的帶(dai)(dai)光(guang)澤的黑(hei)色中(zhong)心,或(huo)呈(cheng)現全部(bu)黑(hei)色的菌(jun)(jun)落(luo);有(you)些菌(jun)(jun)株為黃(huang)色菌(jun)(jun)落(luo),帶(dai)(dai)或(huo)不(bu)帶(dai)(dai)黑(hei)色中(zhong)心。

沙門(men)氏菌屬顯色培養(yang) 按照顯色培養(yang)基(ji)的說(shuo)明進行判定。

自19世紀后(hou)期,沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)首次被鑒定為人(ren)類(lei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)病(bing)原(yuan)以來(lai),檢(jian)測方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)學都是建(jian)立(li)在(zai)采(cai)取(qu)感(gan)染病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便或血液作(zuo)為臨(lin)(lin)床(chuang)病(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎上(shang)。此后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年間,用(yong)(yong)于(yu)從(cong)食(shi)(shi)(shi)品(pin)中分離(li)(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)實質上(shang)與那(nei)些(xie)用(yong)(yong)于(yu)臨(lin)(lin)床(chuang)病(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)是相(xiang)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但至少(shao)有三個(ge)因(yin)素(su)限制了(le)(le)(le)用(yong)(yong)于(yu)臨(lin)(lin)床(chuang)病(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)應(ying)用(yong)(yong)在(zai)食(shi)(shi)(shi)品(pin)分析上(shang)。第(di)一(yi)(yi),通(tong)常,沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含量水平在(zai)污染食(shi)(shi)(shi)品(pin)中比(bi)有感(gan)染病(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)料(liao)中要(yao)低(di)很(hen)多;第(di)二,食(shi)(shi)(shi)品(pin)本(ben)身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性(xing)(xing)質會干擾病(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)測,例(li)如,某些(xie)食(shi)(shi)(shi)品(pin)中固有菌(jun)(jun)(jun)群可能(neng)處在(zai)一(yi)(yi)個(ge)很(hen)高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水平,從(cong)而影響特定細菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選(xuan)擇(ze)性(xing)(xing)分離(li)(li)和(he)(he)鑒定;第(di)三,與臨(lin)(lin)床(chuang)病(bing)料(liao)不(bu)(bu)同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是,經過加(jia)工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)品(pin),由于(yu)加(jia)熱、干燥、高(gao)含鹽量、酸(suan)和(he)(he)冷凍等因(yin)素(su)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong),其(qi)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)受到了(le)(le)(le)尚不(bu)(bu)致命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷或稱(cheng)“致傷”。這(zhe)(zhe)就形成(cheng)了(le)(le)(le)一(yi)(yi)個(ge)具有不(bu)(bu)同(tong)生長特性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)(jun)群。這(zhe)(zhe)種(zhong)現象對那(nei)些(xie)希望從(cong)食(shi)(shi)(shi)物(wu)樣品(pin)中分離(li)(li)出沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)品(pin)分析家來(lai)說有很(hen)大影響,因(yin)為在(zai)選(xuan)擇(ze)培(pei)養(yang)基(ji)上(shang)直接培(pei)養(yang)“致傷”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)通(tong)常是以細菌(jun)(jun)(jun)死(si)亡(wang)和(he)(he)試驗失(shi)敗而告終(zhong)。為克服這(zhe)(zhe)些(xie)困難,人(ren)們建(jian)立(li)了(le)(le)(le)一(yi)(yi)種(zhong)簡單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生物(wu)增(zeng)殖(zhi)步驟,專門(men)(men)針對以食(shi)(shi)(shi)品(pin)為傳播(bo)載(zai)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)原(yuan)。雖然這(zhe)(zhe)些(xie)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)本(ben)身證明是可靠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),但卻很(hen)費力、耗時(shi),需要(yao)4~7天才能(neng)完成(cheng)。因(yin)此,在(zai)需要(yao)及時(shi)、快速(su)評價(jia)食(shi)(shi)(shi)品(pin)中微(wei)生物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全性(xing)(xing)時(shi),通(tong)常不(bu)(bu)被采(cai)用(yong)(yong)。隨著(zhu)DNA和(he)(he)抗(kang)體(ti)技術的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展,近10~15年間發展了(le)(le)(le)無數(shu)改進的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa),其(qi)中許(xu)多可以在(zai)48h內(nei)檢(jian)出沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),這(zhe)(zhe)些(xie)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)通(tong)稱(cheng)為快速(su)檢(jian)測。

抗體檢測

利用(yong)抗(kang)(kang)(kang)原-抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)反(fan)應的(de)(de)(de)(de)(de)顯著特(te)異性,來進行細菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)鑒(jian)別和血清學(xue)定型,已(yi)(yi)有(you)半個多世紀(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)歷史。細菌(jun)菌(jun)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)或鞭毛抗(kang)(kang)(kang)原的(de)(de)(de)(de)(de)特(te)異性抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)存在,使得(de)人(ren)們可以(yi)建(jian)立一些快(kuai)速方(fang)法(fa)來檢(jian)(jian)測(ce)以(yi)食品為(wei)(wei)(wei)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)病原。已(yi)(yi)經建(jian)立的(de)(de)(de)(de)(de)沙門氏(shi)菌(jun)免(mian)疫(yi)(yi)學(xue)檢(jian)(jian)測(ce)方(fang)法(fa)有(you)許(xu)多種(zhong),大致可分(fen)為(wei)(wei)(wei)以(yi)酶標(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ELISA),熒(ying)光抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)染(ran)色(se)(免(mian)疫(yi)(yi)熒(ying)光法(fa)),同(tong)(tong)(tong)位素標(biao)記(ji)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(放(fang)射(she)免(mian)疫(yi)(yi)試(shi)驗)為(wei)(wei)(wei)基礎(chu)(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)及(ji)其它多種(zhong)以(yi)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)為(wei)(wei)(wei)基礎(chu)(chu),利用(yong)乳(ru)膠凝集、免(mian)疫(yi)(yi)傳感器、免(mian)疫(yi)(yi)擴散及(ji)免(mian)疫(yi)(yi)色(se)譜技(ji)術的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)。但常規中(zhong)最廣泛采(cai)(cai)用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)是以(yi)雙位點(dian)ELISA技(ji)術即(ji)夾心ELISA為(wei)(wei)(wei)基礎(chu)(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)。此法(fa)改進后(hou)用(yong)有(you)放(fang)射(she)活性的(de)(de)(de)(de)(de)同(tong)(tong)(tong)位素替(ti)代標(biao)記(ji)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti),概括地說,是指以(yi)固定在固體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)基質(zhi)上的(de)(de)(de)(de)(de)“捕捉(zhuo)”抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)來捕捉(zhuo)目標(biao)抗(kang)(kang)(kang)原,經洗(xi)滌除(chu)去未結合(he)的(de)(de)(de)(de)(de)成分(fen),加入(ru)第二(er)種(zhong)酶標(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti),此者(zhe)結合(he)在捕捉(zhuo)到(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)原的(de)(de)(de)(de)(de)不同(tong)(tong)(tong)位點(dian)上,第二(er)次洗(xi)滌后(hou)加入(ru)酶作用(yong)基質(zhi),并(bing)令其與顏色(se)成分(fen)反(fan)應,然(ran)后(hou)用(yong)分(fen)光光度法(fa)即(ji)很容易檢(jian)(jian)測(ce)到(dao)目標(biao)抗(kang)(kang)(kang)原。采(cai)(cai)用(yong)微(wei)量滴定板作為(wei)(wei)(wei)固態基質(zhi)使反(fan)應形式標(biao)準化(hua),并(bing)促成其自(zi)動化(hua)。

黎兆(zhao)滾等(deng)人(ren)(ren)首次在(zai)國內口岸系(xi)統應(ying)(ying)用(yong)(yong)微量(liang)板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對進(jin)(jin)(jin)(jin)出口動物產品(pin)(pin)(pin)(魚粉、肉(rou)(rou)(rou)骨粉等(deng))進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢測。該法(fa)(fa)(fa)采用(yong)(yong)預(yu)先包(bao)被(bei)了(le)(le)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(A-E群)單克隆抗(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)(de)(de)微量(liang)板(ban),加(jia)(jia)入經增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)處理的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin),反應(ying)(ying)后再(zai)加(jia)(jia)入一(yi)定(ding)的(de)(de)(de)(de)指示劑,作用(yong)(yong)畢后用(yong)(yong)酶標儀測定(ding)OD值來判定(ding)結果(guo)(guo)。食物樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)經適(shi)當(dang)的(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)處理,也可用(yong)(yong)此法(fa)(fa)(fa)進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢測。ELISA法(fa)(fa)(fa)檢出沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)極(ji)限范圍在(zai)105~106個細胞/ml,因此,要得(de)出可靠的(de)(de)(de)(de)結果(guo)(guo),食物樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)首先必(bi)需進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)預(yu)增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)、選擇性增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun),通常(chang)還要在(zai)含(han)有(you)D-甘露糖的(de)(de)(de)(de)肉(rou)(rou)(rou)湯(tang)(tang)(M肉(rou)(rou)(rou)湯(tang)(tang))中進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)后增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun),以(yi)促進(jin)(jin)(jin)(jin)鞭毛發育。總(zong)的(de)(de)(de)(de)來說,標準的(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備,約需要經過40~48h的(de)(de)(de)(de)孵育才能完成。黎兆(zhao)滾等(deng)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)微量(liang)板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備過程(cheng)(cheng)分三步,共耗時(shi)24h:①選用(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)(rou)(rou)湯(tang)(tang)進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)預(yu)增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(6h),使(shi)(shi)(shi)“致傷”、冷(leng)凍的(de)(de)(de)(de)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)復(fu)蘇。②使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)選擇性培養(yang)基(ji)RV進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(14h),使(shi)(shi)(shi)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)大(da)量(liang)繁殖(zhi),同時(shi)抑制(zhi)(zhi)其(qi)它雜菌(jun)(jun)(jun)生長。③使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)(rou)(rou)湯(tang)(tang)(蛋(dan)白胨(dong)水)進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)后增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(4h),使(shi)(shi)(shi)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)數量(liang)大(da)大(da)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)(jia)。比(bi)上(shang)(shang)述標準的(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備過程(cheng)(cheng)縮(suo)短(duan)了(le)(le)一(yi)半的(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)(jian)。ELISA方法(fa)(fa)(fa)本(ben)(ben)身,則(ze)僅需要大(da)約2h而已(其(qi)中30min是操(cao)(cao)作時(shi)間(jian)(jian)(jian),90min是孵育時(shi)間(jian)(jian)(jian))。相(xiang)比(bi)之(zhi)下,黎兆(zhao)滾等(deng)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)可在(zai)27h內完成,比(bi)上(shang)(shang)述方法(fa)(fa)(fa)縮(suo)短(duan)了(le)(le)一(yi)半的(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)(jian),頗值得(de)推廣應(ying)(ying)用(yong)(yong)。最(zui)新式(shi)的(de)(de)(de)(de)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)免疫(yi)學(xue)檢測法(fa)(fa)(fa),利用(yong)(yong)經特異性抗(kang)(kang)體(ti)敏化(hua)的(de)(de)(de)(de)免疫(yi)色(se)譜(pu)卡片(pian)(pian)為(wei)基(ji)礎。幾滴樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加(jia)(jia)到卡片(pian)(pian)上(shang)(shang),結果(guo)(guo)可以(yi)直接(jie)用(yong)(yong)肉(rou)(rou)(rou)眼(yan)讀出。免疫(yi)色(se)譜(pu)卡片(pian)(pian)極(ji)易操(cao)(cao)作,且(qie)由于無需要特殊設(she)備,很(hen)適(shi)合(he)小(xiao)型實驗室使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)。盡管卡片(pian)(pian)檢測法(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)一(yi)樣(yang)(yang)(yang)需要對樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)進(jin)(jin)(jin)(jin)行(xing)增(zeng)(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)處理,但它(卡片(pian)(pian)法(fa)(fa)(fa))本(ben)(ben)身通常(chang)需時(shi)不超(chao)過10min,如果(guo)(guo)采用(yong)(yong)黎兆(zhao)滾等(deng)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備法(fa)(fa)(fa),則(ze)可使(shi)(shi)(shi)操(cao)(cao)作時(shi)間(jian)(jian)(jian)更為(wei)縮(suo)短(duan)。

核酸法

細(xi)(xi)胞(bao)核酸(suan)(suan)DNA和(he)RNA是(shi)唯一一類可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)攜帶信息的(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)分子(zi)。由于(yu)(yu)所有的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)都含(han)有這種分子(zi),可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)利(li)用(yong)它(ta)作為檢測(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標靶。標靶通常是(shi)一個(ge)特(te)異性(xing)(xing)核酸(suan)(suan)序列,它(ta)可(ke)(ke)通過(guo)(guo)以(yi)(yi)(yi)補(bu)體(ti)(ti)核酸(suan)(suan)分子(zi)作為探(tan)針來檢出。與(yu)免(mian)疫(yi)學方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)相(xiang)似,探(tan)針也需(xu)要(yao)加附適當(dang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標記,如放(fang)射(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)(wei)素(su)、酶或(huo)發光的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標識物(wu)。Fitts等人在(zai)食品沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)檢測(ce)(ce)中(zhong)引(yin)入(ru)了(le)(le)第一代DNA—RNA雜交(jiao)技術,此(ci)(ci)法(fa)(fa)(fa)應(ying)(ying)用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)探(tan)針含(han)有用(yong)放(fang)射(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)(wei)素(su)標記的(de)(de)(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)DNA片段,其(qi)敏(min)(min)感(gan)(gan)性(xing)(xing)高(gao)(gao),經(jing)大(da)(da)約(yue)48h的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)步驟(zou)后,檢測(ce)(ce)極限可(ke)(ke)達108個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)/ml,但(dan)(dan)由于(yu)(yu)要(yao)使(shi)用(yong)放(fang)射(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)(wei)素(su),只(zhi)能(neng)(neng)在(zai)專門(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)實驗室應(ying)(ying)用(yong),此(ci)(ci)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)(you)點(dian)都被抵消了(le)(le)。為此(ci)(ci),以(yi)(yi)(yi)核酸(suan)(suan)雜交(jiao)為基(ji)礎的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第二代技術—比(bi)(bi)色計已發展起來。這種方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)依賴于(yu)(yu)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)核糖(tang)體(ti)(ti)RNA(rRNA)—核糖(tang)體(ti)(ti)發育過(guo)(guo)程中(zhong)儲存(cun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)核酸(suan)(suan)成分的(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)。核糖(tang)體(ti)(ti)是(shi)細(xi)(xi)胞(bao)蛋白(bai)質合成器的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一部(bu)分,每(mei)個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)細(xi)(xi)胞(bao)中(zhong)存(cun)在(zai)5000~20000個(ge)復(fu)(fu)制體(ti)(ti),而(er)相(xiang)比(bi)(bi)之下染色體(ti)(ti)DNA復(fu)(fu)制體(ti)(ti)僅2~10個(ge)。這種天(tian)然富含(han)rRNA標靶序列的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況使(shi)得用(yong)無輻射(she)計檢測(ce)(ce)成為可(ke)(ke)能(neng)(neng),同(tong)時又保(bao)(bao)持了(le)(le)與(yu)放(fang)射(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)(wei)素(su)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)相(xiang)當(dang)或(huo)更高(gao)(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏(min)(min)感(gan)(gan)性(xing)(xing)。其(qi)另一優(you)(you)點(dian)是(shi)由于(yu)(yu)rRNA為單(dan)鏈(lian)(而(er)DNA為雙鏈(lian)),雜交(jiao)前無需(xu)經(jing)過(guo)(guo)變性(xing)(xing)步驟(zou)。要(yao)得到陽性(xing)(xing)結(jie)果(guo),此(ci)(ci)法(fa)(fa)(fa)需(xu)要(yao)105個(ge)靶細(xi)(xi)胞(bao)/ml,因此(ci)(ci)對(dui)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)檢測(ce)(ce)來說,需(xu)要(yao)進(jin)行預增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)和(he)選擇性(xing)(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun),總共(gong)約(yue)50h。rRNA探(tan)針法(fa)(fa)(fa)比(bi)(bi)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(酶聯(lian)免(mian)疫(yi)檢測(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa))更耗時,但(dan)(dan)二者(zhe)成本(ben)相(xiang)近。食品細(xi)(xi)菌(jun)(jun)檢測(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最新進(jin)展是(shi)在(zai)化學擴增(zeng)(zeng)體(ti)(ti)系方(fang)(fang)(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展,即聚合酶鏈(lian)反應(ying)(ying)(PCR),用(yong)該體(ti)(ti)系可(ke)(ke)對(dui)制備好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣品進(jin)行細(xi)(xi)菌(jun)(jun)DNA擴增(zeng)(zeng),以(yi)(yi)(yi)便(bian)更易于(yu)(yu)用(yong)諸如凝(ning)膠電泳法(fa)(fa)(fa)或(huo)比(bi)(bi)色型ELISA法(fa)(fa)(fa)檢測(ce)(ce)。用(yong)于(yu)(yu)檢測(ce)(ce)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)和(he)其(qi)它(ta)以(yi)(yi)(yi)食物(wu)為載體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)業已建立,其(qi)中(zhong)一些方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)顯示了(le)(le)極好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏(min)(min)感(gan)(gan)性(xing)(xing)。但(dan)(dan)該法(fa)(fa)(fa)較難(nan)自動化,且(qie)必需(xu)經(jing)選擇性(xing)(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)以(yi)(yi)(yi)稀釋可(ke)(ke)能(neng)(neng)干(gan)擾檢測(ce)(ce)反應(ying)(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)某些成分。一個(ge)完整的(de)(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)(yi)PCR為基(ji)礎的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa),需(xu)要(yao)2天(tian)才(cai)能(neng)(neng)完成,很大(da)(da)程度上抵銷了(le)(le)其(qi)高(gao)(gao)敏(min)(min)感(gan)(gan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)(you)點(dian),但(dan)(dan)這種方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)對(dui)那些含(han)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)較少或(huo)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)“致傷”嚴重難(nan)以(yi)(yi)(yi)復(fu)(fu)蘇而(er)仍保(bao)(bao)有沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣品尤其(qi)有效。

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