沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)是(shi)一種(zhong)常見的(de)(de)(de)(de)食(shi)源(yuan)性(xing)致病(bing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)鑒定(ding)的(de)(de)(de)(de)傳統(tong)方法主要是(shi)根(gen)據(ju)形態學特(te)(te)(te)征(zheng)、培(pei)養特(te)(te)(te)征(zheng)、生(sheng)(sheng)理生(sheng)(sheng)化特(te)(te)(te)征(zheng)、抗(kang)原特(te)(te)(te)征(zheng)、噬菌(jun)(jun)(jun)(jun)體(ti)特(te)(te)(te)征(zheng)等(deng)。1885年沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)等(deng)在霍亂流行時(shi)分(fen)離(li)到豬霍亂沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun),故(gu)定(ding)名為沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)屬(shu)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)屬(shu)有的(de)(de)(de)(de)專(zhuan)對人類(lei)(lei)致病(bing),有的(de)(de)(de)(de)只對動(dong)物(wu)致病(bing),也(ye)有對人和動(dong)物(wu)都致病(bing)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)病(bing)是(shi)指(zhi)由各種(zhong)類(lei)(lei)型(xing)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)所引(yin)起的(de)(de)(de)(de)對人類(lei)(lei)、家畜以(yi)及(ji)野(ye)生(sheng)(sheng)禽獸不(bu)同形式的(de)(de)(de)(de)總(zong)稱。感染沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)人或帶菌(jun)(jun)(jun)(jun)者的(de)(de)(de)(de)糞便(bian)污染食(shi)品,可使人發生(sheng)(sheng)食(shi)物(wu)中毒(du)。據(ju)統(tong)計(ji)在世界各國(guo)的(de)(de)(de)(de)種(zhong)類(lei)(lei)細菌(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)食(shi)物(wu)中毒(du)中,沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)引(yin)起的(de)(de)(de)(de)食(shi)物(wu)中毒(du)常列榜首。我國(guo)內陸地(di)區(qu)也(ye)以(yi)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)為首位。
沙門氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)病(bing)的(de)(de)(de)病(bing)原體(ti)。屬腸桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)科,革蘭氏陰(yin)性(xing)腸道桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)。已(yi)發現的(de)(de)(de)近一千(qian)種(或菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)株)。按其(qi)抗原成分,可分為甲(jia)(jia)、乙、丙(bing)、丁、戊等(deng)(deng)基本菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)組。其(qi)中(zhong)與人(ren)體(ti)疾(ji)(ji)病(bing)有(you)(you)關的(de)(de)(de)主要有(you)(you)甲(jia)(jia)組的(de)(de)(de)副傷(shang)寒(han)甲(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),乙組的(de)(de)(de)副傷(shang)寒(han)乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)鼠傷(shang)寒(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丙(bing)組的(de)(de)(de)副傷(shang)寒(han)丙(bing)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)豬霍(huo)亂(luan)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丁組的(de)(de)(de)傷(shang)寒(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)腸炎桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)等(deng)(deng)。除(chu)傷(shang)寒(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)、副傷(shang)寒(han)甲(jia)(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)副傷(shang)寒(han)乙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)引起人(ren)類的(de)(de)(de)疾(ji)(ji)病(bing)外,大多數僅能(neng)引起家畜、鼠類和(he)禽類等(deng)(deng)動物(wu)的(de)(de)(de)疾(ji)(ji)病(bing),但有(you)(you)時也可污染人(ren)類的(de)(de)(de)食物(wu)而引起食物(wu)中(zhong)毒。
沙(sha)門(men)氏(shi)菌在(zai)水中不易繁(fan)殖,但可生存2-3周(zhou),冰箱(xiang)中可生存3-4個(ge)月(yue),在(zai)自然(ran)環(huan)境的糞便中可存活1-2個(ge)月(yue)。沙(sha)門(men)氏(shi)菌最適繁(fan)殖溫度為37℃,在(zai)20℃以上即能大(da)量繁(fan)殖,因此,低溫儲存食品是(shi)一(yi)項重要預防(fang)措(cuo)施(shi)。
菌(jun)(jun)體(ti)大(da)小(xiao)(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽(ya)胞,一(yi)般無莢膜,除雞(ji)白痢沙門氏菌(jun)(jun)和雞(ji)傷寒(han)沙門氏菌(jun)(jun)外,大(da)多有周身鞭毛(mao)。營(ying)養要求(qiu)不(bu)(bu)高,分(fen)(fen)離培養常采用(yong)腸道選擇鑒(jian)別(bie)培養基。生(sheng)化(hua)(hua)反應對本屬菌(jun)(jun)的(de)(de)鑒(jian)別(bie)具有重要參考意(yi)義(見表)。不(bu)(bu)液化(hua)(hua)明(ming)膠,不(bu)(bu)分(fen)(fen)解尿素,不(bu)(bu)產生(sheng)吲哚,不(bu)(bu)發酵(jiao)乳糖和蔗糖,能(neng)發酵(jiao)葡(pu)萄糖、甘露醇、麥(mai)芽(ya)糖和衛芽(ya)糖,大(da)多產酸(suan)產氣,少(shao)數(shu)只產酸(suan)不(bu)(bu)產氣。VP試驗陰性,有賴氨酸(suan)脫(tuo)羧(suo)酶。DNA的(de)(de)G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不(bu)(bu)強(qiang),在(zai)60℃15分(fen)(fen)鐘可被殺(sha)死。在(zai)水中存活2~3周。在(zai)5%的(de)(de)石(shi)炭酸(suan)中,5分(fen)(fen)鐘死亡。
本屬菌(jun)按(an)生化反(fan)應分(fen)為4個亞屬。亞屬Ⅰ是生化反(fan)應典型的(de)和(he)最(zui)常見的(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun);亞屬Ⅱ和(he)Ⅳ是生化反(fan)應不典型的(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun);亞屬Ⅲ是亞利(li)桑(sang)那沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)。
沙門(men)氏菌具有復雜的(de)抗(kang)(kang)原結構,一般可分為(wei)菌體(O)抗(kang)(kang)原、鞭毛(mao)(H)抗(kang)(kang)原和表面(Vi)抗(kang)(kang)原3種。
生化反應很活(huo)潑,能(neng)分解多(duo)種糖類(lei)和(he)醇。
1)需(xu)氧及兼性厭氧菌。
2)在普通瓊脂培(pei)養基上生(sheng)長良好,培(pei)養24h后,形(xing)成(cheng)中(zhong)等大小、圓形(xing)、表(biao)面(mian)光滑(hua)、無色半(ban)透明、邊緣(yuan)整齊的菌落,其菌落特征(zheng)亦與大腸桿菌相(xiang)似(無糞臭味)。
3)鑒別培養基(麥康凱(kai)、SS、伊紅美藍):一般(ban)無色菌落。
4)三糖鐵瓊脂斜(xie)面:斜(xie)面為紅色,底部(bu)變黑并產氣。
1)發(fa)酵葡萄糖,麥芽糖,甘露醇(chun)和山梨醇(chun)產氣;
2)不發酵乳糖、蔗糖和側金盞花醇;
3)不(bu)產(chan)吲(yin)哚、V-P反應陰性;
4)不水解尿素和對苯丙氨(an)酸不脫氨(an)。
傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、雞傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)及一部分雞白痢沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)發(fa)酵(jiao)糖不(bu)產氣,大(da)多數雞白痢沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)不(bu)發(fa)酵(jiao)麥芽糖;除雞白痢沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、豬傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、甲(jia)型副傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)、傷(shang)寒沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)和仙臺沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)(shi)菌(jun)等外,均(jun)能(neng)利(li)用(yong)枸櫞酸鹽。
沙門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)具有復雜(za)的抗原(yuan)(yuan)結(jie)構,一般沙門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)具有菌(jun)(jun)體(O)抗原(yuan)(yuan)、鞭毛(H)抗原(yuan)(yuan)和表面抗原(yuan)(yuan)(莢膜或包膜抗原(yuan)(yuan))三種抗原(yuan)(yuan)。
肉及其制品(pin)的沙門氏(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)出率美(mei)國為20%-25%、英國為9.9%、日(ri)本檢(jian)查(cha)進口家禽的污染(ran)率為10.3%,國內肉類沙門氏(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)出率在1.1%-39.5%。
中國蛋(dan)及(ji)其(qi)制品沙門氏(shi)菌檢出率為3.9%-43.7%,由于吃蛋(dan)引起鼠傷寒病的病例報告(gao)逐(zhu)漸有增(zeng)加的趨勢。
食品(pin)在(zai)加工(gong)、運輸、出售(shou)過程中往(wang)往(wang)被沙門氏菌污染。沙門氏菌在(zai)糞(fen)便、土壤(rang)、食品(pin)、水中可(ke)生存5個月至(zhi)2年之(zhi)久。
恢復期(qi)患者和(he)無(wu)癥狀的(de)帶(dai)菌者也是常(chang)見的(de)傳染(ran)源。
廣泛(fan)分布于自然(ran)界,常常寄居在人和(he)動物體內,特(te)別是家禽、家畜及寵物的(de)腸道中(zhong)。主要污染(ran)(ran)的(de)食(shi)品(pin)有(you):肉和(he)肉制(zhi)品(pin)、蛋和(he)蛋制(zhi)品(pin)、奶和(he)奶制(zhi)品(pin)等。由于沙門氏菌(jun)不分解蛋白質(zhi),食(shi)物被其污染(ran)(ran)后表(biao)面看(kan)起來(lai)似乎并(bing)沒有(you)變化.
沙門氏菌感(gan)染(ran)癥為人畜共(gong)患感(gan)染(ran)性疾病,主(zhu)要(yao)由食用(yong)遭受(shou)污染(ran)的食物導致,是許多國家食物中毒的重要(yao)病源。
典型癥(zheng)狀包括發熱、惡心、嘔(ou)吐、腹瀉及(ji)腹部絞痛等(deng)癥(zheng)狀,通常在(zai)發熱后72小時內(nei)會(hui)好轉。嬰兒、老年(nian)人、免疫(yi)功能(neng)低下的(de)患者則(ze)可能(neng)因沙門氏菌進(jin)入血液而出現嚴重且(qie)危及(ji)生命的(de)菌血癥(zheng),少(shao)數(shu)還(huan)會(hui)合(he)并腦(nao)膜炎或骨髓(sui)炎。
一般沙門氏(shi)菌造成的(de)腸胃炎不(bu)需要(yao)給予抗生素治療;而以(yi)補(bu)充水分與電解質為(wei)主;但對于新生兒、免疫功能低(di)下患者及特殊傷員;則需要(yao)視(shi)情況紿予抗生素治療。
1、餐前、便后(hou)、接觸食物前、接觸動物或生蛋后(hou)應仔(zi)細(xi)洗凈雙手。
2、處理生食和熟食的砧板要(yao)分開。
3、食物(wu)要熟透(tou)再吃(chi)(尤其(qi)是雞(ji)蛋與家禽類(lei))。
4、非現做現吃的食物應(ying)以(yi)保鮮(xian)膜包(bao)覆后放進冰箱保存(cun),再(zai)次食用(yong)前應(ying)加熱(re)或煮(zhu)熟。
5、撲滅(mie)并阻隔蒼蠅等病(bing)媒。被(bei)蒼蠅沾染(ran)、過期或腐敗的不潔食(shi)物均(jun)應丟(diu)棄,切勿食(shi)用。
6、水塔應經(jing)常(chang)清洗(xi)、消毒。
7、旅(lv)行(xing)或(huo)野營時的飲用水應煮沸并消毒(du)。
8、如有嘔吐、腹瀉(xie)或發熱等癥(zheng)狀(zhuang),應盡快就醫。
沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)是(shi)(shi)美(mei)國(guo)食(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)致死(si)(si)的(de)(de)(de)主要(yao)原因(yin)。美(mei)國(guo)人(ren)(ren)對(dui)這(zhe)種(zhong)病(bing)菌(jun)一點都(dou)(dou)不陌生(sheng),每(mei)年(nian)(nian)全(quan)國(guo)大(da)約報告40000例沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)感(gan)染(ran)(ran)病(bing)例。但實際的(de)(de)(de)感(gan)染(ran)(ran)人(ren)(ren)數可(ke)能(neng)要(yao)達20倍(bei)以上(shang),因(yin)為許(xu)多輕型病(bing)人(ren)(ren)可(ke)能(neng)未確診,據(ju)不完全(quan)統(tong)計(ji),每(mei)年(nian)(nian)大(da)約有(you)1000人(ren)(ren)死(si)(si)于急性沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)感(gan)染(ran)(ran)。但是(shi)(shi),以前各州爆發(fa)(fa)的(de)(de)(de)疫(yi)情(qing)幾乎都(dou)(dou)與人(ren)(ren)們吃(chi)(chi)了(le)染(ran)(ran)上(shang)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)肉類、蛋(dan)(dan)類、乳(ru)類有(you)關,但迄今(jin)為止(zhi),很少(shao)聽(ting)說吃(chi)(chi)蔬果(guo)大(da)面積受沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)污(wu)染(ran)(ran)甚至在(zai)人(ren)(ren)群中(zhong)引發(fa)(fa)大(da)疫(yi)情(qing)的(de)(de)(de)。對(dui)此(ci),周(zhou)福生(sheng)教授解釋(shi)說,這(zhe)可(ke)能(neng)是(shi)(shi)西(xi)紅(hong)(hong)柿在(zai)生(sheng)長的(de)(de)(de)過(guo)程(cheng)中(zhong),由于空氣中(zhong)紫外線不夠強烈,植物(wu)在(zai)灌(guan)溉過(guo)程(cheng)或(huo)因(yin)土壤(rang)中(zhong)含(han)(han)(han)有(you)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun),這(zhe)樣才(cai)使西(xi)紅(hong)(hong)柿的(de)(de)(de)表皮上(shang)沾染(ran)(ran)了(le)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun),加上(shang)不少(shao)人(ren)(ren)有(you)生(sheng)食(shi)(shi)西(xi)紅(hong)(hong)柿的(de)(de)(de)習慣(guan),如(ru)果(guo)沒(mei)有(you)清洗干凈,就完全(quan)有(you)可(ke)能(neng)發(fa)(fa)生(sheng)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)感(gan)染(ran)(ran)。不光是(shi)(shi)食(shi)(shi)用西(xi)紅(hong)(hong)柿,其(qi)(qi)他(ta)瓜果(guo)蔬菜也一樣。沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)主要(yao)污(wu)染(ran)(ran)肉類食(shi)(shi)品(pin),魚、禽、奶、蛋(dan)(dan)類食(shi)(shi)品(pin)也可(ke)受此(ci)菌(jun)污(wu)染(ran)(ran)。沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)食(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)全(quan)年(nian)(nian)都(dou)(dou)可(ke)發(fa)(fa)生(sheng),吃(chi)(chi)了(le)未煮透的(de)(de)(de)病(bing)、死(si)(si)牲(sheng)畜肉或(huo)在(zai)屠宰后其(qi)(qi)他(ta)環節污(wu)染(ran)(ran)的(de)(de)(de)牲(sheng)畜肉是(shi)(shi)引起沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)食(shi)(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)的(de)(de)(de)最主要(yao)原因(yin)。有(you)食(shi)(shi)品(pin)專家指(zhi)出美(mei)國(guo)人(ren)(ren)吃(chi)(chi)雞蛋(dan)(dan)的(de)(de)(de)習慣(guan)與國(guo)人(ren)(ren)不同,他(ta)們喜歡吃(chi)(chi)半熟的(de)(de)(de)雞蛋(dan)(dan)甚至是(shi)(shi)生(sheng)雞蛋(dan)(dan),所(suo)以一旦雞蛋(dan)(dan)里含(han)(han)(han)有(you)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun),感(gan)染(ran)(ran)的(de)(de)(de)幾率就比較高。“在(zai)國(guo)內,生(sheng)雞蛋(dan)(dan)里含(han)(han)(han)有(you)沙(sha)(sha)(sha)門氏(shi)(shi)菌(jun)其(qi)(qi)實并不奇(qi)怪,只不過(guo)國(guo)人(ren)(ren)喜歡將雞蛋(dan)(dan)煮熟吃(chi)(chi),這(zhe)樣就大(da)大(da)減少(shao)了(le)感(gan)染(ran)(ran)的(de)(de)(de)幾率。”
由沙門氏菌引起的(de)食(shi)品(pin)中(zhong)毒(du)(du)癥狀主(zhu)要有(you)惡心、嘔吐、腹(fu)痛、頭痛、畏寒和(he)腹(fu)瀉(xie)等,還伴有(you)乏力、肌(ji)肉酸痛、視覺模(mo)糊、中(zhong)等程度發熱(re)、躁動不安(an)和(he)嗜睡,延(yan)續時間(jian)2~3d,平均致(zhi)死率為4.1%。其(qi)主(zhu)要原因是由于(yu)攝(she)入(ru)(ru)了含有(you)大量沙門氏菌屬(shu)的(de)非寄主(zhu)專一(yi)性(xing)菌種或血清型的(de)食(shi)品(pin)所引起的(de)。在攝(she)入(ru)(ru)含毒(du)(du)食(shi)品(pin)之后.癥狀一(yi)般在12~14h內出現(xian),有(you)些潛伏期較長。
防止沙(sha)門氏菌污(wu)染食(shi)品(pin);控制食(shi)品(pin)中沙(sha)門氏菌的繁殖;加熱以(yi)徹底殺(sha)滅病(bing)原菌。
沙(sha)門氏(shi)菌(jun)不耐高溫,食物(wu)的中心溫度達70℃以(yi)上(shang),持(chi)續5分(fen)鐘一般都(dou)可(ke)以(yi)殺死包(bao)括沙(sha)門氏(shi)菌(jun)等常見(jian)食源性致(zhi)病菌(jun)。家(jia)庭中一般的熱處理烹調(diao)方式(shi)都(dou)可(ke)有效殺滅該菌(jun)。
稱取25g(mL)樣品放入盛(sheng)(sheng)有225 mL BPW的無菌(jun)均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)杯中(zhong),以8000 r/min~10 000 r/min均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)1min~2min,或(huo)置(zhi)于盛(sheng)(sheng)有225 mL BPW的無菌(jun)均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)袋中(zhong),用(yong)(yong)拍擊式均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)器拍打1min~2min。若樣品為液態(tai),不需要均(jun)(jun)質(zhi)(zhi),振蕩混勻(yun)。如需測定pH值(zhi),用(yong)(yong)1mol/mL無菌(jun)NaOH或(huo)HCl調pH至6.8±0.2。無菌(jun)操作將樣品轉至500mL錐(zhui)形(xing)瓶中(zhong),如使用(yong)(yong)均(jun)(jun)質(zhi)(zhi)袋,可直接(jie)進(jin)行培養,于36 ℃±1℃培養8h~18h。
如(ru)為冷凍產品,應在45℃以下不超過15min,或2℃~5℃不超過18h解凍。
輕輕搖動(dong)培(pei)養過的樣品混合(he)物,移取(qu)1mL,轉(zhuan)種于(yu)10mL TTB內(nei),于(yu)42℃±1℃培(pei)養18h~24h。同(tong)時(shi),另取(qu)1mL,轉(zhuan)種于(yu)10 mL SC內(nei),于(yu)36℃±1℃培(pei)養18h~24h。
分別(bie)用接種環取增菌(jun)液1環,劃(hua)線接種于(yu)(yu)一(yi)個BS瓊脂(zhi)(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)和(he)一(yi)個XLD瓊脂(zhi)(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)(或HE瓊脂(zhi)(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)或沙門氏菌(jun)屬(shu)顯(xian)色培養基平(ping)(ping)板(ban))。于(yu)(yu)36℃±1℃分別(bie)培養18h~24h(XLD瓊脂(zhi)(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)、HE瓊脂(zhi)(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)、沙門氏菌(jun)屬(shu)顯(xian)色培養基平(ping)(ping)板(ban))或40h~48h (BS瓊脂(zhi)(zhi)(zhi)平(ping)(ping)板(ban)),觀察各(ge)個平(ping)(ping)板(ban)上(shang)生(sheng)長(chang)的菌(jun)落,各(ge)個平(ping)(ping)板(ban)上(shang)的菌(jun)落特征見表(biao)1。
表 1 沙門(men)氏(shi)菌屬在不同選擇性瓊脂平板上(shang)的菌落特征
選擇性瓊脂平板 沙門氏菌
BS 瓊脂 菌落為黑色(se)有金(jin)屬光澤(ze)、棕(zong)褐(he)色(se)或(huo)灰色(se),菌落周圍培(pei)養基(ji)可呈(cheng)黑色(se)或(huo)棕(zong)色(se);有些菌株(zhu)形成灰綠色(se)的菌落,周圍培(pei)養基(ji)不變。
HE 瓊(qiong)脂 藍綠(lv)色(se)或藍色(se),多數菌落中(zhong)心黑(hei)色(se)或幾乎(hu)全黑(hei)色(se);有(you)些菌株為黃色(se),中(zhong)心黑(hei)色(se)或幾乎(hu)全黑(hei)色(se)。
XLD 瓊脂 菌(jun)落(luo)(luo)呈(cheng)粉紅色(se)(se),帶(dai)或(huo)(huo)不帶(dai)黑(hei)(hei)色(se)(se)中(zhong)心(xin),有(you)些菌(jun)株可呈(cheng)現大的帶(dai)光澤的黑(hei)(hei)色(se)(se)中(zhong)心(xin),或(huo)(huo)呈(cheng)現全部(bu)黑(hei)(hei)色(se)(se)的菌(jun)落(luo)(luo);有(you)些菌(jun)株為黃(huang)色(se)(se)菌(jun)落(luo)(luo),帶(dai)或(huo)(huo)不帶(dai)黑(hei)(hei)色(se)(se)中(zhong)心(xin)。
沙(sha)門(men)氏菌屬顯(xian)色培養 按照顯(xian)色培養基的說明進行(xing)判定。
自19世紀后期,沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)首次被鑒定(ding)為(wei)人類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一種(zhong)病(bing)(bing)原(yuan)以來(lai),檢(jian)(jian)(jian)測方法學都是(shi)(shi)建(jian)立(li)在(zai)(zai)采取感染(ran)病(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞便或(huo)(huo)血液作為(wei)臨(lin)(lin)床病(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎上。此(ci)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年間,用(yong)于(yu)(yu)(yu)從食品中(zhong)分(fen)離沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方法實質上與那些(xie)(xie)用(yong)于(yu)(yu)(yu)臨(lin)(lin)床病(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方法是(shi)(shi)相同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但至少有三個因素限制了(le)用(yong)于(yu)(yu)(yu)臨(lin)(lin)床病(bing)(bing)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方法應用(yong)在(zai)(zai)食品分(fen)析(xi)上。第一,通常,沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含(han)量水平(ping)在(zai)(zai)污染(ran)食品中(zhong)比有感染(ran)病(bing)(bing)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)料(liao)中(zhong)要(yao)低很(hen)多;第二(er),食品本身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性質會干擾病(bing)(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測,例(li)如,某些(xie)(xie)食品中(zhong)固有菌(jun)群(qun)可能處在(zai)(zai)一個很(hen)高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水平(ping),從而(er)(er)影響特定(ding)細菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選(xuan)擇(ze)(ze)性分(fen)離和(he)鑒定(ding);第三,與臨(lin)(lin)床病(bing)(bing)料(liao)不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)(shi),經過加(jia)工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食品,由(you)于(yu)(yu)(yu)加(jia)熱、干燥、高(gao)含(han)鹽量、酸和(he)冷(leng)凍等因素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作用(yong),其(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)受到了(le)尚不(bu)致命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷或(huo)(huo)稱“致傷”。這(zhe)就形成了(le)一個具有不(bu)同生(sheng)長特性的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細菌(jun)群(qun)。這(zhe)種(zhong)現(xian)象對(dui)那些(xie)(xie)希(xi)望(wang)從食物樣品中(zhong)分(fen)離出沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食品分(fen)析(xi)家(jia)來(lai)說(shuo)有很(hen)大(da)影響,因為(wei)在(zai)(zai)選(xuan)擇(ze)(ze)培(pei)養基(ji)上直接(jie)培(pei)養“致傷”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun)通常是(shi)(shi)以細菌(jun)死亡和(he)試(shi)驗失敗而(er)(er)告(gao)終。為(wei)克服這(zhe)些(xie)(xie)困難,人們(men)建(jian)立(li)了(le)一種(zhong)簡單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)物增殖步驟,專(zhuan)門(men)針(zhen)對(dui)以食品為(wei)傳播載體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)原(yuan)。雖然(ran)這(zhe)些(xie)(xie)方法本身證明是(shi)(shi)可靠(kao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),但卻很(hen)費力、耗時(shi),需要(yao)4~7天(tian)才能完成。因此(ci),在(zai)(zai)需要(yao)及時(shi)、快速評價食品中(zhong)微(wei)生(sheng)物的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全性時(shi),通常不(bu)被采用(yong)。隨(sui)著DNA和(he)抗體技術的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展,近10~15年間發展了(le)無數改進(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方法,其(qi)中(zhong)許多可以在(zai)(zai)48h內檢(jian)(jian)(jian)出沙(sha)(sha)門(men)氏菌(jun),這(zhe)些(xie)(xie)方法通稱為(wei)快速檢(jian)(jian)(jian)測。
利用抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)-抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)反應(ying)(ying)的(de)(de)顯著特(te)異性(xing),來進(jin)行細菌(jun)的(de)(de)鑒別和血清學定(ding)型(xing),已(yi)(yi)有半個多世紀的(de)(de)歷史。細菌(jun)菌(jun)體(ti)(ti)(ti)(ti)或鞭(bian)毛抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)特(te)異性(xing)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)存在,使(shi)得人們可以建(jian)立(li)一(yi)些(xie)快(kuai)速方法(fa)來檢測以食(shi)品為(wei)載體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)病(bing)原(yuan)(yuan)。已(yi)(yi)經建(jian)立(li)的(de)(de)沙門氏(shi)菌(jun)免(mian)(mian)(mian)疫學檢測方法(fa)有許多種,大致可分為(wei)以酶標(biao)(biao)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ELISA),熒(ying)光抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)染色(se)(免(mian)(mian)(mian)疫熒(ying)光法(fa)),同(tong)位素標(biao)(biao)記抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(放射免(mian)(mian)(mian)疫試(shi)驗)為(wei)基(ji)(ji)礎的(de)(de)方法(fa)及其(qi)(qi)它多種以抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)為(wei)基(ji)(ji)礎,利用乳膠(jiao)凝集、免(mian)(mian)(mian)疫傳感器、免(mian)(mian)(mian)疫擴(kuo)散及免(mian)(mian)(mian)疫色(se)譜技(ji)術的(de)(de)方法(fa)。但常規(gui)中(zhong)最(zui)廣(guang)泛采用的(de)(de)是以雙位點(dian)ELISA技(ji)術即夾心ELISA為(wei)基(ji)(ji)礎的(de)(de)方法(fa)。此(ci)(ci)法(fa)改進(jin)后用有放射活性(xing)的(de)(de)同(tong)位素替(ti)代標(biao)(biao)記抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti),概括(kuo)地說,是指(zhi)以固定(ding)在固體(ti)(ti)(ti)(ti)基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)上(shang)的(de)(de)“捕捉”抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)來捕捉目(mu)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan),經洗(xi)滌除去未結合的(de)(de)成(cheng)分,加入第二(er)種酶標(biao)(biao)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti),此(ci)(ci)者結合在捕捉到(dao)的(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)不同(tong)位點(dian)上(shang),第二(er)次(ci)洗(xi)滌后加入酶作(zuo)用基(ji)(ji)質(zhi)(zhi),并令其(qi)(qi)與顏色(se)成(cheng)分反應(ying)(ying),然后用分光光度法(fa)即很容(rong)易檢測到(dao)目(mu)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)。采用微量滴定(ding)板作(zuo)為(wei)固態基(ji)(ji)質(zhi)(zhi)使(shi)反應(ying)(ying)形(xing)式標(biao)(biao)準化,并促成(cheng)其(qi)(qi)自動化。
黎兆(zhao)(zhao)滾(gun)等(deng)(deng)(deng)人(ren)(ren)首次在(zai)國內口(kou)岸系統應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)微(wei)量板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對(dui)進出口(kou)動物(wu)產品(pin)(pin)(魚(yu)粉、肉(rou)骨粉等(deng)(deng)(deng))進行(xing)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)檢(jian)(jian)測(ce)。該法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)采用(yong)(yong)(yong)(yong)預(yu)先(xian)(xian)包被了(le)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(A-E群)單(dan)克隆抗(kang)體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)量板(ban),加(jia)入(ru)經增(zeng)(zeng)菌(jun)處理的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin),反(fan)應(ying)(ying)后再加(jia)入(ru)一(yi)(yi)定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)指示(shi)劑,作用(yong)(yong)(yong)(yong)畢后用(yong)(yong)(yong)(yong)酶標儀(yi)測(ce)定(ding)OD值(zhi)來判定(ding)結(jie)果(guo)。食物(wu)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)經適當的(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)菌(jun)處理,也可用(yong)(yong)(yong)(yong)此法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)進行(xing)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)檢(jian)(jian)測(ce)。ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)出沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)極限范(fan)圍在(zai)105~106個細胞/ml,因此,要(yao)(yao)得出可靠的(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)果(guo),食物(wu)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)首先(xian)(xian)必需進行(xing)預(yu)增(zeng)(zeng)菌(jun)、選(xuan)擇性(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun),通(tong)常(chang)還要(yao)(yao)在(zai)含有(you)D-甘(gan)露糖(tang)的(de)(de)(de)(de)(de)肉(rou)湯(tang)(tang)(M肉(rou)湯(tang)(tang))中進行(xing)后增(zeng)(zeng)菌(jun),以促(cu)進鞭毛(mao)發育(yu)。總(zong)的(de)(de)(de)(de)(de)來說,標準的(de)(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei),約(yue)需要(yao)(yao)經過(guo)40~48h的(de)(de)(de)(de)(de)孵育(yu)才(cai)能完(wan)成。黎兆(zhao)(zhao)滾(gun)等(deng)(deng)(deng)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)量板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)過(guo)程分三(san)步,共耗時(shi)(shi)24h:①選(xuan)用(yong)(yong)(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)湯(tang)(tang)進行(xing)預(yu)增(zeng)(zeng)菌(jun)(6h),使(shi)(shi)(shi)“致(zhi)傷”、冷凍(dong)的(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)復蘇。②使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)選(xuan)擇性(xing)培養(yang)基RV進行(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(14h),使(shi)(shi)(shi)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)大量繁(fan)殖,同時(shi)(shi)抑(yi)制(zhi)(zhi)其它(ta)雜菌(jun)生長。③使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)湯(tang)(tang)(蛋(dan)白胨水)進行(xing)后增(zeng)(zeng)菌(jun)(4h),使(shi)(shi)(shi)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)數(shu)量大大增(zeng)(zeng)加(jia)。比上述(shu)(shu)標準的(de)(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)過(guo)程縮(suo)短了(le)一(yi)(yi)半的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間。ELISA方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)本(ben)身,則(ze)僅需要(yao)(yao)大約(yue)2h而已(yi)(其中30min是操作時(shi)(shi)間,90min是孵育(yu)時(shi)(shi)間)。相(xiang)比之下(xia),黎兆(zhao)(zhao)滾(gun)等(deng)(deng)(deng)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)可在(zai)27h內完(wan)成,比上述(shu)(shu)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)縮(suo)短了(le)一(yi)(yi)半的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間,頗值(zhi)得推(tui)廣應(ying)(ying)用(yong)(yong)(yong)(yong)。最新式的(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)免疫(yi)學檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa),利用(yong)(yong)(yong)(yong)經特異(yi)性(xing)抗(kang)體(ti)敏化的(de)(de)(de)(de)(de)免疫(yi)色譜卡片(pian)為(wei)基礎。幾滴樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)到卡片(pian)上,結(jie)果(guo)可以直接用(yong)(yong)(yong)(yong)肉(rou)眼讀出。免疫(yi)色譜卡片(pian)極易操作,且由于無需要(yao)(yao)特殊設備(bei),很適合小型實驗(yan)室(shi)使(shi)(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)。盡管(guan)卡片(pian)檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)一(yi)(yi)樣(yang)(yang)需要(yao)(yao)對(dui)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)進行(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)處理,但它(ta)(卡片(pian)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa))本(ben)身通(tong)常(chang)需時(shi)(shi)不超過(guo)10min,如果(guo)采用(yong)(yong)(yong)(yong)黎兆(zhao)(zhao)滾(gun)等(deng)(deng)(deng)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備(bei)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa),則(ze)可使(shi)(shi)(shi)操作時(shi)(shi)間更為(wei)縮(suo)短。
細(xi)(xi)胞(bao)(bao)核(he)酸(suan)(suan)DNA和(he)(he)RNA是(shi)唯一(yi)(yi)(yi)一(yi)(yi)(yi)類(lei)可(ke)以(yi)攜(xie)帶信息的(de)(de)(de)(de)(de)大(da)分(fen)子(zi)(zi)。由于所(suo)有(you)的(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)都含有(you)這(zhe)種分(fen)子(zi)(zi),可(ke)以(yi)利用(yong)(yong)它作(zuo)(zuo)為(wei)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)靶(ba)(ba)。標(biao)(biao)(biao)靶(ba)(ba)通常是(shi)一(yi)(yi)(yi)個(ge)特異(yi)性(xing)(xing)(xing)核(he)酸(suan)(suan)序列(lie),它可(ke)通過(guo)以(yi)補體(ti)核(he)酸(suan)(suan)分(fen)子(zi)(zi)作(zuo)(zuo)為(wei)探針(zhen)(zhen)來檢(jian)(jian)(jian)出(chu)。與(yu)免(mian)疫學方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)相(xiang)似,探針(zhen)(zhen)也需要加(jia)附適當(dang)的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)記,如(ru)放射性(xing)(xing)(xing)同(tong)位素(su)、酶(mei)或發(fa)(fa)光(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)(biao)(biao)識物(wu)。Fitts等人在食(shi)品(pin)(pin)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)中引(yin)入了(le)第(di)一(yi)(yi)(yi)代DNA—RNA雜(za)(za)交技術,此(ci)法(fa)(fa)(fa)應用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)探針(zhen)(zhen)含有(you)用(yong)(yong)放射性(xing)(xing)(xing)同(tong)位素(su)標(biao)(biao)(biao)記的(de)(de)(de)(de)(de)傷(shang)寒沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)DNA片段,其(qi)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)高(gao),經(jing)(jing)大(da)約48h的(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)步驟后,檢(jian)(jian)(jian)測(ce)極限可(ke)達(da)108個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)/ml,但由于要使用(yong)(yong)放射性(xing)(xing)(xing)同(tong)位素(su),只能在專門(men)(men)(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)實驗室應用(yong)(yong),此(ci)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)優點都被抵(di)消了(le)。為(wei)此(ci),以(yi)核(he)酸(suan)(suan)雜(za)(za)交為(wei)基(ji)礎(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)第(di)二(er)代技術—比(bi)色計已發(fa)(fa)展(zhan)起來。這(zhe)種方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)依賴(lai)于沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)核(he)糖(tang)(tang)體(ti)RNA(rRNA)—核(he)糖(tang)(tang)體(ti)發(fa)(fa)育過(guo)程中儲存的(de)(de)(de)(de)(de)核(he)酸(suan)(suan)成(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)。核(he)糖(tang)(tang)體(ti)是(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)蛋白(bai)質合成(cheng)器的(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)(yi)部分(fen),每個(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中存在5000~20000個(ge)復制體(ti),而相(xiang)比(bi)之(zhi)下染色體(ti)DNA復制體(ti)僅2~10個(ge)。這(zhe)種天(tian)然富(fu)含rRNA標(biao)(biao)(biao)靶(ba)(ba)序列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)情況(kuang)使得用(yong)(yong)無輻(fu)射計檢(jian)(jian)(jian)測(ce)成(cheng)為(wei)可(ke)能,同(tong)時又保(bao)持(chi)了(le)與(yu)放射性(xing)(xing)(xing)同(tong)位素(su)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)相(xiang)當(dang)或更(geng)高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)。其(qi)另一(yi)(yi)(yi)優點是(shi)由于rRNA為(wei)單鏈(lian)(而DNA為(wei)雙鏈(lian)),雜(za)(za)交前無需經(jing)(jing)過(guo)變性(xing)(xing)(xing)步驟。要得到陽性(xing)(xing)(xing)結果,此(ci)法(fa)(fa)(fa)需要105個(ge)靶(ba)(ba)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)/ml,因此(ci)對(dui)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)來說,需要進(jin)行(xing)預增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)選擇(ze)性(xing)(xing)(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),總共約50h。rRNA探針(zhen)(zhen)法(fa)(fa)(fa)比(bi)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(酶(mei)聯免(mian)疫檢(jian)(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa))更(geng)耗時,但二(er)者成(cheng)本相(xiang)近。食(shi)品(pin)(pin)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)最新進(jin)展(zhan)是(shi)在化學擴增(zeng)(zeng)體(ti)系(xi)方(fang)(fang)(fang)(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)展(zhan),即聚(ju)合酶(mei)鏈(lian)反(fan)應(PCR),用(yong)(yong)該(gai)體(ti)系(xi)可(ke)對(dui)制備好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)樣品(pin)(pin)進(jin)行(xing)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)DNA擴增(zeng)(zeng),以(yi)便(bian)更(geng)易于用(yong)(yong)諸如(ru)凝膠電泳法(fa)(fa)(fa)或比(bi)色型ELISA法(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)。用(yong)(yong)于檢(jian)(jian)(jian)測(ce)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)其(qi)它以(yi)食(shi)物(wu)為(wei)載體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)業(ye)已建立,其(qi)中一(yi)(yi)(yi)些方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)顯示了(le)極好(hao)的(de)(de)(de)(de)(de)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)。但該(gai)法(fa)(fa)(fa)較(jiao)難自動化,且必需經(jing)(jing)選擇(ze)性(xing)(xing)(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)以(yi)稀釋可(ke)能干擾檢(jian)(jian)(jian)測(ce)反(fan)應的(de)(de)(de)(de)(de)某些成(cheng)分(fen)。一(yi)(yi)(yi)個(ge)完整(zheng)的(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)PCR為(wei)基(ji)礎(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa),需要2天(tian)才能完成(cheng),很大(da)程度上抵(di)銷了(le)其(qi)高(gao)敏(min)感(gan)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)優點,但這(zhe)種方(fang)(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)對(dui)那些含沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)較(jiao)少或沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)“致傷(shang)”嚴重難以(yi)復蘇而仍(reng)保(bao)有(you)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)(de)樣品(pin)(pin)尤其(qi)有(you)效。