大腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(Escherichia coli),又叫大腸(chang)(chang)埃希氏菌(jun),Escherich在(zai)1885年發(fa)現的。大腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)是條件致病菌(jun),在(zai)一定條件下(xia)可以(yi)引起(qi)人(ren)和多(duo)種(zhong)動物(wu)發(fa)生胃腸(chang)(chang)道感(gan)染(ran)或(huo)尿道等多(duo)種(zhong)局部組織器官感(gan)染(ran)。
大腸(chang)(chang)(chang)桿菌是(shi)動(dong)物腸(chang)(chang)(chang)道(dao)中的(de)(de)正常寄居菌,其中很小一(yi)部分在(zai)一(yi)定條件下引(yin)起(qi)疾病。大腸(chang)(chang)(chang)桿菌的(de)(de)血清型能(neng)夠引(yin)起(qi)人(ren)體或動(dong)物胃腸(chang)(chang)(chang)道(dao)感染(ran)(ran),主要(yao)是(shi)由特定的(de)(de)菌毛(mao)抗(kang)原、致病性毒素等感染(ran)(ran)引(yin)起(qi)的(de)(de),除胃腸(chang)(chang)(chang)道(dao)感染(ran)(ran)以外(wai),還會引(yin)起(qi)尿道(dao)感染(ran)(ran)、關節炎、腦膜炎以及敗血型感染(ran)(ran)等。
目前國際(ji)公認的(de)分類,主要(yao)有(you)(you)六個(ge)種類的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun),即(ji)能(neng)夠(gou)致使(shi)胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)(dao)(dao)感(gan)染的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)(dao)(dao)致病性(xing)的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EPEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)(dao)(dao)產毒素性(xing)的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(ETEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)(dao)(dao)侵襲(xi)性(xing)的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EIEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)(dao)(dao)出血性(xing)的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EHEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)集聚性(xing)的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EAEC)以(yi)(yi)及(ji)近年來發現(xian)的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)產志(zhi)賀樣毒素同時具有(you)(you)一(yi)定(ding)侵襲(xi)力的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(ESIES),另外(wai),還有(you)(you)能(neng)夠(gou)致使(shi)尿(niao)(niao)道(dao)(dao)(dao)(dao)感(gan)染的(de)尿(niao)(niao)道(dao)(dao)(dao)(dao)致病性(xing)的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(UPEC),以(yi)(yi)及(ji)最新命名(ming)的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)(dao)(dao)集聚性(xing)的(de)黏附大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EAggEC)。
根(gen)據大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)感染性(xing)狀能否產生溶(rong)血(xue)素和有無溶(rong)血(xue)的(de)(de)能力,可將大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)分(fen)為(wei)兩大(da)類:即溶(rong)血(xue)性(xing)的(de)(de)大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)和非溶(rong)血(xue)性(xing)的(de)(de)大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)。
根據大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)在感(gan)(gan)染過程中能(neng)否產(chan)生(sheng)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)能(neng)力(li),可將大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)分為兩(liang)大(da)類:即產(chan)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)和非(fei)產(chan)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)。產(chan)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)人和多(duo)種動物(wu)的(de)(de)(de)(de)任何感(gan)(gan)染性(xing)(xing)腹(fu)瀉的(de)(de)(de)(de)重(zhong)要(yao)病原(yuan),鑒定產(chan)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)主要(yao)是(shi)測定所(suo)分離大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)分泌的(de)(de)(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)類型。除(chu)此之外,也可以(yi)根據大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)產(chan)生(sheng)腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)能(neng)力(li),結合其對(dui)不同腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)敏感(gan)(gan)性(xing)(xing),而將大(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)分型,稱為腸(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)型。
大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)是(shi)短桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),兩(liang)端呈鈍圓形,革蘭陰性。有(you)時因環境不(bu)同(tong),個別(bie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)體出現近似球桿(gan)(gan)(gan)狀或長絲(si)狀;大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)多(duo)(duo)是(shi)單(dan)一或兩(liang)個存(cun)在(zai),但不(bu)會排列呈長鏈形狀;大(da)多(duo)(duo)數(shu)(shu)的大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)株具(ju)有(you)莢(jia)膜或微莢(jia)膜結構,但是(shi)不(bu)能形成芽孢;多(duo)(duo)數(shu)(shu)大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)株生長有(you)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)毛,其(qi)中一些菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)毛是(shi)針對(dui)宿主(zhu)及其(qi)他的一些組織或細(xi)胞具(ju)有(you)黏附作用的宿主(zhu)特(te)異性菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)毛。
大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)的生(sheng)化(hua)代(dai)謝非(fei)常(chang)活躍。大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)可(ke)以發(fa)酵葡萄糖(tang)產酸(suan)、產氣(qi),個(ge)別菌(jun)(jun)(jun)株(zhu)不產氣(qi),大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)還能發(fa)酵多(duo)種(zhong)碳水化(hua)合物,也可(ke)以利用(yong)(yong)多(duo)種(zhong)有機酸(suan)鹽(yan)。大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)在常(chang)用(yong)(yong)的生(sheng)化(hua)特性(xing)檢測項目中,甲(jia)基紅試(shi)驗呈(cheng)陽(yang)性(xing),吲哚產生(sheng)和乳(ru)糖(tang)發(fa)酵是(shi)陽(yang)性(xing)(個(ge)別菌(jun)(jun)(jun)株(zhu)表(biao)現(xian)陰性(xing)),維-培試(shi)驗是(shi)陰性(xing),尿素酶(mei)和檸檬酸(suan)鹽(yan)利用(yong)(yong)呈(cheng)陰性(xing)(極個(ge)別菌(jun)(jun)(jun)株(zhu)表(biao)現(xian)陽(yang)性(xing)),硝酸(suan)鹽(yan)還原試(shi)驗表(biao)現(xian)陽(yang)性(xing),氧化(hua)酶(mei)表(biao)現(xian)陰性(xing),氧化(hua)-發(fa)酵試(shi)驗表(biao)現(xian)為F型。
對人和多(duo)種動(dong)物(wu)(wu)來講,由于病(bing)原(yuan)(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)常(chang)常(chang)傾向具有(you)一定的(de)(de)(de)宿主特(te)異(yi)性,對人有(you)致病(bing)作用(yong)的(de)(de)(de)菌(jun)株常(chang)常(chang)是很少引起動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)感染(ran)(ran),反之亦然,據此(ci)可將(jiang)病(bing)原(yuan)(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)大(da)(da)(da)致上(shang)將(jiang)其劃分為兩種:即人病(bing)原(yuan)(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)和動(dong)物(wu)(wu)病(bing)原(yuan)(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)。動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)致瀉性大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)已被明確的(de)(de)(de)特(te)征主要是類似(si)于ETEC的(de)(de)(de)菌(jun)株。UPEC是一群能夠引起人的(de)(de)(de)尿(niao)道(dao)感染(ran)(ran)最常(chang)見(jian)的(de)(de)(de)病(bing)原(yuan)(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)。尿(niao)道(dao)感染(ran)(ran)是很少獨立存在于動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)病(bing)中的(de)(de)(de)感染(ran)(ran)癥狀。
大腸(chang)桿菌的發生(sheng)與流行感(gan)染是呈世界性(xing)分(fen)(fen)布的,但(dan)大腸(chang)桿菌的流行性(xing)還是存在(zai)一定的區域分(fen)(fen)布特(te)征的。這些區域分(fen)(fen)布的特(te)征在(zai)人的大腸(chang)桿菌感(gan)染中表現的更明顯些,最大的可能是因為與區域間經濟條件和社(she)會衛(wei)生(sheng)狀況等有一定聯(lian)系的。
動(dong)物(wu)的大腸桿菌(jun)病(bing)可以發生在(zai)多(duo)種家畜、家禽、養(yang)殖經濟動(dong)物(wu)以及(ji)其他陸生動(dong)物(wu)和某些水(shui)產動(dong)物(wu),其中豬和雞是(shi)最為易感(gan)的,而(er)且危害十分嚴重。
大腸桿菌在(zai)動(dong)物(wu)群體間的感(gan)染的季節發(fa)病(bing)特征不是(shi)非常明顯。在(zai)一年四季豬(zhu)均可發(fa)生(sheng),但只要是(shi)發(fa)生(sheng)在(zai)豬(zhu)的產仔期至(zhi)斷(duan)乳期,這與豬(zhu)的易感(gan)日齡(ling)相關聯。犢牛和羔(gao)羊(yang)多(duo)發(fa)生(sheng)于冬季和春季。其他動(dong)物(wu)的大腸桿菌感(gan)染在(zai)常年均有發(fa)生(sheng),季節性不明顯。
人(ren)的(de)(de)(de)大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)病(bing)的(de)(de)(de)主要(yao)傳(chuan)染(ran)源是因為(wei)在胃腸(chang)道感(gan)染(ran)患者的(de)(de)(de)糞(fen)便中(zhong)有大(da)量大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)病(bing)原菌(jun)排至體外構成的(de)(de)(de)。大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)在人(ren)之(zhi)間(jian)的(de)(de)(de)傳(chuan)播(bo)途(tu)徑多(duo)是通過糞(fen)-口這一傳(chuan)播(bo)途(tu)徑,在一定的(de)(de)(de)條件下可引起大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)病(bing)散發或流(liu)行(xing)。
食品中(zhong)的(de)大(da)腸桿菌進行快速準確的(de)檢測已成為(wei)了(le)人們經常關注的(de)問題。下面闡(chan)述食品中(zhong)的(de)大(da)腸桿菌檢測的(de)方法(fa)及分析。
這(zhe)種方法(fa)主(zhu)要(yao)是在(zai)44.5℃下(xia)的(de)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)上進(jin)(jin)行(xing)大(da)腸桿(gan)菌的(de)培(pei)養(yang)(yang),該培(pei)養(yang)(yang)基(ji)含(han)有熒(ying)光底(di)物,需要(yao)培(pei)養(yang)(yang)24h。然(ran)后對熒(ying)光底(di)物進(jin)(jin)行(xing)釋放,需要(yao)采(cai)用葡萄糖醛酸進(jin)(jin)行(xing),讓培(pei)養(yang)(yang)基(ji)能夠在(zai)紫外光的(de)照射(she)下(xia)發出熒(ying)光。采(cai)用這(zhe)樣的(de)方式方法(fa),還可以進(jin)(jin)行(xing)統計(ji)學估(gu)計(ji)原來樣品中的(de)菌落。主(zhu)要(yao)步(bu)驟包(bao)括發酵(jiao)、分離培(pei)養(yang)(yang)、二次發酵(jiao)、顯(xian)微鏡觀察等。
該方法主要(yao)過(guo)程:加(jia)入(ru)10mL左右的(de)無菌(jun)水于濾(lv)器中,然(ran)后摻入(ru)一(yi)些無菌(jun)水進(jin)行(xing)清(qing)潔(jie)濾(lv)器的(de)內壁,再進(jin)行(xing)過(guo)濾(lv),將濾(lv)膜放(fang)在(zai)M-FC培養(yang)基中,兩者(zhe)之間(jian)不(bu)能夠有(you)氣泡,然(ran)后進(jin)行(xing)密封(feng),存(cun)(cun)放(fang)溫度為44.5℃,存(cun)(cun)放(fang)時間(jian)約24h,直到大(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)的(de)菌(jun)群變(bian)成藍色或藍綠(lv)色。然(ran)后記錄數(shu)據,估算(suan)(suan)每(mei)一(yi)單位的(de)水溶(rong)液菌(jun)群數(shu)量,然(ran)后進(jin)行(xing)大(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)量值(zhi)的(de)換算(suan)(suan)。
用無菌吸管吸取稀釋度(du)(du)(du)樣(yang)品(pin)1mL,該樣(yang)品(pin)與乳糖膽鹽發酵類似(si),然后(hou)將其(qi)放(fang)入無菌培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)中(zhong),再加(jia)(jia)入溫(wen)度(du)(du)(du)于45℃下(xia)的CDLJJD顯(xian)色培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基中(zhong)10mL的量,并進(jin)行(xing)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)中(zhong)溶液(ye)均勻混(hun)合(he),可以通過快(kuai)速轉動(dong)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)(min)的方式(shi),等(deng)溶液(ye)凝固以后(hou),加(jia)(jia)入5mL左(zuo)右,然后(hou)快(kuai)速搖晃培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基,使其(qi)可以均勻覆蓋(gai)平板表面(mian),等(deng)其(qi)凝固以后(hou),翻(fan)轉培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基,在(zai)溫(wen)度(du)(du)(du)37℃中(zhong)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)24h左(zuo)右,然后(hou)觀察其(qi)形態,顏(yan)色等(deng)變化。除此之外(wai),平行(xing)設置兩(liang)個稀釋度(du)(du)(du)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基,步(bu)驟是先稀釋樣(yang)本,通過稀釋后(hou),微生物可以分散(san)為單個細(xi)胞,然后(hou)進(jin)行(xing)一定環境條件下(xia)培養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang),直到(dao)其(qi)長(chang)成菌落為止,然后(hou)進(jin)行(xing)計(ji)算大腸(chang)桿菌的數量,通過稀釋度(du)(du)(du)和樣(yang)本數量進(jin)行(xing)計(ji)算。
該分離(li)技(ji)術的(de)(de)主要(yao)原理(li)(li)是以磁珠(zhu)為載(zai)體和抗體,進(jin)行抗體和磁珠(zhu)的(de)(de)結合,然后通過磁力技(ji)術完成(cheng)力學的(de)(de)移動,進(jin)而分離(li)大腸桿菌(jun)。與其(qi)他分離(li)細菌(jun)的(de)(de)方(fang)式相比,這(zhe)樣(yang)的(de)(de)方(fang)式方(fang)法(fa)具有(you)一定的(de)(de)優(you)點,該技(ji)術可以提升(sheng)樣(yang)本中病原性弧(hu)菌(jun)的(de)(de)檢(jian)測成(cheng)功率(lv),并(bing)且(qie)免疫(yi)磁珠(zhu)技(ji)術可以于不同菌(jun)種中對不同的(de)(de)微生物進(jin)行處理(li)(li),進(jin)而在很大程度上提高(gao)檢(jian)測效率(lv)。
主要是運用免疫自(zi)動化分析儀,該(gai)技術(shu)產生并運用于(yu)1970年(nian)。隨著科技的(de)(de)(de)(de)發展和進步,自(zi)動化儀器檢測技術(shu)應用非(fei)常(chang)(chang)廣(guang)泛(fan),并且操作起來非(fei)常(chang)(chang)方便,可(ke)以節(jie)約很多時間,其受干擾的(de)(de)(de)(de)程(cheng)度(du)較小,可(ke)以節(jie)省人力物力的(de)(de)(de)(de)投(tou)入,也可(ke)以提高檢測的(de)(de)(de)(de)精確度(du)。在現階(jie)段的(de)(de)(de)(de)發展過程(cheng)中,自(zi)動酶(mei)的(de)(de)(de)(de)免疫檢測體(ti)系(xi)的(de)(de)(de)(de)應用非(fei)常(chang)(chang)廣(guang)泛(fan)。
在近些(xie)年(nian)的(de)(de)(de)發(fa)展過(guo)程中(zhong),生(sheng)物發(fa)光(guang)(guang)技術(shu)(shu)(shu)應用(yong)(yong)很(hen)廣泛,是(shi)一種比較(jiao)快速的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)微生(sheng)物的(de)(de)(de)技術(shu)(shu)(shu)。在活性細胞中(zhong),ATP是(shi)其常見的(de)(de)(de)能量(liang)代謝產,可(ke)以提供細胞生(sheng)理活動過(guo)程中(zhong)所需的(de)(de)(de)能量(liang)。并(bing)且(qie),該(gai)技術(shu)(shu)(shu)可(ke)以在生(sheng)物體內可(ke)以在一定范圍內保持一定的(de)(de)(de)含量(liang)。食品中(zhong)的(de)(de)(de)大腸桿菌檢(jian)(jian)測(ce)技術(shu)(shu)(shu)可(ke)以采(cai)用(yong)(yong)熒光(guang)(guang)光(guang)(guang)度的(de)(de)(de)方法,因(yin)為(wei)生(sheng)物體發(fa)光(guang)(guang)的(de)(de)(de)原(yuan)因(yin)是(shi)有熒光(guang)(guang)素酶的(de)(de)(de)作用(yong)(yong),產生(sheng)了(le)發(fa)光(guang)(guang)的(de)(de)(de)效果。該(gai)物質來源于北美的(de)(de)(de)螢火蟲體內,可(ke)以催化熒光(guang)(guang)素的(de)(de)(de)氧化作用(yong)(yong),不過(guo),該(gai)物質性質不穩定,可(ke)以對(dui)熒光(guang)(guang)進行(xing)快速分解。另(ling)外,該(gai)檢(jian)(jian)測(ce)技術(shu)(shu)(shu)結果獲得過(guo)程是(shi)非常快的(de)(de)(de),并(bing)且(qie)該(gai)設備攜(xie)帶方便,十分適(shi)用(yong)(yong)于現場檢(jian)(jian)測(ce)。
可(ke)引(yin)起腹瀉的致病性大(da)腸桿菌(jun)(jun)、傷寒桿菌(jun)(jun)、霍亂(luan)弧菌(jun)(jun)等普通細菌(jun)(jun)繁殖體,80℃熱水(shui)需要(yao)5-10分(fen)鐘、沸水(shui)需要(yao)2-5分(fen)鐘才能殺滅。