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沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)是一種(zhong)常見(jian)的(de)(de)食源性致(zhi)(zhi)病(bing)菌(jun)(jun)(jun)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)鑒定(ding)的(de)(de)傳統方法主要是根(gen)據(ju)形態(tai)學特征(zheng)、培養特征(zheng)、生(sheng)理生(sheng)化(hua)特征(zheng)、抗原特征(zheng)、噬菌(jun)(jun)(jun)體(ti)特征(zheng)等(deng)。1885年(nian)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)等(deng)在霍亂流行時分離到豬(zhu)霍亂沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)，故定(ding)名為(wei)(wei)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)屬。沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)屬有(you)的(de)(de)專對(dui)人類致(zhi)(zhi)病(bing)，有(you)的(de)(de)只對(dui)動物(wu)(wu)致(zhi)(zhi)病(bing)，也有(you)對(dui)人和動物(wu)(wu)都致(zhi)(zhi)病(bing)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)病(bing)是指(zhi)由各種(zhong)類型沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)所引起的(de)(de)對(dui)人類、家畜以(yi)(yi)及(ji)野(ye)生(sheng)禽獸不同(tong)形式的(de)(de)總稱。感染沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)人或帶(dai)菌(jun)(jun)(jun)者的(de)(de)糞便污染食品，可使人發生(sheng)食物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)毒(du)。據(ju)統計(ji)在世界各國(guo)的(de)(de)種(zhong)類細菌(jun)(jun)(jun)性食物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)毒(du)中(zhong)(zhong)，沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)引起的(de)(de)食物(wu)(wu)中(zhong)(zhong)毒(du)常列榜首。我國(guo)內(nei)陸地區也以(yi)(yi)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)為(wei)(wei)首位。

簡介

沙門氏(shi)菌(jun)病的(de)(de)(de)病原體。屬(shu)腸桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)科(ke)，革蘭(lan)氏(shi)陰性腸道桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)。已(yi)發現的(de)(de)(de)近一千種（或菌(jun)株）。按其抗(kang)原成分(fen)，可分(fen)為甲(jia)(jia)、乙、丙(bing)(bing)、丁、戊(wu)等基本菌(jun)組。其中與人(ren)(ren)體疾病有關(guan)的(de)(de)(de)主要有甲(jia)(jia)組的(de)(de)(de)副傷(shang)寒(han)(han)(han)甲(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)，乙組的(de)(de)(de)副傷(shang)寒(han)(han)(han)乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和(he)(he)(he)鼠傷(shang)寒(han)(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)，丙(bing)(bing)組的(de)(de)(de)副傷(shang)寒(han)(han)(han)丙(bing)(bing)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和(he)(he)(he)豬霍亂桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)，丁組的(de)(de)(de)傷(shang)寒(han)(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和(he)(he)(he)腸炎桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)等。除傷(shang)寒(han)(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)、副傷(shang)寒(han)(han)(han)甲(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和(he)(he)(he)副傷(shang)寒(han)(han)(han)乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)引(yin)(yin)起(qi)人(ren)(ren)類(lei)(lei)的(de)(de)(de)疾病外(wai)，大多數僅(jin)能引(yin)(yin)起(qi)家畜、鼠類(lei)(lei)和(he)(he)(he)禽類(lei)(lei)等動物(wu)的(de)(de)(de)疾病，但有時也可污(wu)染人(ren)(ren)類(lei)(lei)的(de)(de)(de)食物(wu)而引(yin)(yin)起(qi)食物(wu)中毒(du)。

沙門氏菌(jun)(jun)在水中(zhong)(zhong)不(bu)易(yi)繁殖，但可生(sheng)存(cun)(cun)(cun)2-3周，冰箱中(zhong)(zhong)可生(sheng)存(cun)(cun)(cun)3-4個(ge)月，在自然環境的糞(fen)便中(zhong)(zhong)可存(cun)(cun)(cun)活1-2個(ge)月。沙門氏菌(jun)(jun)最適繁殖溫度為37℃，在20℃以(yi)上即能大量繁殖，因此，低(di)溫儲存(cun)(cun)(cun)食品是一項重要預防(fang)措施。

沙門氏菌屬

菌體大(da)小(xiao)（0.6～0.9)×（1～3)微米(mi)無(wu)芽(ya)胞，一般無(wu)莢膜，除(chu)雞白痢(li)沙門(men)氏菌和雞傷寒沙門(men)氏菌外，大(da)多(duo)有周身鞭毛(mao)。營養(yang)要(yao)求不(bu)(bu)高，分(fen)離(li)培養(yang)常采用(yong)腸道選擇鑒(jian)別(bie)培養(yang)基(ji)。生化反應對(dui)本屬菌的鑒(jian)別(bie)具有重要(yao)參(can)考意義（見表）。不(bu)(bu)液化明膠，不(bu)(bu)分(fen)解尿素，不(bu)(bu)產(chan)(chan)(chan)生吲哚(duo)，不(bu)(bu)發酵乳糖和蔗糖，能發酵葡萄糖、甘露醇、麥芽(ya)糖和衛(wei)芽(ya)糖，大(da)多(duo)產(chan)(chan)(chan)酸(suan)產(chan)(chan)(chan)氣，少數只產(chan)(chan)(chan)酸(suan)不(bu)(bu)產(chan)(chan)(chan)氣。VP試驗陰性，有賴(lai)氨酸(suan)脫羧酶。DNA的G+C含量為(wei)50～53%。對(dui)熱抵抗力不(bu)(bu)強，在(zai)60℃15分(fen)鐘可被殺死。在(zai)水(shui)中(zhong)存活(huo)2～3周。在(zai)5%的石炭酸(suan)中(zhong)，5分(fen)鐘死亡。

本屬(shu)菌(jun)按(an)生(sheng)化反(fan)應分為(wei)4個亞屬(shu)。亞屬(shu)Ⅰ是(shi)生(sheng)化反(fan)應典型的和(he)最常(chang)見的沙門氏菌(jun)；亞屬(shu)Ⅱ和(he)Ⅳ是(shi)生(sheng)化反(fan)應不典型的沙門氏菌(jun)；亞屬(shu)Ⅲ是(shi)亞利桑那(nei)沙門氏菌(jun)。

沙(sha)門氏菌具(ju)有復雜的(de)抗(kang)(kang)原(yuan)結構，一(yi)般(ban)可(ke)分為(wei)菌體(O)抗(kang)(kang)原(yuan)、鞭毛(mao)(H)抗(kang)(kang)原(yuan)和表面(Vi)抗(kang)(kang)原(yuan)3種。

理化特性

生化反應很活潑，能分解多種糖類和醇。

培養特性

1）需氧及兼性厭氧菌。

2）在(zai)普通瓊脂培(pei)養(yang)基上生(sheng)長良好，培(pei)養(yang)24h后，形成中(zhong)等(deng)大(da)(da)小(xiao)、圓形、表(biao)面(mian)光滑、無色半透明(ming)、邊緣整(zheng)齊(qi)的菌(jun)落，其菌(jun)落特(te)征亦(yi)與大(da)(da)腸桿菌(jun)相(xiang)似（無糞臭味(wei)）。

3）鑒別培養(yang)基（麥康凱、SS、伊紅(hong)美藍）：一般無色菌落。

4）三糖鐵瓊脂(zhi)斜(xie)面(mian)：斜(xie)面(mian)為(wei)紅色，底部變黑(hei)并產氣。

生化特性

1）發酵葡(pu)萄(tao)糖，麥芽糖，甘露醇(chun)(chun)和山梨醇(chun)(chun)產(chan)氣；

2）不發酵乳糖、蔗糖和側金(jin)盞花醇；

3）不產吲哚(duo)、V-P反應陰性(xing)；

4）不(bu)水解尿(niao)素和對苯(ben)丙氨酸不(bu)脫氨。

傷(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、雞傷(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)及一部分雞白痢沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)發酵糖不產氣，大多數雞白痢沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)不發酵麥芽糖；除雞白痢沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、豬傷(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、甲型副(fu)傷(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、傷(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)和仙臺沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)等外，均能利用枸櫞酸鹽。

血清學特性

沙(sha)門氏(shi)菌具有復(fu)雜的抗(kang)原結構，一般沙(sha)門氏(shi)菌具有菌體(O)抗(kang)原、鞭毛(H)抗(kang)原和表面抗(kang)原(莢膜(mo)或包膜(mo)抗(kang)原)三種抗(kang)原。

傳播途徑

肉的污染

肉及(ji)其(qi)制品的(de)沙門(men)氏(shi)菌檢(jian)(jian)出率(lv)美國(guo)為(wei)(wei)20%-25%、英(ying)國(guo)為(wei)(wei)9.9%、日本(ben)檢(jian)(jian)查進口家禽的(de)污染率(lv)為(wei)(wei)10.3%，國(guo)內肉類沙門(men)氏(shi)菌檢(jian)(jian)出率(lv)在1.1%-39.5%。

蛋的污染

中國蛋及其(qi)制品沙門(men)氏(shi)菌檢出率為3.9%-43.7%，由于吃蛋引(yin)起鼠傷(shang)寒(han)病的病例報告逐(zhu)漸有增加的趨勢。

環境污染

食(shi)品(pin)在加(jia)工、運輸、出售過程中往往被(bei)沙門氏菌污染(ran)。沙門氏菌在糞(fen)便、土壤、食(shi)品(pin)、水中可生存5個月至2年之久。

傳播問題

恢復期患(huan)者(zhe)和無癥狀(zhuang)的帶菌者(zhe)也(ye)是常見的傳染源。

分布

廣泛(fan)分布于(yu)(yu)自然界，常(chang)(chang)常(chang)(chang)寄居(ju)在人和(he)動物(wu)體內(nei)，特別是(shi)家(jia)禽、家(jia)畜及寵物(wu)的腸(chang)道中。主要(yao)污染(ran)的食品(pin)有：肉和(he)肉制品(pin)、蛋(dan)和(he)蛋(dan)制品(pin)、奶和(he)奶制品(pin)等。由于(yu)(yu)沙門氏(shi)菌(jun)不分解(jie)蛋(dan)白質，食物(wu)被(bei)其污染(ran)后表(biao)面看(kan)起來(lai)似乎并沒有變(bian)化.

感染癥

沙門氏菌(jun)感染(ran)癥為人畜共患感染(ran)性疾病，主要由食用遭受(shou)污染(ran)的(de)食物(wu)導致，是許多國家食物(wu)中毒的(de)重要病源。

癥狀

典型癥(zheng)狀包括發熱、惡心、嘔吐、腹瀉及腹部(bu)絞痛等(deng)癥(zheng)狀，通常在發熱后72小時(shi)內會(hui)(hui)好轉。嬰(ying)兒、老年人、免疫(yi)功能(neng)(neng)低下的(de)患者則可能(neng)(neng)因沙門(men)氏菌進入(ru)血液而出現嚴重且危(wei)及生命的(de)菌血癥(zheng)，少(shao)數(shu)還會(hui)(hui)合并腦膜(mo)炎(yan)或骨(gu)髓炎(yan)。

治療

一(yi)般(ban)沙門氏菌造成(cheng)的腸胃炎不需(xu)要(yao)給予抗生素治(zhi)療(liao)；而以補充水(shui)分與電解質為主；但(dan)對于新生兒、免疫功能低(di)下患者及特殊傷員；則需(xu)要(yao)視情況紿予抗生素治(zhi)療(liao)。

預防

1、餐前(qian)、便后、接觸食物前(qian)、接觸動物或生蛋(dan)后應(ying)仔細洗凈雙手(shou)。

2、處理生食(shi)和(he)熟食(shi)的砧(zhen)板要分開。

3、食物要熟透(tou)再吃(尤(you)其是(shi)雞(ji)蛋與家禽類)。

4、非(fei)現做現吃的食物應(ying)以(yi)保(bao)鮮膜包(bao)覆后放(fang)進冰(bing)箱保(bao)存(cun)，再次食用前應(ying)加熱或煮熟。

5、撲滅并阻隔蒼蠅(ying)等病(bing)媒(mei)。被蒼蠅(ying)沾染、過期或(huo)腐(fu)敗的(de)不潔(jie)食物均應丟棄，切勿食用。

6、水(shui)塔應(ying)經常清洗、消毒。

7、旅(lv)行(xing)或野營(ying)時(shi)的(de)飲用水應煮沸(fei)并(bing)消毒。

8、如有(you)嘔吐、腹瀉或發熱等(deng)癥狀(zhuang)，應盡快就醫。

感染

沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)是美國(guo)食(shi)物(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)毒(du)致(zhi)死的(de)(de)主要(yao)原(yuan)因(yin)(yin)(yin)。美國(guo)人(ren)(ren)(ren)對(dui)這種病菌(jun)(jun)(jun)(jun)一(yi)點都(dou)不(bu)(bu)(bu)陌生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)，每年(nian)全國(guo)大(da)(da)約報告40000例(li)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)病例(li)。但實(shi)際的(de)(de)感染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)人(ren)(ren)(ren)數可(ke)(ke)(ke)能要(yao)達20倍以(yi)上，因(yin)(yin)(yin)為許多輕(qing)型(xing)病人(ren)(ren)(ren)可(ke)(ke)(ke)能未確(que)診(zhen)，據不(bu)(bu)(bu)完全統計，每年(nian)大(da)(da)約有(you)(you)(you)(you)1000人(ren)(ren)(ren)死于急性沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)。但是，以(yi)前各州爆(bao)發(fa)(fa)的(de)(de)疫(yi)情幾(ji)乎都(dou)與人(ren)(ren)(ren)們(men)吃(chi)(chi)了染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)上沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)肉類、蛋(dan)類、乳(ru)類有(you)(you)(you)(you)關(guan)，但迄今為止，很少聽說吃(chi)(chi)蔬(shu)果(guo)大(da)(da)面(mian)積(ji)受沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)污染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)甚至在(zai)人(ren)(ren)(ren)群中(zhong)(zhong)(zhong)引發(fa)(fa)大(da)(da)疫(yi)情的(de)(de)。對(dui)此，周福(fu)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)教授解釋(shi)說，這可(ke)(ke)(ke)能是西(xi)紅(hong)(hong)柿在(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長的(de)(de)過(guo)程中(zhong)(zhong)(zhong)，由于空氣中(zhong)(zhong)(zhong)紫外線不(bu)(bu)(bu)夠強烈，植物(wu)在(zai)灌溉(gai)過(guo)程或因(yin)(yin)(yin)土壤中(zhong)(zhong)(zhong)含(han)有(you)(you)(you)(you)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)，這樣才使(shi)西(xi)紅(hong)(hong)柿的(de)(de)表(biao)皮上沾染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)了沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)，加上不(bu)(bu)(bu)少人(ren)(ren)(ren)有(you)(you)(you)(you)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)食(shi)西(xi)紅(hong)(hong)柿的(de)(de)習慣(guan)，如果(guo)沒有(you)(you)(you)(you)清洗干凈，就(jiu)完全有(you)(you)(you)(you)可(ke)(ke)(ke)能發(fa)(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)感染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)。不(bu)(bu)(bu)光是食(shi)用(yong)西(xi)紅(hong)(hong)柿，其他瓜果(guo)蔬(shu)菜也一(yi)樣。沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)主要(yao)污染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)肉類食(shi)品，魚、禽(qin)、奶、蛋(dan)類食(shi)品也可(ke)(ke)(ke)受此菌(jun)(jun)(jun)(jun)污染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)。沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)食(shi)物(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)毒(du)全年(nian)都(dou)可(ke)(ke)(ke)發(fa)(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)，吃(chi)(chi)了未煮(zhu)透的(de)(de)病、死牲畜肉或在(zai)屠(tu)宰(zai)后其他環節污染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)的(de)(de)牲畜肉是引起沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)食(shi)物(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)毒(du)的(de)(de)最主要(yao)原(yuan)因(yin)(yin)(yin)。有(you)(you)(you)(you)食(shi)品專家(jia)指出(chu)美國(guo)人(ren)(ren)(ren)吃(chi)(chi)雞(ji)蛋(dan)的(de)(de)習慣(guan)與國(guo)人(ren)(ren)(ren)不(bu)(bu)(bu)同，他們(men)喜歡吃(chi)(chi)半熟的(de)(de)雞(ji)蛋(dan)甚至是生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)雞(ji)蛋(dan)，所以(yi)一(yi)旦(dan)雞(ji)蛋(dan)里含(han)有(you)(you)(you)(you)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)，感染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)的(de)(de)幾(ji)率就(jiu)比較(jiao)高。“在(zai)國(guo)內，生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)雞(ji)蛋(dan)里含(han)有(you)(you)(you)(you)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)其實(shi)并不(bu)(bu)(bu)奇怪，只(zhi)不(bu)(bu)(bu)過(guo)國(guo)人(ren)(ren)(ren)喜歡將雞(ji)蛋(dan)煮(zhu)熟吃(chi)(chi)，這樣就(jiu)大(da)(da)大(da)(da)減(jian)少了感染(ran)(ran)(ran)(ran)(ran)的(de)(de)幾(ji)率。”

癥狀及原因

由(you)(you)沙(sha)門(men)氏菌(jun)引(yin)起(qi)的(de)食(shi)品中毒癥(zheng)(zheng)狀主要有(you)惡心(xin)、嘔吐、腹痛(tong)、頭痛(tong)、畏寒和腹瀉等，還伴有(you)乏力(li)、肌肉酸(suan)痛(tong)、視(shi)覺模糊(hu)、中等程度發熱、躁動不安和嗜睡，延續(xu)時間(jian)2～3d，平均致死率為(wei)4．1%。其主要原因是由(you)(you)于攝(she)入了含有(you)大量沙(sha)門(men)氏菌(jun)屬(shu)的(de)非寄主專一性菌(jun)種或血清(qing)型的(de)食(shi)品所引(yin)起(qi)的(de)。在攝(she)入含毒食(shi)品之后．癥(zheng)(zheng)狀一般(ban)在12～14h內出現，有(you)些潛伏期較長。

預防措施

防止沙門氏菌(jun)(jun)污(wu)染(ran)食品(pin)；控制(zhi)食品(pin)中(zhong)沙門氏菌(jun)(jun)的繁(fan)殖(zhi)；加(jia)熱以(yi)徹底殺滅病(bing)原菌(jun)(jun)。

沙(sha)門(men)氏(shi)菌不耐高溫，食物的中心溫度達70℃以上，持續5分(fen)鐘一(yi)般都(dou)可以殺死(si)包括(kuo)沙(sha)門(men)氏(shi)菌等常見(jian)食源性致病菌。家庭中一(yi)般的熱(re)處理烹調(diao)方式都(dou)可有效殺滅該菌。

檢測方法

前增菌

稱(cheng)取(qu)25g（mL）樣品放入盛(sheng)有225 mL BPW的無菌(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)杯中(zhong)，以8000 r/min～10 000 r/min均(jun)質(zhi)(zhi)1min～2min，或置于盛(sheng)有225 mL BPW的無菌(jun)均(jun)質(zhi)(zhi)袋中(zhong)，用拍擊式均(jun)質(zhi)(zhi)器拍打1min～2min。若樣品為液態，不需要均(jun)質(zhi)(zhi)，振蕩混勻(yun)。如需測定pH值，用1mol/mL無菌(jun)NaOH或HCl調pH至(zhi)6.8±0.2。無菌(jun)操作將樣品轉至(zhi)500mL錐形瓶中(zhong)，如使用均(jun)質(zhi)(zhi)袋，可直接進行培(pei)養，于36 ℃±1℃培(pei)養8h～18h。

如為冷(leng)凍(dong)產品，應在45℃以下不(bu)超過(guo)(guo)15min，或2℃～5℃不(bu)超過(guo)(guo)18h解凍(dong)。

增菌

輕(qing)輕(qing)搖(yao)動培(pei)養(yang)過(guo)的樣品混合物，移取1mL，轉種于10mL TTB內，于42℃±1℃培(pei)養(yang)18h～24h。同時，另取1mL，轉種于10 mL SC內，于36℃±1℃培(pei)養(yang)18h～24h。

分離

分(fen)別(bie)(bie)用接種環取增(zeng)菌(jun)液1環，劃(hua)線接種于一(yi)個BS瓊(qiong)脂(zhi)(zhi)平板(ban)和一(yi)個XLD瓊(qiong)脂(zhi)(zhi)平板(ban)（或HE瓊(qiong)脂(zhi)(zhi)平板(ban)或沙(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)屬(shu)顯(xian)(xian)色培養基平板(ban)）。于36℃±1℃分(fen)別(bie)(bie)培養18h～24h（XLD瓊(qiong)脂(zhi)(zhi)平板(ban)、HE瓊(qiong)脂(zhi)(zhi)平板(ban)、沙(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)屬(shu)顯(xian)(xian)色培養基平板(ban)）或40h～48h （BS瓊(qiong)脂(zhi)(zhi)平板(ban)），觀(guan)察各(ge)個平板(ban)上生長的菌(jun)落(luo)，各(ge)個平板(ban)上的菌(jun)落(luo)特征見(jian)表1。

表(biao) 1 沙(sha)門氏菌(jun)屬在不同選(xuan)擇(ze)性瓊脂(zhi)平板上的(de)菌(jun)落特征

選擇性瓊脂平板 沙門(men)氏菌

BS 瓊脂 菌落(luo)為黑色(se)(se)(se)有金屬(shu)光澤、棕褐色(se)(se)(se)或(huo)灰色(se)(se)(se)，菌落(luo)周(zhou)圍(wei)培(pei)養基(ji)可(ke)呈(cheng)黑色(se)(se)(se)或(huo)棕色(se)(se)(se)；有些菌株形成灰綠色(se)(se)(se)的菌落(luo)，周(zhou)圍(wei)培(pei)養基(ji)不變(bian)。

HE 瓊脂 藍綠色(se)(se)(se)(se)或藍色(se)(se)(se)(se)，多數菌落中(zhong)(zhong)心黑色(se)(se)(se)(se)或幾(ji)乎全黑色(se)(se)(se)(se)；有(you)些菌株為黃色(se)(se)(se)(se)，中(zhong)(zhong)心黑色(se)(se)(se)(se)或幾(ji)乎全黑色(se)(se)(se)(se)。

XLD 瓊脂 菌落呈粉紅色，帶或不帶黑(hei)(hei)色中(zhong)(zhong)心(xin)，有些菌株可呈現大(da)的帶光澤的黑(hei)(hei)色中(zhong)(zhong)心(xin)，或呈現全部黑(hei)(hei)色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑(hei)(hei)色中(zhong)(zhong)心(xin)。

沙門(men)氏菌屬顯色(se)培養 按(an)照顯色(se)培養基的(de)說明進行判定(ding)。

自19世(shi)紀后(hou)(hou)期，沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)首次(ci)被鑒定為(wei)人類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)病(bing)(bing)原(yuan)以(yi)來(lai)，檢測方(fang)(fang)法(fa)(fa)學都是建立在(zai)(zai)采取(qu)感(gan)染病(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便(bian)或血液(ye)作(zuo)為(wei)臨床(chuang)病(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基礎上。此后(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年(nian)間(jian)，用(yong)(yong)于(yu)從(cong)(cong)食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)分(fen)離(li)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)實質上與(yu)那些(xie)用(yong)(yong)于(yu)臨床(chuang)病(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)是相(xiang)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但至少有三個(ge)因(yin)素限制了(le)用(yong)(yong)于(yu)臨床(chuang)病(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)應用(yong)(yong)在(zai)(zai)食(shi)(shi)品(pin)(pin)分(fen)析上。第(di)一(yi)(yi)，通(tong)常，沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量(liang)水(shui)平(ping)在(zai)(zai)污染食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)比(bi)有感(gan)染病(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)料(liao)中(zhong)要低很多；第(di)二，食(shi)(shi)品(pin)(pin)本身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性(xing)質會干擾病(bing)(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢測，例如，某些(xie)食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)固有菌(jun)(jun)群可(ke)(ke)能(neng)處在(zai)(zai)一(yi)(yi)個(ge)很高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)平(ping)，從(cong)(cong)而影(ying)(ying)響特(te)定細(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選擇性(xing)分(fen)離(li)和(he)鑒定；第(di)三，與(yu)臨床(chuang)病(bing)(bing)料(liao)不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是，經過加工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)(pin)，由(you)于(yu)加熱、干燥(zao)、高(gao)含(han)鹽量(liang)、酸和(he)冷凍等因(yin)素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)，其(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)受(shou)到了(le)尚不(bu)致命(ming)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷(shang)(shang)或稱“致傷(shang)(shang)”。這(zhe)就形成了(le)一(yi)(yi)個(ge)具(ju)有不(bu)同生(sheng)長特(te)性(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)菌(jun)(jun)群。這(zhe)種(zhong)現象對那些(xie)希望從(cong)(cong)食(shi)(shi)物樣品(pin)(pin)中(zhong)分(fen)離(li)出沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)(pin)分(fen)析家來(lai)說有很大影(ying)(ying)響，因(yin)為(wei)在(zai)(zai)選擇培養基上直接(jie)培養“致傷(shang)(shang)”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)通(tong)常是以(yi)細(xi)菌(jun)(jun)死亡(wang)和(he)試驗失敗而告終。為(wei)克(ke)服這(zhe)些(xie)困難(nan)，人們(men)建立了(le)一(yi)(yi)種(zhong)簡(jian)單(dan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生(sheng)物增殖步驟，專門(men)(men)(men)(men)針(zhen)對以(yi)食(shi)(shi)品(pin)(pin)為(wei)傳播載體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)原(yuan)。雖然這(zhe)些(xie)方(fang)(fang)法(fa)(fa)本身證明是可(ke)(ke)靠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)，但卻很費力、耗(hao)時，需(xu)要4～7天才能(neng)完成。因(yin)此，在(zai)(zai)需(xu)要及時、快(kuai)速(su)評(ping)價食(shi)(shi)品(pin)(pin)中(zhong)微生(sheng)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全(quan)性(xing)時，通(tong)常不(bu)被采用(yong)(yong)。隨著DNA和(he)抗體技術(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展，近(jin)10～15年(nian)間(jian)發展了(le)無(wu)數改進的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)，其(qi)中(zhong)許多可(ke)(ke)以(yi)在(zai)(zai)48h內檢出沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)，這(zhe)些(xie)方(fang)(fang)法(fa)(fa)通(tong)稱為(wei)快(kuai)速(su)檢測。

抗體檢測

利(li)用抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)反應(ying)的(de)(de)(de)顯(xian)著(zhu)特異(yi)性，來(lai)進行細(xi)菌(jun)的(de)(de)(de)鑒別和(he)血清學定(ding)型，已有(you)半個(ge)多世(shi)紀的(de)(de)(de)歷史。細(xi)菌(jun)菌(jun)體(ti)(ti)(ti)或鞭(bian)毛抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)特異(yi)性抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)存在(zai)，使得(de)人們可以(yi)(yi)建立(li)一些(xie)快速方(fang)(fang)法(fa)來(lai)檢(jian)測(ce)以(yi)(yi)食(shi)品為(wei)(wei)載(zai)體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)病原(yuan)(yuan)。已經建立(li)的(de)(de)(de)沙門氏菌(jun)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)學檢(jian)測(ce)方(fang)(fang)法(fa)有(you)許多種，大致可分為(wei)(wei)以(yi)(yi)酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)（ELISA)，熒(ying)光抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)染色(se)（免(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒(ying)光法(fa)），同位(wei)素(su)標(biao)(biao)記(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)（放射免(mian)疫(yi)(yi)(yi)試驗(yan)）為(wei)(wei)基(ji)(ji)礎(chu)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)及(ji)其(qi)(qi)它(ta)多種以(yi)(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)為(wei)(wei)基(ji)(ji)礎(chu)，利(li)用乳(ru)膠(jiao)凝集、免(mian)疫(yi)(yi)(yi)傳感器、免(mian)疫(yi)(yi)(yi)擴散及(ji)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)色(se)譜技術(shu)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)。但常規中最廣泛采(cai)用的(de)(de)(de)是以(yi)(yi)雙位(wei)點ELISA技術(shu)即夾心ELISA為(wei)(wei)基(ji)(ji)礎(chu)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)。此法(fa)改進后用有(you)放射活性的(de)(de)(de)同位(wei)素(su)替(ti)代標(biao)(biao)記(ji)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)，概括地說，是指以(yi)(yi)固定(ding)在(zai)固體(ti)(ti)(ti)基(ji)(ji)質(zhi)上(shang)(shang)的(de)(de)(de)“捕(bu)捉(zhuo)”抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)來(lai)捕(bu)捉(zhuo)目標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)，經洗(xi)滌除去未結(jie)合的(de)(de)(de)成分，加(jia)入第(di)(di)二(er)種酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)，此者(zhe)結(jie)合在(zai)捕(bu)捉(zhuo)到的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)不同位(wei)點上(shang)(shang)，第(di)(di)二(er)次(ci)洗(xi)滌后加(jia)入酶(mei)作(zuo)用基(ji)(ji)質(zhi)，并令其(qi)(qi)與顏色(se)成分反應(ying)，然后用分光光度法(fa)即很容易檢(jian)測(ce)到目標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)。采(cai)用微(wei)量滴定(ding)板作(zuo)為(wei)(wei)固態基(ji)(ji)質(zhi)使反應(ying)形式標(biao)(biao)準化，并促成其(qi)(qi)自動化。

黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)等人(ren)首(shou)次(ci)在國內口(kou)岸(an)系統應用(yong)微(wei)量(liang)(liang)板ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對(dui)進(jin)(jin)出(chu)(chu)(chu)口(kou)動物產品(pin)（魚粉、肉(rou)(rou)(rou)骨粉等）進(jin)(jin)行(xing)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)。該法(fa)(fa)(fa)(fa)采(cai)用(yong)預先包被了(le)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)（A-E群）單克(ke)隆抗(kang)(kang)體的(de)(de)微(wei)量(liang)(liang)板，加(jia)(jia)入經增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)處理(li)(li)的(de)(de)樣品(pin)，反應后(hou)再加(jia)(jia)入一(yi)定的(de)(de)指示劑，作(zuo)(zuo)用(yong)畢后(hou)用(yong)酶(mei)標儀測(ce)定OD值來判定結果(guo)(guo)(guo)。食物樣品(pin)經適(shi)當的(de)(de)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)處理(li)(li)，也可(ke)用(yong)此法(fa)(fa)(fa)(fa)進(jin)(jin)行(xing)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)。ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)極限(xian)范圍在105～106個(ge)細(xi)胞(bao)/ml，因此，要(yao)得出(chu)(chu)(chu)可(ke)靠的(de)(de)結果(guo)(guo)(guo)，食物樣品(pin)首(shou)先必需(xu)進(jin)(jin)行(xing)預增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)、選擇性(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)，通常還要(yao)在含有(you)D-甘(gan)露(lu)糖的(de)(de)肉(rou)(rou)(rou)湯（M肉(rou)(rou)(rou)湯）中進(jin)(jin)行(xing)后(hou)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)，以(yi)促進(jin)(jin)鞭毛發育(yu)(yu)(yu)。總(zong)的(de)(de)來說，標準的(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣品(pin)的(de)(de)制(zhi)備，約(yue)需(xu)要(yao)經過(guo)40～48h的(de)(de)孵育(yu)(yu)(yu)才(cai)能完成(cheng)。黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)等人(ren)的(de)(de)微(wei)量(liang)(liang)板ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)（Salmonellatest1)樣品(pin)制(zhi)備過(guo)程(cheng)分(fen)三步，共(gong)耗時(shi)(shi)(shi)24h：①選用(yong)營(ying)養(yang)肉(rou)(rou)(rou)湯進(jin)(jin)行(xing)預增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)（6h），使(shi)(shi)“致(zhi)傷”、冷凍的(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)復蘇。②使(shi)(shi)用(yong)選擇性(xing)培養(yang)基RV進(jin)(jin)行(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)（14h），使(shi)(shi)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)大量(liang)(liang)繁殖，同時(shi)(shi)(shi)抑(yi)制(zhi)其它雜菌(jun)(jun)生長(chang)。③使(shi)(shi)用(yong)營(ying)養(yang)肉(rou)(rou)(rou)湯（蛋白胨(dong)水）進(jin)(jin)行(xing)后(hou)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)（4h），使(shi)(shi)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)數量(liang)(liang)大大增(zeng)(zeng)加(jia)(jia)。比上(shang)述標準的(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣品(pin)制(zhi)備過(guo)程(cheng)縮短了(le)一(yi)半的(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間。ELISA方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)本身，則僅需(xu)要(yao)大約(yue)2h而已（其中30min是操作(zuo)(zuo)時(shi)(shi)(shi)間，90min是孵育(yu)(yu)(yu)時(shi)(shi)(shi)間）。相比之下，黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)等人(ren)的(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)可(ke)在27h內完成(cheng)，比上(shang)述方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)縮短了(le)一(yi)半的(de)(de)時(shi)(shi)(shi)間，頗(po)值得推廣應用(yong)。最(zui)新式(shi)的(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)免疫學(xue)檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)，利用(yong)經特異性(xing)抗(kang)(kang)體敏化的(de)(de)免疫色譜卡(ka)(ka)片為基礎。幾滴樣品(pin)加(jia)(jia)到卡(ka)(ka)片上(shang)，結果(guo)(guo)(guo)可(ke)以(yi)直接用(yong)肉(rou)(rou)(rou)眼(yan)讀出(chu)(chu)(chu)。免疫色譜卡(ka)(ka)片極易操作(zuo)(zuo)，且由于無需(xu)要(yao)特殊設備，很(hen)適(shi)合小型實驗室使(shi)(shi)用(yong)。盡(jin)管卡(ka)(ka)片檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)一(yi)樣需(xu)要(yao)對(dui)樣品(pin)進(jin)(jin)行(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)處理(li)(li)，但它（卡(ka)(ka)片法(fa)(fa)(fa)(fa)）本身通常需(xu)時(shi)(shi)(shi)不(bu)超過(guo)10min，如果(guo)(guo)(guo)采(cai)用(yong)黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)等人(ren)的(de)(de)樣品(pin)制(zhi)備法(fa)(fa)(fa)(fa)，則可(ke)使(shi)(shi)操作(zuo)(zuo)時(shi)(shi)(shi)間更為縮短。

核酸法

細(xi)(xi)胞核(he)酸DNA和RNA是唯一(yi)(yi)一(yi)(yi)類(lei)可(ke)以(yi)攜帶信息(xi)的(de)(de)大(da)(da)分(fen)子(zi)(zi)。由(you)于(yu)所有(you)的(de)(de)細(xi)(xi)胞都含(han)(han)有(you)這種分(fen)子(zi)(zi)，可(ke)以(yi)利用(yong)(yong)(yong)(yong)它(ta)作(zuo)為檢(jian)(jian)測(ce)的(de)(de)標靶。標靶通常(chang)是一(yi)(yi)個(ge)特(te)異性(xing)(xing)核(he)酸序列(lie)，它(ta)可(ke)通過(guo)以(yi)補體(ti)(ti)核(he)酸分(fen)子(zi)(zi)作(zuo)為探(tan)(tan)(tan)針(zhen)來檢(jian)(jian)出。與免(mian)疫(yi)(yi)學(xue)(xue)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)似，探(tan)(tan)(tan)針(zhen)也需(xu)(xu)要(yao)加附適(shi)當的(de)(de)標記(ji)，如(ru)放(fang)射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)(tong)位(wei)(wei)素(su)、酶(mei)或(huo)發(fa)(fa)光的(de)(de)標識物(wu)。Fitts等人在食品沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)中引入(ru)了第(di)(di)一(yi)(yi)代DNA—RNA雜(za)(za)交技(ji)術(shu)，此(ci)法(fa)(fa)(fa)(fa)應用(yong)(yong)(yong)(yong)的(de)(de)探(tan)(tan)(tan)針(zhen)含(han)(han)有(you)用(yong)(yong)(yong)(yong)放(fang)射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)(tong)位(wei)(wei)素(su)標記(ji)的(de)(de)傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)DNA片(pian)段(duan)，其(qi)(qi)敏(min)感性(xing)(xing)高，經大(da)(da)約(yue)48h的(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)步(bu)驟后，檢(jian)(jian)測(ce)極限可(ke)達108個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)/ml，但由(you)于(yu)要(yao)使用(yong)(yong)(yong)(yong)放(fang)射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)(tong)位(wei)(wei)素(su)，只(zhi)能在專門(men)(men)的(de)(de)實驗室應用(yong)(yong)(yong)(yong)，此(ci)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)優(you)點都被抵(di)消了。為此(ci)，以(yi)核(he)酸雜(za)(za)交為基(ji)礎的(de)(de)第(di)(di)二代技(ji)術(shu)—比色計(ji)已發(fa)(fa)展起來。這種方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)依賴于(yu)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)核(he)糖(tang)(tang)體(ti)(ti)RNA(rRNA)—核(he)糖(tang)(tang)體(ti)(ti)發(fa)(fa)育過(guo)程中儲存(cun)的(de)(de)核(he)酸成(cheng)分(fen)的(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)。核(he)糖(tang)(tang)體(ti)(ti)是細(xi)(xi)胞蛋白質合成(cheng)器的(de)(de)一(yi)(yi)部分(fen)，每個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)細(xi)(xi)胞中存(cun)在5000～20000個(ge)復制(zhi)體(ti)(ti)，而相(xiang)比之下染色體(ti)(ti)DNA復制(zhi)體(ti)(ti)僅2～10個(ge)。這種天然富(fu)含(han)(han)rRNA標靶序列(lie)的(de)(de)情況使得用(yong)(yong)(yong)(yong)無輻射(she)(she)計(ji)檢(jian)(jian)測(ce)成(cheng)為可(ke)能，同(tong)(tong)時(shi)又保(bao)持了與放(fang)射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)(tong)位(wei)(wei)素(su)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)當或(huo)更高的(de)(de)敏(min)感性(xing)(xing)。其(qi)(qi)另一(yi)(yi)優(you)點是由(you)于(yu)rRNA為單鏈(lian)（而DNA為雙鏈(lian)），雜(za)(za)交前無需(xu)(xu)經過(guo)變性(xing)(xing)步(bu)驟。要(yao)得到(dao)陽性(xing)(xing)結(jie)果，此(ci)法(fa)(fa)(fa)(fa)需(xu)(xu)要(yao)105個(ge)靶細(xi)(xi)胞/ml，因此(ci)對(dui)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)來說，需(xu)(xu)要(yao)進行預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和選(xuan)擇性(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)，總共約(yue)50h。rRNA探(tan)(tan)(tan)針(zhen)法(fa)(fa)(fa)(fa)比沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)（酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)(yi)檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)）更耗時(shi)，但二者成(cheng)本(ben)相(xiang)近。食品細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)最(zui)新(xin)進展是在化學(xue)(xue)擴(kuo)增(zeng)體(ti)(ti)系(xi)方(fang)(fang)面(mian)的(de)(de)發(fa)(fa)展，即聚合酶(mei)鏈(lian)反(fan)應(PCR)，用(yong)(yong)(yong)(yong)該體(ti)(ti)系(xi)可(ke)對(dui)制(zhi)備好(hao)的(de)(de)樣品進行細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)DNA擴(kuo)增(zeng)，以(yi)便(bian)更易于(yu)用(yong)(yong)(yong)(yong)諸如(ru)凝膠電泳法(fa)(fa)(fa)(fa)或(huo)比色型ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)測(ce)。用(yong)(yong)(yong)(yong)于(yu)檢(jian)(jian)測(ce)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和其(qi)(qi)它(ta)以(yi)食物(wu)為載(zai)體(ti)(ti)的(de)(de)病(bing)原(yuan)的(de)(de)PCR方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)業已建立，其(qi)(qi)中一(yi)(yi)些方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)顯示了極好(hao)的(de)(de)敏(min)感性(xing)(xing)。但該法(fa)(fa)(fa)(fa)較(jiao)難(nan)自動化，且(qie)必需(xu)(xu)經選(xuan)擇性(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)以(yi)稀釋(shi)可(ke)能干擾檢(jian)(jian)測(ce)反(fan)應的(de)(de)某些成(cheng)分(fen)。一(yi)(yi)個(ge)完(wan)整的(de)(de)以(yi)PCR為基(ji)礎的(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)，需(xu)(xu)要(yao)2天才(cai)能完(wan)成(cheng)，很大(da)(da)程度上(shang)抵(di)銷了其(qi)(qi)高敏(min)感性(xing)(xing)的(de)(de)優(you)點，但這種方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)對(dui)那些含(han)(han)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)較(jiao)少或(huo)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)“致傷(shang)”嚴重難(nan)以(yi)復蘇而仍(reng)保(bao)有(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)rRNA的(de)(de)樣品尤(you)其(qi)(qi)有(you)效。