沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)是一(yi)種常(chang)見的食源(yuan)性致病(bing)菌(jun)。沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)鑒定的傳統方法主要是根據形態學特(te)(te)征(zheng)(zheng)、培養特(te)(te)征(zheng)(zheng)、生(sheng)理生(sheng)化特(te)(te)征(zheng)(zheng)、抗原特(te)(te)征(zheng)(zheng)、噬菌(jun)體特(te)(te)征(zheng)(zheng)等(deng)。1885年沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)等(deng)在霍亂流行(xing)時分離(li)到豬霍亂沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun),故定名為沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)屬。沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)屬有的專(zhuan)對(dui)(dui)人(ren)類致病(bing),有的只對(dui)(dui)動物致病(bing),也(ye)有對(dui)(dui)人(ren)和動物都(dou)致病(bing)。沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)病(bing)是指由各種類型沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)所(suo)引起的對(dui)(dui)人(ren)類、家畜以及野生(sheng)禽獸(shou)不(bu)同形式的總(zong)稱。感染(ran)沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)的人(ren)或帶菌(jun)者的糞便污染(ran)食品,可(ke)使(shi)人(ren)發生(sheng)食物中毒。據統計在世界各國的種類細菌(jun)性食物中毒中,沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)引起的食物中毒常(chang)列榜首(shou)。我國內陸(lu)地區(qu)也(ye)以沙(sha)門氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)為首(shou)位。
沙門(men)氏菌(jun)(jun)(jun)病(bing)的病(bing)原體。屬(shu)腸桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)科,革蘭(lan)氏陰性腸道桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)。已發現的近一千(qian)種(zhong)(或菌(jun)(jun)(jun)株)。按(an)其(qi)抗原成分,可分為甲(jia)、乙(yi)、丙(bing)(bing)、丁(ding)、戊(wu)等基(ji)本(ben)菌(jun)(jun)(jun)組(zu)。其(qi)中(zhong)與人體疾(ji)病(bing)有(you)關的主要(yao)有(you)甲(jia)組(zu)的副傷(shang)寒(han)(han)甲(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),乙(yi)組(zu)的副傷(shang)寒(han)(han)乙(yi)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)(he)(he)鼠傷(shang)寒(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),丙(bing)(bing)組(zu)的副傷(shang)寒(han)(han)丙(bing)(bing)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)(he)(he)豬(zhu)霍亂桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),丁(ding)組(zu)的傷(shang)寒(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)(he)(he)腸炎(yan)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)等。除傷(shang)寒(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)、副傷(shang)寒(han)(han)甲(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)(he)(he)副傷(shang)寒(han)(han)乙(yi)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)引(yin)起人類的疾(ji)病(bing)外,大多數僅能引(yin)起家(jia)畜、鼠類和(he)(he)(he)禽(qin)類等動物(wu)(wu)的疾(ji)病(bing),但有(you)時也(ye)可污染(ran)人類的食物(wu)(wu)而(er)引(yin)起食物(wu)(wu)中(zhong)毒。
沙(sha)門(men)氏菌在水(shui)中(zhong)不易繁殖,但可生存(cun)2-3周,冰箱中(zhong)可生存(cun)3-4個(ge)月,在自然環境的糞便中(zhong)可存(cun)活1-2個(ge)月。沙(sha)門(men)氏菌最適繁殖溫度為37℃,在20℃以上即能大量繁殖,因此,低溫儲(chu)存(cun)食品是一項(xiang)重要預(yu)防(fang)措施。
菌(jun)體大小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽(ya)(ya)胞,一般(ban)無莢(jia)膜(mo),除(chu)雞白痢沙(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)和雞傷寒沙(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)外,大多有周身鞭毛。營養要求(qiu)不(bu)(bu)(bu)高,分(fen)(fen)離(li)培養常(chang)采用腸道選(xuan)擇鑒別(bie)培養基(ji)。生(sheng)化(hua)反(fan)應對本屬菌(jun)的鑒別(bie)具有重(zhong)要參考(kao)意義(見(jian)表(biao))。不(bu)(bu)(bu)液化(hua)明(ming)膠,不(bu)(bu)(bu)分(fen)(fen)解尿素,不(bu)(bu)(bu)產生(sheng)吲哚,不(bu)(bu)(bu)發酵(jiao)乳糖和蔗糖,能發酵(jiao)葡萄糖、甘露醇、麥芽(ya)(ya)糖和衛芽(ya)(ya)糖,大多產酸(suan)產氣,少數只產酸(suan)不(bu)(bu)(bu)產氣。VP試驗陰性,有賴氨酸(suan)脫羧酶。DNA的G+C含量(liang)為50~53%。對熱抵抗力不(bu)(bu)(bu)強,在(zai)60℃15分(fen)(fen)鐘可(ke)被殺(sha)死。在(zai)水中(zhong)存活2~3周。在(zai)5%的石(shi)炭(tan)酸(suan)中(zhong),5分(fen)(fen)鐘死亡。
本(ben)屬(shu)菌(jun)(jun)(jun)按生(sheng)化(hua)反應(ying)(ying)分為(wei)4個亞(ya)屬(shu)。亞(ya)屬(shu)Ⅰ是(shi)生(sheng)化(hua)反應(ying)(ying)典(dian)型的(de)(de)和(he)最常(chang)見的(de)(de)沙(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun);亞(ya)屬(shu)Ⅱ和(he)Ⅳ是(shi)生(sheng)化(hua)反應(ying)(ying)不典(dian)型的(de)(de)沙(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun);亞(ya)屬(shu)Ⅲ是(shi)亞(ya)利桑那沙(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)。
沙門氏菌具有復雜的(de)抗原結(jie)構,一般可分(fen)為菌體(ti)(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表(biao)面(mian)(Vi)抗原3種。
生化反應很(hen)活潑,能分解(jie)多種糖類和醇。
1)需(xu)氧(yang)及兼性厭氧(yang)菌。
2)在普(pu)通(tong)瓊脂培養基上生長良(liang)好,培養24h后,形成(cheng)中等大小、圓形、表面光(guang)滑、無色半透明、邊緣整齊的菌(jun)(jun)落,其菌(jun)(jun)落特征亦與大腸桿(gan)菌(jun)(jun)相似(si)(無糞臭味(wei))。
3)鑒(jian)別培養基(麥康凱、SS、伊紅美藍):一般無色菌落(luo)。
4)三糖鐵瓊(qiong)脂斜(xie)面(mian):斜(xie)面(mian)為紅色,底(di)部變黑并產氣。
1)發(fa)酵葡萄糖,麥芽糖,甘露醇和(he)山(shan)梨醇產氣;
2)不發(fa)酵(jiao)乳糖(tang)、蔗糖(tang)和側金盞花醇;
3)不產(chan)吲(yin)哚、V-P反應陰(yin)性(xing);
4)不水解尿素和對苯丙氨(an)酸不脫氨(an)。
傷(shang)寒沙(sha)門氏(shi)菌、雞(ji)(ji)傷(shang)寒沙(sha)門氏(shi)菌及一(yi)部(bu)分雞(ji)(ji)白痢沙(sha)門氏(shi)菌發(fa)酵糖不產氣,大(da)多(duo)數雞(ji)(ji)白痢沙(sha)門氏(shi)菌不發(fa)酵麥芽糖;除(chu)雞(ji)(ji)白痢沙(sha)門氏(shi)菌、豬傷(shang)寒沙(sha)門氏(shi)菌、甲型副(fu)傷(shang)寒沙(sha)門氏(shi)菌、傷(shang)寒沙(sha)門氏(shi)菌和仙臺沙(sha)門氏(shi)菌等(deng)外,均能利用枸櫞(yuan)酸鹽。
沙(sha)門氏菌具有復雜的抗原(yuan)(yuan)(yuan)結構,一(yi)般沙(sha)門氏菌具有菌體(O)抗原(yuan)(yuan)(yuan)、鞭(bian)毛(mao)(H)抗原(yuan)(yuan)(yuan)和表面抗原(yuan)(yuan)(yuan)(莢膜(mo)或(huo)包膜(mo)抗原(yuan)(yuan)(yuan))三種抗原(yuan)(yuan)(yuan)。
肉及(ji)其制品的沙門氏菌(jun)檢出(chu)率美國為(wei)20%-25%、英國為(wei)9.9%、日本檢查進口家(jia)禽的污染率為(wei)10.3%,國內肉類(lei)沙門氏菌(jun)檢出(chu)率在1.1%-39.5%。
中國蛋(dan)及其制品沙(sha)門氏菌(jun)檢出率為3.9%-43.7%,由于吃蛋(dan)引起鼠傷寒病(bing)的病(bing)例報告逐(zhu)漸(jian)有增加的趨勢。
食(shi)品在加工、運輸、出(chu)售過程中往往被(bei)沙(sha)門氏菌污染。沙(sha)門氏菌在糞便、土(tu)壤、食(shi)品、水中可生存(cun)5個月至2年之久。
恢復(fu)期(qi)患者和無癥狀的(de)帶菌(jun)者也是常(chang)見的(de)傳染(ran)源。
廣(guang)泛分布于自然(ran)界,常常寄居在人和動物體內(nei),特別(bie)是家(jia)禽、家(jia)畜及(ji)寵(chong)物的(de)腸道中。主要污染的(de)食(shi)品有:肉和肉制(zhi)品、蛋和蛋制(zhi)品、奶和奶制(zhi)品等。由于沙門氏菌不分解蛋白質,食(shi)物被其污染后表面看起來似乎并沒有變化.
沙門氏菌感染(ran)癥為人畜共患感染(ran)性(xing)疾(ji)病,主要(yao)由食用遭受(shou)污染(ran)的(de)食物(wu)導致,是許多國家食物(wu)中毒的(de)重(zhong)要(yao)病源。
典型癥狀包括發熱、惡心、嘔吐、腹瀉(xie)及(ji)腹部絞(jiao)痛(tong)等癥狀,通常在發熱后72小時內會(hui)好轉。嬰兒、老年人、免疫(yi)功(gong)能(neng)(neng)低下(xia)的(de)患者則可能(neng)(neng)因(yin)沙門氏(shi)菌進入血液而出(chu)現嚴重且危及(ji)生命的(de)菌血癥,少數還會(hui)合并腦膜(mo)炎或骨髓炎。
一般沙門(men)氏菌造成的腸胃炎不需(xu)要給(gei)予(yu)抗生素治療;而以補充水分與電(dian)解質(zhi)為主(zhu);但對于新生兒、免疫功能低(di)下患者及(ji)特殊傷(shang)員(yuan);則需(xu)要視情況紿予(yu)抗生素治療。
1、餐前、便后、接(jie)觸食物前、接(jie)觸動物或生蛋后應仔細洗凈雙手(shou)。
2、處(chu)理生食和熟(shu)食的砧板要(yao)分開。
3、食物要熟透(tou)再(zai)吃(尤其是雞蛋與家(jia)禽類)。
4、非(fei)現做(zuo)現吃的食物應(ying)以保鮮膜包覆(fu)后放進冰箱保存,再次食用前應(ying)加(jia)熱(re)或煮熟。
5、撲滅并阻隔(ge)蒼蠅等病媒。被蒼蠅沾染(ran)、過期(qi)或腐(fu)敗的不潔食物均(jun)應丟棄,切勿食用。
6、水(shui)塔應經常清洗、消(xiao)毒(du)。
7、旅行(xing)或(huo)野營時的飲用(yong)水應煮沸并(bing)消毒。
8、如(ru)有(you)嘔吐、腹瀉或發熱等癥狀,應盡快就醫。
沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)(shi)(shi)美國(guo)食(shi)(shi)物(wu)(wu)中(zhong)毒(du)(du)(du)致死的(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)要原因(yin)。美國(guo)人對這種(zhong)病(bing)菌(jun)(jun)(jun)一(yi)(yi)點都(dou)不陌生(sheng),每(mei)(mei)年(nian)(nian)全(quan)國(guo)大約(yue)報告40000例沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)染(ran)病(bing)例。但實際的(de)(de)(de)(de)(de)感(gan)染(ran)人數可能要達20倍以上(shang),因(yin)為許多輕(qing)型(xing)病(bing)人可能未(wei)確診,據不完(wan)全(quan)統計,每(mei)(mei)年(nian)(nian)大約(yue)有(you)(you)1000人死于(yu)急性沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)染(ran)。但是(shi)(shi)(shi),以前各州爆發的(de)(de)(de)(de)(de)疫情幾(ji)乎都(dou)與人們(men)吃(chi)(chi)了(le)染(ran)上(shang)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)肉類(lei)、蛋(dan)類(lei)、乳(ru)類(lei)有(you)(you)關,但迄今為止(zhi),很少(shao)聽說吃(chi)(chi)蔬(shu)果大面積受沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)甚至在(zai)人群中(zhong)引發大疫情的(de)(de)(de)(de)(de)。對此,周(zhou)福生(sheng)教授解釋(shi)說,這可能是(shi)(shi)(shi)西(xi)紅柿(shi)在(zai)生(sheng)長的(de)(de)(de)(de)(de)過程(cheng)中(zhong),由于(yu)空氣(qi)中(zhong)紫外線不夠(gou)強(qiang)烈,植物(wu)(wu)在(zai)灌溉過程(cheng)或因(yin)土壤中(zhong)含有(you)(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),這樣(yang)才使西(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)表皮上(shang)沾(zhan)染(ran)了(le)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),加上(shang)不少(shao)人有(you)(you)生(sheng)食(shi)(shi)西(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)習慣,如果沒有(you)(you)清洗干(gan)凈(jing),就完(wan)全(quan)有(you)(you)可能發生(sheng)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)染(ran)。不光是(shi)(shi)(shi)食(shi)(shi)用西(xi)紅柿(shi),其他瓜果蔬(shu)菜也(ye)(ye)一(yi)(yi)樣(yang)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)主(zhu)要污(wu)染(ran)肉類(lei)食(shi)(shi)品,魚、禽、奶、蛋(dan)類(lei)食(shi)(shi)品也(ye)(ye)可受此菌(jun)(jun)(jun)污(wu)染(ran)。沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)(shi)物(wu)(wu)中(zhong)毒(du)(du)(du)全(quan)年(nian)(nian)都(dou)可發生(sheng),吃(chi)(chi)了(le)未(wei)煮(zhu)透的(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)、死牲(sheng)(sheng)畜肉或在(zai)屠(tu)宰后其他環(huan)節污(wu)染(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)牲(sheng)(sheng)畜肉是(shi)(shi)(shi)引起沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)(shi)物(wu)(wu)中(zhong)毒(du)(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)最主(zhu)要原因(yin)。有(you)(you)食(shi)(shi)品專家指出美國(guo)人吃(chi)(chi)雞(ji)(ji)蛋(dan)的(de)(de)(de)(de)(de)習慣與國(guo)人不同,他們(men)喜(xi)歡吃(chi)(chi)半熟(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)雞(ji)(ji)蛋(dan)甚至是(shi)(shi)(shi)生(sheng)雞(ji)(ji)蛋(dan),所以一(yi)(yi)旦(dan)雞(ji)(ji)蛋(dan)里含有(you)(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),感(gan)染(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)幾(ji)率就比較高。“在(zai)國(guo)內(nei),生(sheng)雞(ji)(ji)蛋(dan)里含有(you)(you)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)其實并不奇怪,只不過國(guo)人喜(xi)歡將雞(ji)(ji)蛋(dan)煮(zhu)熟(shu)吃(chi)(chi),這樣(yang)就大大減(jian)少(shao)了(le)感(gan)染(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)幾(ji)率。”
由沙(sha)門氏菌(jun)引(yin)起的(de)(de)食品(pin)(pin)中(zhong)毒(du)(du)癥狀主(zhu)(zhu)要有惡心、嘔吐(tu)、腹痛(tong)、頭(tou)痛(tong)、畏寒和腹瀉等,還伴(ban)有乏力、肌肉酸痛(tong)、視(shi)覺模糊、中(zhong)等程度發熱、躁(zao)動不(bu)安和嗜睡,延續時間2~3d,平(ping)均致死率為4.1%。其主(zhu)(zhu)要原因(yin)是由于攝入了含(han)有大量沙(sha)門氏菌(jun)屬的(de)(de)非寄主(zhu)(zhu)專一(yi)性菌(jun)種(zhong)或血清型的(de)(de)食品(pin)(pin)所引(yin)起的(de)(de)。在攝入含(han)毒(du)(du)食品(pin)(pin)之后.癥狀一(yi)般在12~14h內出現,有些潛(qian)伏期(qi)較(jiao)長。
防(fang)止沙(sha)門(men)氏菌(jun)污染食品;控制(zhi)食品中沙(sha)門(men)氏菌(jun)的(de)繁殖(zhi);加(jia)熱以(yi)徹底殺滅病原菌(jun)。
沙(sha)門氏(shi)菌不耐高溫,食物的中(zhong)心溫度達(da)70℃以上,持續5分鐘一般都(dou)可以殺死包括沙(sha)門氏(shi)菌等常見食源性(xing)致病菌。家(jia)庭中(zhong)一般的熱(re)處理烹調方式都(dou)可有(you)效殺滅該菌。
稱取25g(mL)樣品放(fang)入盛(sheng)有225 mL BPW的無菌(jun)均質(zhi)(zhi)杯中(zhong),以8000 r/min~10 000 r/min均質(zhi)(zhi)1min~2min,或置于盛(sheng)有225 mL BPW的無菌(jun)均質(zhi)(zhi)袋中(zhong),用拍擊式均質(zhi)(zhi)器拍打1min~2min。若樣品為液態,不需要均質(zhi)(zhi),振蕩混勻(yun)。如(ru)需測(ce)定pH值,用1mol/mL無菌(jun)NaOH或HCl調pH至6.8±0.2。無菌(jun)操作將樣品轉至500mL錐形瓶中(zhong),如(ru)使用均質(zhi)(zhi)袋,可(ke)直接進行培養,于36 ℃±1℃培養8h~18h。
如(ru)為冷凍產品,應(ying)在45℃以下不(bu)超過(guo)(guo)15min,或2℃~5℃不(bu)超過(guo)(guo)18h解凍。
輕輕搖動(dong)培養過的(de)樣品(pin)混合(he)物,移取(qu)1mL,轉種于10mL TTB內(nei),于42℃±1℃培養18h~24h。同時,另取(qu)1mL,轉種于10 mL SC內(nei),于36℃±1℃培養18h~24h。
分別用(yong)接種環取(qu)增菌液1環,劃(hua)線接種于(yu)一個(ge)(ge)BS瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)和一個(ge)(ge)XLD瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)(或HE瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)或沙門(men)氏菌屬(shu)顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)板(ban))。于(yu)36℃±1℃分別培養(yang)18h~24h(XLD瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)、HE瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)、沙門(men)氏菌屬(shu)顯色培養(yang)基(ji)平(ping)(ping)板(ban))或40h~48h (BS瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)),觀察各個(ge)(ge)平(ping)(ping)板(ban)上生長的菌落,各個(ge)(ge)平(ping)(ping)板(ban)上的菌落特征見表1。
表 1 沙門氏菌屬在不同(tong)選擇性瓊脂平板(ban)上的(de)菌落特(te)征
選(xuan)擇性瓊脂平板 沙門氏(shi)菌
BS 瓊(qiong)脂 菌落為(wei)黑色(se)有金屬(shu)光(guang)澤、棕褐色(se)或灰(hui)色(se),菌落周(zhou)(zhou)圍培(pei)(pei)養基可呈黑色(se)或棕色(se);有些菌株形(xing)成(cheng)灰(hui)綠色(se)的菌落,周(zhou)(zhou)圍培(pei)(pei)養基不變。
HE 瓊(qiong)脂 藍綠色(se)(se)或(huo)藍色(se)(se),多數菌落中(zhong)心(xin)黑(hei)色(se)(se)或(huo)幾乎全(quan)黑(hei)色(se)(se);有些菌株為黃色(se)(se),中(zhong)心(xin)黑(hei)色(se)(se)或(huo)幾乎全(quan)黑(hei)色(se)(se)。
XLD 瓊脂 菌落呈(cheng)粉紅色(se),帶(dai)或不帶(dai)黑色(se)中心(xin),有些(xie)菌株(zhu)可呈(cheng)現(xian)大的(de)帶(dai)光澤的(de)黑色(se)中心(xin),或呈(cheng)現(xian)全部黑色(se)的(de)菌落;有些(xie)菌株(zhu)為黃色(se)菌落,帶(dai)或不帶(dai)黑色(se)中心(xin)。
沙門氏菌屬顯(xian)色(se)培養(yang) 按照(zhao)顯(xian)色(se)培養(yang)基的說明進行判定。
自(zi)19世紀后(hou)期,沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)首次被鑒定為(wei)(wei)人(ren)(ren)類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一種病(bing)原(yuan)以來(lai),檢測(ce)方(fang)法學都是(shi)建立在(zai)(zai)采取感(gan)染病(bing)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便(bian)或血液(ye)作為(wei)(wei)臨床病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎上。此后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年間,用(yong)于(yu)(yu)從食(shi)(shi)(shi)品中(zhong)分(fen)(fen)離沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法實質上與(yu)那些用(yong)于(yu)(yu)臨床病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法是(shi)相同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但(dan)至少有(you)三(san)個因素限制了用(yong)于(yu)(yu)臨床病(bing)料的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法應用(yong)在(zai)(zai)食(shi)(shi)(shi)品分(fen)(fen)析上。第一,通(tong)常,沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含量(liang)水(shui)平在(zai)(zai)污染食(shi)(shi)(shi)品中(zhong)比有(you)感(gan)染病(bing)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)料中(zhong)要低很多;第二(er),食(shi)(shi)(shi)品本身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性(xing)(xing)質會(hui)干擾病(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢測(ce),例如,某(mou)些食(shi)(shi)(shi)品中(zhong)固有(you)菌(jun)群(qun)可(ke)能(neng)處在(zai)(zai)一個很高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)平,從而影響特(te)定細菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選擇性(xing)(xing)分(fen)(fen)離和鑒定;第三(san),與(yu)臨床病(bing)料不(bu)(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi),經過加工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)品,由于(yu)(yu)加熱、干燥、高(gao)含鹽量(liang)、酸和冷(leng)凍等因素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作用(yong),其(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)受到了尚不(bu)(bu)致(zhi)命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷或稱“致(zhi)傷”。這(zhe)(zhe)就(jiu)形成了一個具有(you)不(bu)(bu)同生長(chang)特(te)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細菌(jun)群(qun)。這(zhe)(zhe)種現(xian)象(xiang)對那些希望從食(shi)(shi)(shi)物樣品中(zhong)分(fen)(fen)離出沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)(shi)(shi)品分(fen)(fen)析家(jia)來(lai)說有(you)很大影響,因為(wei)(wei)在(zai)(zai)選擇培養基(ji)上直接(jie)培養“致(zhi)傷”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)通(tong)常是(shi)以細菌(jun)死亡和試驗失敗而告終。為(wei)(wei)克服(fu)這(zhe)(zhe)些困(kun)難,人(ren)(ren)們建立了一種簡單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生物增殖步驟,專(zhuan)門針(zhen)對以食(shi)(shi)(shi)品為(wei)(wei)傳播載體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)原(yuan)。雖然這(zhe)(zhe)些方(fang)法本身證明是(shi)可(ke)靠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),但(dan)卻很費力、耗時,需(xu)要4~7天才能(neng)完成。因此,在(zai)(zai)需(xu)要及時、快速評價食(shi)(shi)(shi)品中(zhong)微生物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全(quan)性(xing)(xing)時,通(tong)常不(bu)(bu)被采用(yong)。隨著DNA和抗體(ti)技術的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展(zhan),近10~15年間發展(zhan)了無數改進(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法,其(qi)中(zhong)許(xu)多可(ke)以在(zai)(zai)48h內檢出沙(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun),這(zhe)(zhe)些方(fang)法通(tong)稱為(wei)(wei)快速檢測(ce)。
利用(yong)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)反應(ying)的(de)(de)顯著特(te)異性(xing),來進(jin)行細(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)鑒別和血清學(xue)定型,已(yi)有半個(ge)多世紀的(de)(de)歷史。細(xi)菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)體(ti)(ti)或鞭毛抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)特(te)異性(xing)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)存在(zai),使(shi)得(de)人們可以(yi)(yi)建(jian)立(li)一(yi)些快速方(fang)法(fa)來檢(jian)測以(yi)(yi)食品為(wei)(wei)載體(ti)(ti)的(de)(de)病原(yuan)(yuan)(yuan)。已(yi)經建(jian)立(li)的(de)(de)沙門氏(shi)菌(jun)(jun)免(mian)(mian)疫(yi)學(xue)檢(jian)測方(fang)法(fa)有許多種,大(da)致可分(fen)為(wei)(wei)以(yi)(yi)酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ELISA),熒(ying)光(guang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)染色(se)(免(mian)(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)法(fa)),同位(wei)素(su)(su)標記抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(放射免(mian)(mian)疫(yi)試驗(yan))為(wei)(wei)基(ji)礎(chu)的(de)(de)方(fang)法(fa)及其(qi)它多種以(yi)(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)為(wei)(wei)基(ji)礎(chu),利用(yong)乳膠凝集、免(mian)(mian)疫(yi)傳(chuan)感器、免(mian)(mian)疫(yi)擴散及免(mian)(mian)疫(yi)色(se)譜技術的(de)(de)方(fang)法(fa)。但常規(gui)中最廣泛采用(yong)的(de)(de)是以(yi)(yi)雙位(wei)點ELISA技術即夾(jia)心ELISA為(wei)(wei)基(ji)礎(chu)的(de)(de)方(fang)法(fa)。此(ci)法(fa)改進(jin)后用(yong)有放射活(huo)性(xing)的(de)(de)同位(wei)素(su)(su)替代(dai)標記抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),概括地說,是指以(yi)(yi)固(gu)(gu)定在(zai)固(gu)(gu)體(ti)(ti)基(ji)質上的(de)(de)“捕捉(zhuo)”抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)來捕捉(zhuo)目標抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan),經洗滌(di)除去未結合的(de)(de)成(cheng)分(fen),加入第二種酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),此(ci)者結合在(zai)捕捉(zhuo)到的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)不同位(wei)點上,第二次洗滌(di)后加入酶(mei)作(zuo)用(yong)基(ji)質,并令其(qi)與顏色(se)成(cheng)分(fen)反應(ying),然后用(yong)分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa)即很容易檢(jian)測到目標抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)。采用(yong)微量滴定板作(zuo)為(wei)(wei)固(gu)(gu)態(tai)基(ji)質使(shi)反應(ying)形式標準化,并促成(cheng)其(qi)自動化。
黎(li)兆(zhao)滾(gun)(gun)等人首次在國內口岸系統(tong)應(ying)用(yong)(yong)微量板ELISA法(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對進(jin)(jin)(jin)出口動物產品(pin)(魚粉(fen)、肉(rou)骨粉(fen)等)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)。該法(fa)(fa)(fa)采(cai)用(yong)(yong)預(yu)先(xian)包被了(le)(le)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(A-E群)單(dan)克隆抗體(ti)的(de)(de)(de)微量板,加(jia)入經增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)處(chu)理的(de)(de)(de)樣品(pin),反應(ying)后(hou)再加(jia)入一定(ding)的(de)(de)(de)指示(shi)劑,作(zuo)用(yong)(yong)畢(bi)后(hou)用(yong)(yong)酶標儀測(ce)定(ding)OD值(zhi)來判定(ding)結果(guo)。食物樣品(pin)經適(shi)當的(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)處(chu)理,也可用(yong)(yong)此法(fa)(fa)(fa)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)。ELISA法(fa)(fa)(fa)檢(jian)出沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)極限范圍在105~106個細胞/ml,因(yin)此,要(yao)得出可靠的(de)(de)(de)結果(guo),食物樣品(pin)首先(xian)必需(xu)(xu)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)、選擇(ze)性(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun),通常還要(yao)在含(han)有D-甘露(lu)糖的(de)(de)(de)肉(rou)湯(tang)(M肉(rou)湯(tang))中(zhong)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)后(hou)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun),以促進(jin)(jin)(jin)鞭(bian)毛發(fa)育(yu)。總(zong)的(de)(de)(de)來說,標準(zhun)的(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)樣品(pin)的(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei),約需(xu)(xu)要(yao)經過40~48h的(de)(de)(de)孵(fu)育(yu)才能(neng)完成。黎(li)兆(zhao)滾(gun)(gun)等人的(de)(de)(de)微量板ELISA法(fa)(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣品(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)過程分三步,共耗時(shi)24h:①選用(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)湯(tang)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(6h),使(shi)“致傷”、冷凍(dong)的(de)(de)(de)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)復蘇。②使(shi)用(yong)(yong)選擇(ze)性(xing)培(pei)養(yang)基RV進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(14h),使(shi)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)大(da)量繁殖,同時(shi)抑制(zhi)(zhi)其它(ta)雜菌(jun)(jun)(jun)生長。③使(shi)用(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)湯(tang)(蛋白胨(dong)水)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)后(hou)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(4h),使(shi)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)數量大(da)大(da)增(zeng)加(jia)。比上述標準(zhun)的(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)樣品(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)過程縮短(duan)(duan)了(le)(le)一半(ban)的(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)。ELISA方法(fa)(fa)(fa)本身(shen),則僅需(xu)(xu)要(yao)大(da)約2h而已(其中(zhong)30min是操作(zuo)時(shi)間(jian)(jian),90min是孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)(jian))。相比之(zhi)下,黎(li)兆(zhao)滾(gun)(gun)等人的(de)(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)可在27h內完成,比上述方法(fa)(fa)(fa)縮短(duan)(duan)了(le)(le)一半(ban)的(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian),頗值(zhi)得推廣應(ying)用(yong)(yong)。最(zui)新式的(de)(de)(de)沙門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)免(mian)疫學檢(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa),利(li)用(yong)(yong)經特異性(xing)抗體(ti)敏化的(de)(de)(de)免(mian)疫色譜(pu)卡(ka)片(pian)為基礎。幾滴樣品(pin)加(jia)到(dao)卡(ka)片(pian)上,結果(guo)可以直接用(yong)(yong)肉(rou)眼讀出。免(mian)疫色譜(pu)卡(ka)片(pian)極易操作(zuo),且由于無需(xu)(xu)要(yao)特殊設備(bei)(bei),很適(shi)合(he)小型(xing)實驗室使(shi)用(yong)(yong)。盡(jin)管卡(ka)片(pian)檢(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)一樣需(xu)(xu)要(yao)對樣品(pin)進(jin)(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)處(chu)理,但它(ta)(卡(ka)片(pian)法(fa)(fa)(fa))本身(shen)通常需(xu)(xu)時(shi)不超(chao)過10min,如果(guo)采(cai)用(yong)(yong)黎(li)兆(zhao)滾(gun)(gun)等人的(de)(de)(de)樣品(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)(bei)法(fa)(fa)(fa),則可使(shi)操作(zuo)時(shi)間(jian)(jian)更為縮短(duan)(duan)。
細(xi)胞(bao)(bao)核(he)酸(suan)(suan)DNA和(he)(he)RNA是(shi)唯一(yi)(yi)一(yi)(yi)類(lei)可(ke)(ke)(ke)以攜(xie)帶信息的(de)(de)(de)(de)(de)(de)大分(fen)(fen)子。由于所有(you)(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)都含(han)有(you)(you)這(zhe)種分(fen)(fen)子,可(ke)(ke)(ke)以利用(yong)(yong)(yong)它作為(wei)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)靶(ba)。標(biao)靶(ba)通常是(shi)一(yi)(yi)個(ge)特異(yi)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)核(he)酸(suan)(suan)序列,它可(ke)(ke)(ke)通過以補體(ti)(ti)(ti)核(he)酸(suan)(suan)分(fen)(fen)子作為(wei)探(tan)針(zhen)來檢(jian)(jian)出(chu)。與(yu)免疫學方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)相似(si),探(tan)針(zhen)也需(xu)(xu)要(yao)加附適當(dang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)記,如放(fang)射(she)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)(su)、酶或(huo)發光的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)識物。Fitts等人在(zai)食品沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)中(zhong)(zhong)引入了第一(yi)(yi)代(dai)DNA—RNA雜(za)交(jiao)技術,此(ci)(ci)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)應用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)探(tan)針(zhen)含(han)有(you)(you)用(yong)(yong)(yong)放(fang)射(she)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)(su)標(biao)記的(de)(de)(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)DNA片段,其(qi)(qi)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)高,經大約48h的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)步驟后,檢(jian)(jian)測(ce)(ce)極限(xian)可(ke)(ke)(ke)達108個(ge)細(xi)菌(jun)(jun)(jun)/ml,但(dan)由于要(yao)使(shi)用(yong)(yong)(yong)放(fang)射(she)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)(su),只能在(zai)專(zhuan)門(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)實(shi)驗室應用(yong)(yong)(yong),此(ci)(ci)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優點(dian)(dian)都被抵(di)消了。為(wei)此(ci)(ci),以核(he)酸(suan)(suan)雜(za)交(jiao)為(wei)基(ji)(ji)礎的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第二(er)代(dai)技術—比色(se)(se)計已(yi)發展(zhan)起(qi)來。這(zhe)種方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)依賴于沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)核(he)糖(tang)體(ti)(ti)(ti)RNA(rRNA)—核(he)糖(tang)體(ti)(ti)(ti)發育過程(cheng)中(zhong)(zhong)儲存(cun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)核(he)酸(suan)(suan)成(cheng)分(fen)(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。核(he)糖(tang)體(ti)(ti)(ti)是(shi)細(xi)胞(bao)(bao)蛋(dan)白質合(he)(he)成(cheng)器的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)部分(fen)(fen),每個(ge)細(xi)菌(jun)(jun)(jun)細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)(zhong)存(cun)在(zai)5000~20000個(ge)復制(zhi)體(ti)(ti)(ti),而相比之(zhi)下染(ran)色(se)(se)體(ti)(ti)(ti)DNA復制(zhi)體(ti)(ti)(ti)僅2~10個(ge)。這(zhe)種天(tian)然(ran)富(fu)含(han)rRNA標(biao)靶(ba)序列的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況使(shi)得(de)用(yong)(yong)(yong)無(wu)輻射(she)計檢(jian)(jian)測(ce)(ce)成(cheng)為(wei)可(ke)(ke)(ke)能,同(tong)時又保持了與(yu)放(fang)射(she)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)(su)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)相當(dang)或(huo)更高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)。其(qi)(qi)另一(yi)(yi)優點(dian)(dian)是(shi)由于rRNA為(wei)單鏈(lian)(而DNA為(wei)雙鏈(lian)),雜(za)交(jiao)前無(wu)需(xu)(xu)經過變(bian)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)步驟。要(yao)得(de)到陽性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)結果,此(ci)(ci)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)需(xu)(xu)要(yao)105個(ge)靶(ba)細(xi)胞(bao)(bao)/ml,因此(ci)(ci)對沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)來說,需(xu)(xu)要(yao)進(jin)行預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)和(he)(he)選擇性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun),總共約50h。rRNA探(tan)針(zhen)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)比沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(酶聯免疫檢(jian)(jian)測(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa))更耗(hao)時,但(dan)二(er)者成(cheng)本相近。食品細(xi)菌(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最新(xin)進(jin)展(zhan)是(shi)在(zai)化(hua)學擴(kuo)增(zeng)體(ti)(ti)(ti)系(xi)方(fang)(fang)(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展(zhan),即聚(ju)合(he)(he)酶鏈(lian)反應(PCR),用(yong)(yong)(yong)該(gai)體(ti)(ti)(ti)系(xi)可(ke)(ke)(ke)對制(zhi)備好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品進(jin)行細(xi)菌(jun)(jun)(jun)DNA擴(kuo)增(zeng),以便更易于用(yong)(yong)(yong)諸如凝(ning)膠電泳法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)或(huo)比色(se)(se)型ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。用(yong)(yong)(yong)于檢(jian)(jian)測(ce)(ce)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)和(he)(he)其(qi)(qi)它以食物為(wei)載體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)業已(yi)建立(li),其(qi)(qi)中(zhong)(zhong)一(yi)(yi)些方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)顯示了極好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)。但(dan)該(gai)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)較(jiao)難自動(dong)化(hua),且(qie)必需(xu)(xu)經選擇性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)以稀釋可(ke)(ke)(ke)能干擾檢(jian)(jian)測(ce)(ce)反應的(de)(de)(de)(de)(de)(de)某些成(cheng)分(fen)(fen)。一(yi)(yi)個(ge)完(wan)整的(de)(de)(de)(de)(de)(de)以PCR為(wei)基(ji)(ji)礎的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa),需(xu)(xu)要(yao)2天(tian)才(cai)能完(wan)成(cheng),很大程(cheng)度上抵(di)銷了其(qi)(qi)高敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優點(dian)(dian),但(dan)這(zhe)種方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)對那些含(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)較(jiao)少或(huo)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)“致(zhi)傷”嚴重難以復蘇而仍保有(you)(you)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品尤其(qi)(qi)有(you)(you)效。