1996年,馬伊(yi)琍與保劍峰、陳龍、高曙光(guang)、張雅琳共(gong)同出演了電視劇(ju)《真空愛情記錄(lu)》,講述了一(yi)群大學畢(bi)業生為了工作和愛情奮(fen)斗(dou)的故事。
1998年(nian),馬伊(yi)琍畢業于上海戲(xi)劇學(xue)院,畢業后(hou)參(can)演(yan)了(le)第(di)一(yi)部改編自陜西駐滬(hu)作家李春平同(tong)名小(xiao)說的(de)電影《玻璃是透明的(de)》,飾演(yan)“小(xiao)丫子”。同(tong)年(nian),其出演(yan)了(le)第(di)一(yi)部古裝電影《孔乙己(ji)》。
2000年,通過出演(yan)《黑(hei)洞》提(ti)升(sheng)了表(biao)演(yan)事業。同(tong)年,在電視(shi)劇《前世今生》中飾演(yan)美貌且氣質(zhi)超凡的秦婉瑩(ying)。
2001年(nian),出(chu)演電(dian)視劇《白天(tian)睡覺的女人》中(zhong)的李(li)秀。同年(nian),在電(dian)影(ying)(ying)《西(xi)施眼》中(zhong)飾演施雨,該片(pian)在2002年(nian)美國夏威夷國際(ji)電(dian)影(ying)(ying)節(jie)中(zhong)獲評(ping)審團大(da)將及(ji)亞(ya)洲最佳(jia)電(dian)影(ying)(ying)。
2002年,因(yin)出演電視劇《還珠格(ge)格(ge)Ⅲ之天上人(ren)間(jian)》中的紫(zi)薇一角(jiao)而(er)被大眾所熟知。
2004年(nian),出演(yan)了由黃(huang)磊指導(dao)的《天一(yi)生水》,在(zai)劇(ju)中飾演(yan)一(yi)個(ge)混血姑娘明(ming)妮。
2005年(nian),在張黎導演的電視(shi)劇(ju)《錦衣衛》中出演了(le)傾國(guo)美人客印月。
2006年,參演的(de)《喬家(jia)大院》在央視熱播,其扮演的(de)“江雪(xue)瑛”收獲了更多的(de)觀眾(zhong)和(he)粉絲(si)。
2007年(nian),因出演由趙寶剛指導的青(qing)春勵志(zhi)電視(shi)劇《奮斗(dou)》而名聲驟(zou)起,同(tong)年(nian)6月底(di),馬伊琍簽(qian)約了內地影視(shi)巨擎橙天(tian)娛樂。
2008年,因拍攝電視劇《為誰心動(dong)》無(wu)悔剃光(guang)了(le)頭(tou)。同年,其憑借(jie)影片《江北(bei)好人》,戰勝了(le)李冰(bing)冰(bing)、范冰(bing)冰(bing)兩位候選人,成為了(le)長春電影節影后。
2009年,馬伊琍(li)與佟大(da)為共(gong)同出(chu)演了電視(shi)劇《婚姻保衛戰》。同年,出(chu)演的(de)首(shou)部反映豫商故事(shi)的(de)電視(shi)劇《經(jing)緯天(tian)地》在CCTV-8播出(chu),這也是她繼《喬家大(da)院》之(zhi)后首(shou)次登(deng)陸央視(shi),劇中扮(ban)演尚達志的(de)妻子順兒。
2010年(nian),與涂松巖合作主(zhu)演都(dou)市題材電(dian)視劇《雙城生(sheng)活》,她在劇中塑造(zao)的(de)(de)北京(jing)大妞郝京(jing)妮,受到了(le)網友的(de)(de)普遍好評。憑借該劇,馬伊琍(li)獲得國(guo)劇盛典2011年(nian)度最佳女演員(yuan)。
2013年(nian)年(nian)初,馬(ma)伊琍與(yu)杜淳、劉莉莉、陳思斯(si)等(deng)合作出演(yan)電視劇《青春期撞上更年(nian)期2》,此外,還客(ke)串(chuan)了電影《不二(er)神探》,并且徹底顛覆以往的形象痛罵文(wen)章,成為(wei)了影片(pian)一(yi)大看點(dian)。
2013年(nian),首(shou)當(dang)制片(pian)人的(de)馬(ma)伊琍與(yu)首(shou)次當(dang)導(dao)演(yan)的(de)丈夫文(wen)章合作了電視劇《小(xiao)爸(ba)爸(ba)》。
2015年,出演(yan)了公路犯罪片《未擇之路》。11月7日(ri),在電(dian)視(shi)劇《北上廣(guang)不相信(xin)眼淚》中(zhong)飾演(yan)潘蕓,憑該劇獲得第19屆華鼎獎中(zhong)國百強電(dian)視(shi)劇最佳女主角。
2016年(nian)9月,與陳(chen)建(jian)斌(bin)合作主演都市(shi)幽默劇《中國(guo)式關系》,飾演美女建(jian)筑設計師(shi)江一楠。
2017年,主(zhu)演(yan)文章(zhang)執導的諜戰劇(ju)《剃刀邊緣(yuan)》,劇(ju)中(zhong)飾演(yan)關海丹。同年參演(yan)《建(jian)軍大(da)業》,飾演(yan)向(xiang)警予角(jiao)色。