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基因芯片是什么 基因芯片檢測技術的原理和特點

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摘要:基因芯片又稱生物芯片或DNA芯片,它們起源于DNA雜交探針技術與半導體工業技術相結合的結晶。該技術系指將大量探針分子固定于支持物上后與帶熒光標記的DNA或其他樣品分子(例如蛋白,因子或小分子)進行雜交,通過檢測每個探針分子的雜交信號強度進而獲取樣品分子的數量和序列信息。下面小編就介紹一下基因芯片的原理與特點。

一、基因芯片是什么

通過(guo)微加工(gong)技術 ,將數以萬(wan)計、乃至百(bai)萬(wan)計的(de)特定(ding)序列的(de)DNA片段(duan)(基因探(tan)針),有規律地(di)排(pai)列(lie)固定于(yu)2cm2 的(de)硅片(pian)、玻片(pian) 等支持物(wu)上,構成的(de)一個二維DNA探針陣(zhen)列,與計算(suan)機(ji)的電子芯片十分(fen)相(xiang)似,所以被稱為(wei)基因(yin)芯片。

基因芯片的(de)測(ce)序(xu)(xu)原理是雜交測(ce)序(xu)(xu)方(fang)法,即通(tong)過與一組已知序(xu)(xu)列的(de)核酸(suan)探(tan)針(zhen)雜交進行(xing)核酸(suan)序(xu)(xu)列測(ce)定的(de)方(fang)法,在一塊基片表面固定了序(xu)(xu)列已知的(de)靶核苷(gan)酸(suan)的(de)探(tan)針(zhen)。當溶液中帶(dai)有(you)熒光標記的(de)核酸(suan)序(xu)(xu)列TATGCAATCTAG,與基(ji)因芯片(pian)上對應位(wei)置(zhi)(zhi)的(de)(de)核酸探針(zhen)(zhen)產生(sheng)互補匹配時,通過確定熒光強度最(zui)強的(de)(de)探針(zhen)(zhen)位(wei)置(zhi)(zhi),獲得(de)一組序列(lie)(lie)完全(quan)互補的(de)(de)探針(zhen)(zhen)序列(lie)(lie)。據(ju)此可重(zhong)組出靶核酸的(de)(de)序列(lie)(lie)。

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二、基因芯片技術原理

1DNA探針(zhen)的(de)(de)大量收集和純化,基因芯片探針(zhen)制備方法可(ke)以是根據(ju)基因設計特異性的(de)(de)PCR引(yin)物,對基因進行特異性地擴張,也(ye)可以是(shi)建立均一化的DNA文庫,通過克(ke)隆鑒定、篩選(xuan)、擴增產(chan)生;

2、將(jiang)純化(hua)后(hou)(hou)的探針(zhen)固定(ding)在(zai)片(pian)(pian)基(ji)(ji)上(shang),首先要(yao)將(jiang)基(ji)(ji)片(pian)(pian)(主要(yao)用的是玻璃片(pian)(pian))進行(xing)特(te)殊的化(hua)學處(chu)理,使(shi)玻璃片(pian)(pian)醛基(ji)(ji)化(hua)或(huo)氨基(ji)(ji)化(hua),然(ran)后(hou)(hou)將(jiang)純化(hua)的探針(zhen)通(tong)過顯微打(da)印或(huo)噴打(da)在(zai)基(ji)(ji)片(pian)(pian)上(shang),再(zai)將(jiang)打(da)印好的玻璃片(pian)(pian)進行(xing)后(hou)(hou)處(chu)理,如水(shui)合化(hua)、加熱或(huo)紫外(wai)交聯(lian)等;

3、樣品的(de)標記,標記的(de)方法(fa)一(yi)般是采用(yong)逆轉錄(lu)法(fa)或(huo)隨(sui)機引物(wu)延伸(shen)法(fa)等;

4、雜交后芯片的掃描、圖像處理的采集和數(shu)據(ju)分析。

、基因芯片的特點

1、高通量、多參數同步分析

目前基因芯片(pian)制作工藝可達到(dao)在1cm2的(de)載體平面上(shang)固(gu)定(ding)數(shu)萬至數(shu)十萬的(de)探(tan)針,可(ke)對樣品中(zhong)數(shu)量巨大的(de)相(xiang)關基(ji)因(yin),甚至整個(ge)基(ji)因(yin)組及信息進行同步檢測和分(fen)析。

2、快速(su)全自動分析(xi)

在(zai)一定的(de)條件下使樣(yang)品中的(de)靶基因片段(duan)同時(shi)與芯片的(de)多個(ge)探(tan)針(zhen)進行雜(za)交,并采用掃(sao)描儀器測量(liang)雜(za)交信(xin)號和(he)分析處理數據。從而,從根本上提高了測量(liang)工作(zuo)的(de)速度和(he)效率,也極大降低了測量(liang)工作(zuo)的(de)強度和(he)難度。

3、高精確度分析

由于芯片上(shang)的(de)(de)(de)每一點,即每個(ge)(ge)(ge)探(tan)針都(dou)可以精(jing)確定位和選址,加上(shang)每個(ge)(ge)(ge)探(tan)針都(dou)可以精(jing)確設計(ji)及(ji)制(zhi)備,因此可以精(jing)確檢測出不同的(de)(de)(de)靶(ba)基因、同一靶(ba)基因不同的(de)(de)(de)狀(zhuang)態以及(ji)在(zai)一個(ge)(ge)(ge)堿基上(shang)的(de)(de)(de)差別(bie)。

4、高精密度分析(xi)

商品(pin)化(hua)芯片(pian)制(zhi)作上的(de)(de)(de)精密(mi)及檢測試劑和(he)方法上的(de)(de)(de)統(tong)一在一定(ding)程度上保(bao)證了芯片(pian)檢測的(de)(de)(de)高精密(mi)度和(he)重(zhong)現性,使(shi)不同批次乃(nai)至不同實驗室之(zhi)間(jian)的(de)(de)(de)檢測結(jie)果,可以進(jin)行有效比對(dui)及分析(xi)。

5、高靈(ling)敏度分析

基(ji)因芯片選用了(le)不易產生(sheng)擴(kuo)散作(zuo)用的(de)(de)載(zai)體,探針及樣品(pin)靶基(ji)因的(de)(de)的(de)(de)雜(za)交(jiao)(jiao)點非常集中,加上雜(za)交(jiao)(jiao)前樣品(pin)靶基(ji)因的(de)(de)擴(kuo)增和雜(za)交(jiao)(jiao)后檢(jian)測信號的(de)(de)擴(kuo)張,極大地提高了(le)檢(jian)測的(de)(de)靈敏度(du),可(ke)以檢(jian)測出1個細胞(bao)中低至1個拷(kao)貝的靶基因,從而使檢(jian)測所需的樣(yang)品量大幅度減少(shao),一(yi)般只需要1020μL樣品。

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