弧菌屬(Vibrio)中霍亂弧菌(V.cholerae)、引(yin)起一(yi)種烈性腸道傳染(ran)病,發病急、傳染(ran)性強、病死率高,屬于國際(ji)檢疫傳染(ran)病。
霍亂弧菌包括兩個生物型:古典生物型(Classical biotype)和埃爾托生物型(EL-Tor bio-type)。這兩種型別(bie)(bie)除個別(bie)(bie)生(sheng)物學性狀稍有不同(tong)外,形態(tai)和免疫學性基本相同(tong),在(zai)臨床病(bing)(bing)理(li)及(ji)流行病(bing)(bing)學特征上沒有本質的差(cha)別(bie)(bie)。自1817年以來,全(quan)球共發生(sheng)了七次(ci)(ci)世界性大(da)流行,前(qian)六次(ci)(ci)病(bing)(bing)原是古(gu)典型霍(huo)亂(luan)弧菌,第七次(ci)(ci)病(bing)(bing)原是埃(ai)爾(er)托型所致(zhi)。
1992年10月在(zai)印度東南部又(you)發現了一個引起霍亂流行的新(xin)血(xue)清(qing)型菌(jun)(jun)株(0139),它引起的霍亂在(zai)臨床(chuang)表現及傳播(bo)方式上(shang)與(yu)古典(dian)型霍亂完全相(xiang)同,但不能被01群霍亂弧菌(jun)(jun)診斷血(xue)清(qing)所凝(ning)集,抗01群的抗血(xue)清(qing)對0139菌(jun)(jun)株無保(bao)護(hu)性(xing)免疫。在(zai)水中的存活時(shi)間較01群霍亂弧菌(jun)(jun)長(chang),因而有可能成為引起世(shi)界(jie)性(xing)霍亂流行的新(xin)菌(jun)(jun)株。
新從病人分離出(chu)古典型霍亂(luan)弧(hu)菌(jun)(jun)和ELtor弧(hu)菌(jun)(jun)比(bi)較(jiao)典型,為革蘭氏(shi)陰性菌(jun)(jun),菌(jun)(jun)體彎曲(qu)呈(cheng)(cheng)弧(hu)狀或(huo)逗點狀,菌(jun)(jun)體一(yi)端(duan)有(you)單(dan)根鞭毛和菌(jun)(jun)毛,無莢膜(mo)與(yu)芽(ya)胞。經人工培養(yang)后(hou),易失去弧(hu)形而呈(cheng)(cheng)桿狀。取霍亂(luan)病人米(mi)泔水樣糞便作活菌(jun)(jun)懸滴觀察,可見細(xi)菌(jun)(jun)運動極(ji)為活潑,呈(cheng)(cheng)流星穿梭運動。在液體培養(yang)基(ji)內常呈(cheng)(cheng)單(dan)個、成(cheng)對(dui)成(cheng)鏈狀,有(you)的相連呈(cheng)(cheng)S形,甚至螺旋狀。
營養要求不高,在PH8.8~9.0的堿(jian)(jian)性(xing)蛋白胨(dong)水(shui)或(huo)平(ping)板中生(sheng)長良好。因其他細菌(jun)在(zai)這一(yi)PH不易(yi)生(sheng)長,故堿(jian)(jian)性(xing)蛋白胨(dong)水(shui)可作為選擇性(xing)增殖霍亂弧菌(jun)的培養基。在(zai)堿(jian)(jian)性(xing)平(ping)板上菌(jun)落直(zhi)徑為2mm,圓形,光滑,透明(ming)。
霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)能還原硝(xiao)(xiao)(xiao)酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan)為亞硝(xiao)(xiao)(xiao)酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan),靛(dian)基(ji)質(zhi)反(fan)(fan)(fan)應陽性,當培養在含硝(xiao)(xiao)(xiao)酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan)及色氨酸(suan)(suan)(suan)的培養基(ji)中,產生(sheng)靛(dian)基(ji)質(zhi)與亞硝(xiao)(xiao)(xiao)酸(suan)(suan)(suan)鹽(yan),在濃硫酸(suan)(suan)(suan)存在時,生(sheng)成紅(hong)(hong)色,稱為霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)紅(hong)(hong)反(fan)(fan)(fan)應,但(dan)其他非致病性弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)亦有(you)此反(fan)(fan)(fan)應,故(gu)不(bu)能憑此鑒定(ding)霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)。EL Tor型霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)與古典型霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)生(sheng)化反(fan)(fan)(fan)應有(you)所不(bu)同。前者Vp陽性而后(hou)者為陰(yin)性。前者能產生(sheng)強烈的溶(rong)血(xue)(xue)素,溶(rong)解羊紅(hong)(hong)細(xi)(xi)胞,在血(xue)(xue)平板上生(sheng)長的菌(jun)(jun)(jun)落周(zhou)圍出現明顯(xian)的透明溶(rong)血(xue)(xue)環(huan),古典型霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)則不(bu)溶(rong)解羊紅(hong)(hong)細(xi)(xi)胞。個別EL Tor型霍(huo)(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)(hu)菌(jun)(jun)(jun)株亦不(bu)溶(rong)血(xue)(xue)。
根據弧菌(jun)(jun)O抗原不同(tong),分成Ⅵ個(ge)血清(qing)群,第(di)Ⅰ群包括(kuo)霍亂弧菌(jun)(jun)的兩個(ge)生物型(xing)。第(di)Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將(jiang)霍亂弧菌(jun)(jun)分為(wei)三個(ge)血清(qing)型(xing):含(han)AC者為(wei)原型(xing)(又稱(cheng)稻(dao)葉型(xing)),含(han)AB者為(wei)異型(xing)(又稱(cheng)小(xiao)川型(xing)),A、B、C均(jun)有者稱(cheng)中間型(xing)(彥島型(xing))。
霍亂(luan)弧菌古典(dian)生(sheng)(sheng)物(wu)型(xing)對(dui)外環境抵(di)抗(kang)力較(jiao)弱,EL-Tor生(sheng)(sheng)物(wu)型(xing)抵(di)抗(kang)力較(jiao)強,在河水(shui)(shui)、井(jing)水(shui)(shui)、海水(shui)(shui)中可存(cun)活1~3周(zhou),在鮮魚,貝殼類食物(wu)上存(cun)活1~2周(zhou)。
霍亂弧菌對熱,干燥,日(ri)光,化(hua)學消毒(du)(du)劑和酸均很敏感,耐(nai)低溫,耐(nai)堿。濕熱55℃,15分(fen)鐘(zhong),100℃,1~2分(fen)鐘(zhong),水(shui)中(zhong)加0.5ppm氯15分(fen)鐘(zhong)可被(bei)殺(sha)死(si)。0.1%高錳(meng)酸鉀浸泡蔬菜、水(shui)果可達到消毒(du)(du)目的。在正常胃酸中(zhong)僅生存4分(fen)鐘(zhong)。
能(neng)(neng)(neng)發酵葡(pu)萄糖(tang)、麥(mai)芽糖(tang)、甘露(lu)醇(chun)、蔗(zhe)糖(tang)、半乳糖(tang)等產(chan)(chan)酸(suan)產(chan)(chan)氣,遲緩(huan)發酵乳糖(tang)。不分解阿拉伯糖(tang)、水(shui)楊素、衛矛醇(chun)、鼠李糖(tang)、木糖(tang)、側(ce)金(jin)盞花醇(chun)和肌醇(chun)。氧化酶(mei)、明膠液化試驗陽性(xing)。V-P試驗大多(duo)數EL-Tor生物型陽性(xing),而古典生物型大多(duo)為陰性(xing)。霍亂弧(hu)菌能(neng)(neng)(neng)分解色(se)氨酸(suan)產(chan)(chan)生吲哚(duo),同(tong)時能(neng)(neng)(neng)還原硝酸(suan)鹽(yan)(yan)為亞硝酸(suan)鹽(yan)(yan)。因(yin)此當霍亂弧(hu)菌培養在含(han)硝酸(suan)鹽(yan)(yan)的蛋白胨水(shui)中,所(suo)產(chan)(chan)生的亞硝酸(suan)鹽(yan)(yan)與吲哚(duo)結合成(cheng)亞硝基吲哚(duo),滴加濃硫酸(suan)即出現薔薇色(se),稱為霍亂紅(hong)試驗陽性(xing)。
根據(ju)弧(hu)菌O抗原(yuan)(yuan)不同(tong),分成Ⅵ個(ge)血清群(qun),第(di)Ⅰ群(qun)包(bao)括(kuo)霍(huo)(huo)亂弧(hu)菌的兩個(ge)生物型(xing)(xing)。第(di)Ⅰ群(qun)A、B、C三種(zhong)抗原(yuan)(yuan)成份可將霍(huo)(huo)亂弧(hu)菌分為三個(ge)血清型(xing)(xing):含(han)AC者為原(yuan)(yuan)型(xing)(xing)(又(you)(you)稱稻葉(xie)型(xing)(xing)),含(han)AB者為異型(xing)(xing)(又(you)(you)稱小川(chuan)型(xing)(xing)),A、B、C均有者稱中間型(xing)(xing)(彥島型(xing)(xing))。
1992年(nian)10月(yue)在印(yin)度東(dong)南部(bu)又發現了一個引(yin)起霍(huo)亂流(liu)行(xing)的(de)新血(xue)(xue)清(qing)型菌(jun)株(zhu)(zhu)(0139),它引(yin)起的(de)霍(huo)亂在臨床表現及傳播方式上與(yu)古(gu)典型霍(huo)亂完全(quan)相同,但不(bu)能被01群(qun)霍(huo)亂弧(hu)菌(jun)診(zhen)斷血(xue)(xue)清(qing)所凝集,抗01群(qun)的(de)抗血(xue)(xue)清(qing)對0139菌(jun)株(zhu)(zhu)無保護性免(mian)疫(yi)。在水中的(de)存活時(shi)間較01群(qun)霍(huo)亂弧(hu)菌(jun)長(chang),因(yin)而(er)有可(ke)能成為引(yin)起世界性霍(huo)亂流(liu)行(xing)的(de)新菌(jun)株(zhu)(zhu),推薦(jian)使用(yong)天津生(sheng)物芯片(pian)生(sheng)產(chan)的(de)霍(huo)亂弧(hu)菌(jun)診(zhen)斷血(xue)(xue)清(qing)。
1,普通聚合酶鏈反應法
核酸(suan)擴增技術,即(ji)聚合(he)酶鏈式反應(ying)(polymerase chainreaction,PCR),其基(ji)(ji)本原(yuan)理是(shi)設計、合(he)成兩條寡核苷酸(suan),作為引(yin)物,對(dui)應(ying)于待測(ce)(ce)病原(yuan)微生(sheng)物某(mou)一(yi)段特異性(xing)序列的(de)(de)兩端,然(ran)后(hou)在體(ti)外(wai)模擬DNA體(ti)內(nei)復制的(de)(de)過程反復擴增,使靶序列放大(da)上萬倍甚至(zhi)上百萬倍而被檢(jian)(jian)測(ce)(ce)出來。一(yi)般選擇霍亂腸毒(du)素(cholera enterotoxin,CT)基(ji)(ji)因(yin)ctx的(de)(de)保守序列作為靶基(ji)(ji)因(yin)。一(yi)些非產毒(du)株(如(ru)環(huan)境(jing)來源的(de)(de)菌(jun)(jun)株)有可能通(tong)過基(ji)(ji)因(yin)水平轉移獲得毒(du)力(li)基(ji)(ji)因(yin)成為產毒(du)株,若僅檢(jian)(jian)測(ce)(ce)ctx基(ji)(ji)因(yin)容易造成漏檢(jian)(jian)。因(yin)此,霍亂弧菌(jun)(jun)的(de)(de)其他重(zhong)要基(ji)(ji)因(yin),如(ru)毒(du)力(li)協(xie)同調節菌(jun)(jun)毛A基(ji)(ji)因(yin)(tcp A)、o抗原(yuan)基(ji)(ji)因(yin)(rfb)、外(wai)膜蛋(dan)白基(ji)(ji)因(yin)(omp)以(yi)及毒(du)力(li)表(biao)達調控(kong)基(ji)(ji)因(yin)(toxR)等也被選用為PcR的(de)(de)靶基(ji)(ji)因(yin),這(zhe)大(da)大(da)提高了檢(jian)(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)特異度.
2,多重PCR法(fa)
與常(chang)規PCR相比,多(duo)重PCR一(yi)次反應可檢測(ce)多(duo)個基(ji)因(yin),節省了(le)時(shi)間(jian)和(he)成(cheng)本。國內、外許多(duo)學者選用(yong)霍(huo)亂(luan)弧(hu)菌(jun)的毒(du)(du)素(su)基(ji)因(yin)ctx、tcp與其他基(ji)因(yin)如ompW、rfb、hly進行組合,作為共同(tong)的靶(ba)基(ji)因(yin),克(ke)服(fu)了(le)由于毒(du)(du)力(li)基(ji)因(yin)特異度不夠(gou)高而造成(cheng)的假陽(yang)性(xing)。多(duo)重PcR同(tong)時(shi)可準確區(qu)分不同(tong)血清型的霍(huo)亂(luan)弧(hu)菌(jun)和(he)快(kuai)速鑒定其是否(fou)為產(chan)毒(du)(du)株(zhu),可謂一(yi)舉多(duo)得(de),大大提高了(le)檢測(ce)效(xiao)率(lv)。
3.熒光定量PCR法
熒光定(ding)量(liang)PCR自動(dong)化(hua)程度高、特異(yi)性(xing)強、無交叉(cha)污染(ran),在(zai)霍(huo)亂弧菌的(de)(de)快(kuai)速診斷中得到(dao)廣泛應用(yong)。尤其是近年(nian)來,隨著(zhu)引物與探針的(de)(de)設計更精確、多通(tong)(tong)道熒光PCR儀的(de)(de)開發與廣泛使用(yong),多重熒光定(ding)量(liang)PCR技術日臻成(cheng)熟,并以其高通(tong)(tong)量(liang)、低成(cheng)本(ben)、高效率等優點而廣泛應用(yong)于(yu)病毒、細菌、真菌等多種病原體的(de)(de)快(kuai)速檢測(ce),成(cheng)為應用(yong)的(de)(de)熱點.
與PCR方(fang)法相比,基因芯(xin)(xin)片(pian)技術能同時獲得更多(duo)(duo)病原(yuan)學(xue)、生(sheng)物學(xue)方(fang)面(mian)的(de)(de)信息,從(cong)而(er)更為(wei)全(quan)面(mian)地分析(xi)、掌握(wo)病原(yuan)微(wei)生(sheng)物的(de)(de)特征。Vora等運用基因芯(xin)(xin)片(pian)技術對(dui)(dui)多(duo)(duo)種致病性弧菌的(de)(de)毒(du)力、毒(du)素、耐藥基因及潛在(zai)的(de)(de)毒(du)力基因進(jin)行全(quan)面(mian)分析(xi),對(dui)(dui)掌握(wo)這些細菌的(de)(de)致病性及進(jin)行有效預(yu)防、控制等具有重要意義。但基因芯(xin)(xin)片(pian)成本較高,距離推廣應用尚需時間等待。
人類在自然情況下(xia)是霍(huo)亂弧(hu)菌的(de)唯一(yi)(yi)易感者,主要通過(guo)污(wu)染(ran)的(de)水(shui)源(yuan)或飲食物經(jing)(jing)口傳染(ran)。在一(yi)(yi)定條件下(xia),霍(huo)亂弧(hu)菌進入小腸(chang)(chang)(chang)后,依靠鞭(bian)毛的(de)運動,穿過(guo)粘(zhan)(zhan)膜表面(mian)的(de)粘(zhan)(zhan)液層(ceng),可能藉菌毛作用粘(zhan)(zhan)附于腸(chang)(chang)(chang)壁上(shang)(shang)皮細(xi)胞(bao)上(shang)(shang),在腸(chang)(chang)(chang)粘(zhan)(zhan)膜表面(mian)迅速繁(fan)殖(zhi),經(jing)(jing)過(guo)短(duan)暫(zan)的(de)潛伏期后便急驟(zou)發病(bing)。該菌不侵入腸(chang)(chang)(chang)上(shang)(shang)皮細(xi)胞(bao)和腸(chang)(chang)(chang)腺,也不侵入血流,僅在局部繁(fan)殖(zhi)和產生霍(huo)亂腸(chang)(chang)(chang)毒素,此毒素作用于粘(zhan)(zhan)膜上(shang)(shang)皮細(xi)胞(bao)與腸(chang)(chang)(chang)腺使腸(chang)(chang)(chang)液過(guo)度分泌(mi),從而患者出(chu)(chu)現(xian)上(shang)(shang)吐下(xia)瀉(xie),瀉(xie)出(chu)(chu)物呈“米泔水(shui)樣(yang)”并含大量弧(hu)菌,此為本(ben)病(bing)典(dian)型(xing)的(de)特征。
霍亂腸毒(du)素本質(zhi)(zhi)是蛋(dan)白質(zhi)(zhi),不耐熱,56℃經30分鐘,即可(ke)破壞其活(huo)性(xing)。對蛋(dan)白酶敏感(gan)而對胰蛋(dan)白酶抵抗。該毒(du)素屬外毒(du)素,具有很強的抗原性(xing)。現已能將該毒(du)素高度(du)精制成晶狀,仍保持極強的生物學活(huo)性(xing)。
霍亂(luan)腸(chang)(chang)毒(du)(du)素致(zhi)病機(ji)理如(ru)下:毒(du)(du)素由A和(he)B兩個(ge)(ge)亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)組(zu)成(cheng),A亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)又分為(wei)A1和(he)A2兩個(ge)(ge)肽(tai)(tai)鏈(lian)(lian),兩者依靠二硫鏈(lian)(lian)連接。A亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)為(wei)毒(du)(du)性(xing)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei),其(qi)中(zhong)(zhong)A1肽(tai)(tai)鏈(lian)(lian)具有(you)酶(mei)活(huo)性(xing),A2肽(tai)(tai)鏈(lian)(lian)與(yu)B亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)結合(he)參(can)與(yu)受體(ti)(ti)介導的內(nei)吞作用中(zhong)(zhong)的轉(zhuan)位(wei)(wei)(wei)作用。B亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)為(wei)結合(he)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei),能(neng)(neng)特異地(di)識別腸(chang)(chang)上(shang)(shang)皮(pi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)上(shang)(shang)的受體(ti)(ti)。1個(ge)(ge)毒(du)(du)素分子(zi)由一個(ge)(ge)A亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)和(he)4℃6個(ge)(ge)B亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)組(zu)成(cheng)多聚體(ti)(ti)。霍亂(luan)腸(chang)(chang)毒(du)(du)素作用于腸(chang)(chang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)表面(mian)上(shang)(shang)的受體(ti)(ti)(由神(shen)經(jing)節苷脂GM1組(zu)成(cheng)),其(qi)B亞(ya)(ya)(ya)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)與(yu)受體(ti)(ti)結合(he),使(shi)(shi)毒(du)(du)素分子(zi)變構,A精致(zhi)單(dan)(dan)位(wei)(wei)(wei)進(jin)入細(xi)(xi)胞(bao)(bao),A1肽(tai)(tai)鏈(lian)(lian)活(huo)化,進(jin)而激活(huo)腺苷環(huan)化酶(mei)(AC),使(shi)(shi)三磷酸腺苷(ATP)轉(zhuan)化為(wei)環(huan)磷酸腺苷(cAMP),細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內(nei)cAMP濃度(du)增高,導致(zhi)腸(chang)(chang)粘膜(mo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)分泌功(gong)能(neng)(neng)大(da)為(wei)亢進(jin),使(shi)(shi)大(da)量體(ti)(ti)液(ye)和(he)電解質(zhi)進(jin)入腸(chang)(chang)腔而發(fa)生劇烈吐瀉,由于大(da)量脫水和(he)失鹽(yan),可發(fa)生代謝性(xing)酸中(zhong)(zhong)毒(du)(du),血循環(huan)衰竭,甚至休克或(huo)死(si)亡(wang)。
霍亂弧菌產生腸(chang)毒(du)素,是一種(zhong)劇烈的致泄毒(du)素。該毒(du)素作(zuo)用(yong)于腸(chang)壁促使腸(chang)黏膜細(xi)胞極度(du)分(fen)泌(mi)從而(er)使水(shui)和鹽(yan)過量(liang)排(pai)出,導致嚴(yan)重脫(tuo)(tuo)水(shui)虛脫(tuo)(tuo);進而(er)引(yin)起代謝性(xing)(xing)酸中毒(du)和急性(xing)(xing)腎功能衰竭。
引起烈(lie)性腸道傳染病(bing)霍亂,為我國的(de)(de)甲(jia)類(lei)法定(ding)傳染病(bing)。在自然情況下,人(ren)類(lei)是霍亂弧菌的(de)(de)唯一(yi)易感者。在地(di)方性流行區,除病(bing)人(ren)外,無(wu)癥(zheng)狀感染者也(ye)是重要(yao)傳染源。高(gao)比例(li)的(de)(de)無(wu)癥(zheng)狀攜帶者有(you)利于疾(ji)病(bing)的(de)(de)擴散,根據衛(wei)生狀況,無(wu)癥(zheng)狀攜帶者和病(bing)人(ren)的(de)(de)比率波動(dong)在10:1~100:1之間。
傳(chuan)播途(tu)徑主要是(shi)通過污染(ran)的水源或未煮熟的食物如海(hai)產(chan)品、蔬菜經口攝入。居住擁擠(ji),衛生狀況差,特別是(shi)公(gong)用(yong)水源是(shi)造成暴(bao)發流行的重要因素(su)。人(ren)(ren)與(yu)人(ren)(ren)之間的直接(jie)傳(chuan)播不常見。在正常胃酸(suan)條件(jian)下(xia),如以水為(wei)載(zai)體(ti),需飲入大于1010個細菌方能引起感染(ran);如以食物作(zuo)為(wei)載(zai)體(ti),由于食物高強度的緩沖能力(li),感染(ran)劑量(liang)可減少到(dao)102~104個細菌。任(ren)何能降低胃中(zhong)酸(suan)度的藥(yao)物或其他原因,都(dou)可使人(ren)(ren)對霍亂弧菌感染(ran)的敏感性增加。
病(bing)菌到達(da)(da)小(xiao)(xiao)腸(chang)后(hou),粘附于(yu)(yu)腸(chang)粘膜表面并迅(xun)速繁(fan)殖(zhi),不侵(qin)入腸(chang)上(shang)皮細(xi)胞和(he)腸(chang)腺,細(xi)菌在繁(fan)殖(zhi)過程中(zhong)產生(sheng)腸(chang)毒素(su)而(er)致病(bing)。O1群(qun)(qun)霍(huo)(huo)(huo)(huo)亂(luan)弧菌感染可(ke)(ke)(ke)從無(wu)(wu)癥狀(zhuang)(zhuang)或輕型(xing)(xing)腹(fu)瀉(xie)到嚴重(zhong)的致死(si)性腹(fu)瀉(xie)。在古(gu)典生(sheng)物型(xing)(xing)霍(huo)(huo)(huo)(huo)亂(luan)弧菌感染中(zhong),無(wu)(wu)癥狀(zhuang)(zhuang)者可(ke)(ke)(ke)達(da)(da)60%,在El Tor生(sheng)物型(xing)(xing)感染中(zhong),無(wu)(wu)癥狀(zhuang)(zhuang)者可(ke)(ke)(ke)達(da)(da)75%。霍(huo)(huo)(huo)(huo)亂(luan)弧菌古(gu)典生(sheng)物型(xing)(xing)所致疾病(bing)較El Tor生(sheng)物型(xing)(xing)嚴重(zhong)。典型(xing)(xing)病(bing)例一般在吞(tun)食細(xi)菌后(hou)2~3天突然出(chu)現劇烈腹(fu)瀉(xie)和(he)嘔(ou)吐,多(duo)無(wu)(wu)腹(fu)痛,每天大(da)便數次或數十(shi)次。在疾病(bing)最嚴重(zhong)時(shi)(shi),每小(xiao)(xiao)時(shi)(shi)失水(shui)(shui)量可(ke)(ke)(ke)高(gao)(gao)達(da)(da)1升,排(pai)出(chu)由粘膜、上(shang)皮細(xi)胞和(he)大(da)量弧菌構成的如(ru)米泔水(shui)(shui)樣的腹(fu)瀉(xie)物。由于(yu)(yu)大(da)量水(shui)(shui)分和(he)電(dian)解質喪失而(er)導(dao)致失水(shui)(shui),代謝性酸中(zhong)毒,低堿血癥和(he)低容量性休克及心(xin)力不齊和(he)腎衰(shuai)竭,如(ru)未經治療處理,病(bing)人(ren)(ren)可(ke)(ke)(ke)在12~24小(xiao)(xiao)時(shi)(shi)內死(si)亡(wang)(wang),死(si)亡(wang)(wang)率高(gao)(gao)達(da)(da)25%~60%,但若及時(shi)(shi)給(gei)病(bing)人(ren)(ren)補充液體(ti)及電(dian)解質,死(si)亡(wang)(wang)率可(ke)(ke)(ke)小(xiao)(xiao)于(yu)(yu)1%。O139群(qun)(qun)霍(huo)(huo)(huo)(huo)亂(luan)弧菌感染比(bi)O1群(qun)(qun)嚴重(zhong),表現為嚴重(zhong)脫(tuo)水(shui)(shui)和(he)高(gao)(gao)死(si)亡(wang)(wang)率,且成人(ren)(ren)病(bing)例所占比(bi)例較高(gao)(gao),大(da)于(yu)(yu)70%,而(er)O1群(qun)(qun)霍(huo)(huo)(huo)(huo)亂(luan)弧菌流(liu)行(xing)高(gao)(gao)峰期(qi),兒童病(bing)例約占60%。
病(bing)愈后一些患(huan)者可短(duan)期帶菌,一般不超過3~4周,真正的(de)慢性帶菌者罕見。病(bing)菌主要存在于(yu)膽囊中。
患過霍亂的(de)(de)人可獲得牢固的(de)(de)免疫力,再感染者少見。病人在發病數日,血液中即可出(chu)現特(te)異性抗體(ti),7℃14天抗體(ti)滴(di)度(du)達高峰(feng),隨后逐漸(jian)下降至較低水平,但能持續(xu)約3個月(yue)之外。病后小腸內可出(chu)現分泌型lgA。體(ti)液抗體(ti)與(yu)免疫的(de)(de)關系(xi)尚不(bu)清楚(chu),一般認為局(ju)部SlgA可在腸粘膜與(yu)病菌之間形成免疫屏障(zhang),有阻(zu)斷(duan)粘附和中和毒素的(de)(de)作用。
由于(yu)霍亂流(liu)(liu)行迅(xun)速,且在流(liu)(liu)行期間發病(bing)率及死(si)亡率均高,危害極大(da),因此早(zao)期迅(xun)速和正確的診斷,對治療(liao)和預防本(ben)病(bing)的蔓延有重大(da)意義。
采取病人“米泔水樣”大便或(huo)嘔(ou)吐(tu)物。鏡(jing)檢(jian)(涂片染色及懸滴(di)法(fa)檢(jian)查)觀察細菌(jun)形態,動力特(te)征。
可(ke)(ke)將材料接種至堿(jian)性蛋白胨水37℃培養6~8小時后,取生長(chang)物作(zuo)形態觀察,并轉種于堿(jian)性平板作(zuo)分離培養,取可(ke)(ke)疑菌落作(zuo)玻片凝集,陽(yang)性者再作(zuo)生化(hua)反應及生物型別(bie)鑒定試驗。
取檢(jian)材或新鮮(xian)堿(jian)性(xing)蛋白胨水培養物一滴,置于載玻(bo)(bo)片上(shang),再加霍(huo)亂(luan)弧菌多(duo)價診斷(duan)血清(qing),加蓋玻(bo)(bo)片,用暗視野(ye)鏡觀察,3分(fen)鐘(zhong)內運動被(bei)抑制(zhi)的即為陽性(xing),此法(fa)優點是(shi)快(kuai)速而特異操作簡便,但(dan)必須有數量較多(duo)的弧菌才檢(jian)出。
除(chu)一般免疫熒光(guang)法外(wai),還(huan)可(ke)用熒光(guang)菌球法檢查。
霍亂弧(hu)菌(jun)所致的(de)霍亂,為(wei)烈性腸(chang)道傳(chuan)染(ran)病(bing),曾在世界上發生過幾次大(da)流行,至今仍未平息,因此,霍亂被列為(wei)國境(jing)檢疫的(de)傳(chuan)染(ran)病(bing)。
霍亂弧(hu)菌有兩(liang)個生(sheng)(sheng)物(wu)型,一(yi)為古典生(sheng)(sheng)物(wu)型,一(yi)為愛爾(er)托生(sheng)(sheng)物(wu)型,這兩(liang)個生(sheng)(sheng)物(wu)型在(zai)形態及(ji)血(xue)清(qing)學性狀方面幾乎(hu)相同,可作第四組(zu)霍亂噬菌體裂解(jie)試(shi)驗(yan),多粘菌素B敏(min)感試(shi)驗(yan),雞紅(hong)細胞凝(ning)集(ji)試(shi)驗(yan),V-P(服-潑)二氏試(shi)驗(yan)等試(shi)驗(yan)加以鑒別:
本菌(jun)是(shi)需氧菌(jun),營(ying)養(yang)(yang)要求不(bu)高,在(zai)(zai)普通培(pei)(pei)養(yang)(yang)基上(shang)生(sheng)長(chang)(chang)(chang)良好(hao)。霍亂弧菌(jun)具有耐(nai)堿(jian)性(xing)(xing),故(gu)常用堿(jian)性(xing)(xing)(pH值(zhi)8.4~9.2)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基選擇性(xing)(xing)分離(li)培(pei)(pei)養(yang)(yang)本菌(jun)。在(zai)(zai)堿(jian)性(xing)(xing)瓊脂平板上(shang)生(sheng)長(chang)(chang)(chang)后,呈水滴樣光滑型菌(jun)落,而在(zai)(zai)堿(jian)性(xing)(xing)蛋白胨液體(ti)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基中,生(sheng)長(chang)(chang)(chang)迅速,培(pei)(pei)養(yang)(yang)6~8小時即可形(xing)成菌(jun)膜,利用這一特點,可以作快速增菌(jun),進行(xing)鑒定(ding)。在(zai)(zai)慶大霉素(su)瓊脂平板上(shang),生(sheng)長(chang)(chang)(chang)快,8~10小時能生(sheng)長(chang)(chang)(chang)出(chu)小菌(jun)落,可供鑒定(ding)用。霍亂弧菌(jun)能分解蔗糖、甘露醇,產酸不(bu)產氣(qi),不(bu)能分解阿(a)拉(la)伯膠糖。
霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)(jun)在(zai)未經處理的(de)糞(fen)便中,可(ke)(ke)存(cun)活數天;在(zai)冰箱(xiang)內的(de)牛奶、鮮(xian)肉和魚(yu)蝦水(shui)產品中存(cun)活時(shi)間分別為2~4周(zhou)、1周(zhou)和1~3周(zhou);在(zai)室溫下存(cun)放的(de)新鮮(xian)蔬菜中,可(ke)(ke)存(cun)活1~5天;在(zai)砧板和布上可(ke)(ke)存(cun)活相當長(chang)(chang)時(shi)間;在(zai)玻璃、瓷器(qi)、塑料和金屬上存(cun)活時(shi)間不超過2天。霍(huo)亂(luan)弧菌(jun)(jun)古典生(sheng)(sheng)物(wu)型(xing)在(zai)外(wai)界(jie)環境中生(sheng)(sheng)存(cun)能力(li)不強,而愛(ai)(ai)爾托生(sheng)(sheng)物(wu)型(xing)抵抗力(li)較(jiao)強,在(zai)河水(shui)、井(jing)水(shui)、池塘(tang)水(shui)和海(hai)水(shui)中可(ke)(ke)存(cun)活1~3周(zhou),甚至(zhi)更長(chang)(chang),有時(shi)在(zai)局部自然(ran)水(shui)中也(ye)能越冬(dong)。愛(ai)(ai)爾托生(sheng)(sheng)物(wu)型(xing)弧菌(jun)(jun)可(ke)(ke)粘附(fu)于(yu)海(hai)洋(yang)甲(jia)殼類(lei)生(sheng)(sheng)物(wu)表(biao)面,分泌(mi)甲(jia)殼酶(mei),分解甲(jia)殼作(zuo)為營養(yang)而長(chang)(chang)期存(cun)活,如(ru)愛(ai)(ai)爾托生(sheng)(sheng)物(wu)型(xing)弧菌(jun)(jun)被人工飼(si)養(yang)的(de)泥鰍、鱔(shan)魚(yu)吞食(shi)后(hou),可(ke)(ke)在(zai)其體內生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)繁殖,然(ran)后(hou)排入水(shui)中。
霍(huo)亂(luan)弧菌對(dui)熱、干(gan)燥、日光(guang)及一(yi)般消毒劑均很敏感(gan),經干(gan)燥2小(xiao)時或加熱55℃10分鐘即(ji)可死亡,煮(zhu)沸立即(ji)死亡;對(dui)酸(suan)(suan)敏感(gan),在(zai)正常胃酸(suan)(suan)中(zhong)僅能存(cun)活(huo)4分鐘,接觸1∶5000~1∶10000鹽酸(suan)(suan)或硫酸(suan)(suan)、1∶2000~1∶3000升汞或1∶500000高錳(meng)酸(suan)(suan)鉀(jia),數(shu)分鐘即(ji)被殺滅,在(zai)0.1%漂白(bai)粉中(zhong)10分鐘內即(ji)可死亡。氯化(hua)鈉(na)的(de)濃(nong)度高于4%或蔗糖濃(nong)度在(zai)5%以上的(de)食(shi)物、香料、醋及酒等,均不利(li)于霍(huo)亂(luan)弧菌的(de)生存(cun)。
正常胃酸可殺(sha)滅霍(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)菌,當(dang)胃酸分(fen)泌缺乏或(huo)低下,或(huo)入侵的(de)霍(huo)亂(luan)(luan)弧(hu)菌數量較(jiao)多,未被殺(sha)滅的(de)弧(hu)菌就(jiu)進入小腸,在(zai)堿性腸液內迅(xun)速繁(fan)殖(zhi),并通(tong)過(guo)粘液對(dui)細菌的(de)趨化吸引作(zuo)用、細菌鞭毛活動及弧(hu)菌粘蛋白溶解酶和粘附素等的(de)作(zuo)用,粘附于小腸粘膜(mo)的(de)上皮細胞(bao)表面,并在(zai)此大量繁(fan)殖(zhi)。
此菌產生強烈的外毒素,即霍亂腸毒素,由A亞單位和B亞單位組成。B亞單位與該處粘膜上皮細胞表面受體——神經節苷脂結合,A、B兩種亞單位解離,A亞單位穿過細胞膜進入細胞內,激活腺苷酸環化酶(AC),使細胞內三磷酸腺苷(ATP)轉化為環磷酸腺苷(cAMP),使細胞內環磷酸腺苷含量提高,促使一系列酶反應加速進行,導致(zhi)空腸(chang)(chang)到回腸(chang)(chang)部腺細(xi)(xi)胞分(fen)泌(mi)功(gong)能(neng)亢(kang)進,引(yin)(yin)起大(da)(da)量液體及(ji)血漿中的(de)(de)鈉、鉀、氯(lv)等離子(zi)進入腸(chang)(chang)腔,由(you)(you)于分(fen)泌(mi)功(gong)能(neng)超過(guo)腸(chang)(chang)道再吸收能(neng)力(li),從而(er)造成(cheng)嚴重的(de)(de)腹瀉及(ji)嘔吐(tu);由(you)(you)于膽(dan)汁分(fen)泌(mi)減少,且腸(chang)(chang)腔中有大(da)(da)量水(shui)、粘液及(ji)電解質(zhi)(zhi),故(gu)排(pai)瀉物呈白色“米泔水(shui)”樣;由(you)(you)于劇烈吐(tu)瀉,導致(zhi)脫水(shui)和電解質(zhi)(zhi)丟失,引(yin)(yin)起缺鉀、缺鈉及(ji)肌肉(rou)痙攣(luan);由(you)(you)于碳酸氫根(gen)離子(zi)丟失,酸性(xing)(xing)代(dai)(dai)謝物在體內蓄(xu)積,引(yin)(yin)起代(dai)(dai)謝性(xing)(xing)酸中毒(du);由(you)(you)于有效血容(rong)量急劇減少,血液濃縮,導致(zhi)尿量減少、血壓下(xia)降,甚(shen)至休克;由(you)(you)于腎缺血、缺氧,細(xi)(xi)胞內缺鉀,導致(zhi)腎小管上皮細(xi)(xi)胞變性(xing)(xing)、壞(huai)死(si),造成(cheng)急性(xing)(xing)腎功(gong)能(neng)衰竭。
主要病(bing)變(bian)均由嚴(yan)重脫水(shui)(shui)引(yin)起(qi),臨床可見指紋皺縮,皮下組織(zhi)及肌肉干癟。心(xin)、肝(gan)、脾等(deng)臟(zang)器均見縮小。內臟(zang)漿膜(mo)無光澤。腸(chang)腔(qiang)高(gao)度擴張、腸(chang)內充滿(man)泔水(shui)(shui)樣液體,腸(chang)粘膜(mo)松(song)弛,但(dan)粘膜(mo)上(shang)皮完整,無潰瘍。膽囊內充滿(man)粘稠膽汁(zhi)。腎小球及間質(zhi)的毛細管擴張,腎小管腫脹、變(bian)性及壞死。其他臟(zang)器也(ye)有出血、變(bian)性等(deng)變(bian)化。
必(bi)須貫徹預(yu)防為(wei)主的(de)方(fang)針,作好對外(wai)交往及入口的(de)檢疫(yi)(yi)工作,嚴防本菌傳入,此(ci)外(wai)應加(jia)強水、糞(fen)管理,注意飲食衛生。對病人要嚴格隔離,必(bi)要時實行疫(yi)(yi)區封(feng)鎖,以(yi)免疾病擴散蔓延。
人(ren)群的(de)菌(jun)苗(miao)預(yu)防接種(zhong)(zhong),可獲良(liang)好效果,現用加熱或(huo)化學藥品殺死的(de)古典型霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)菌(jun)苗(miao)皮下接種(zhong)(zhong),能降低發病率。這(zhe)種(zhong)(zhong)苗(miao)菌(jun)對EL-Tor型霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)弧菌(jun)感(gan)染也有(you)(you)保護作用,但持續(xu)時(shi)間短,僅3-6個月(yue)。目前(qian)有(you)(you)新型的(de)口服rBS/WC疫(yi)苗(miao)(重組B亞(ya)單位/霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)菌(jun)體(ti)疫(yi)苗(miao))可用于預(yu)防霍(huo)(huo)亂(luan)(luan),2000年WHO關(guan)于霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)疫(yi)苗(miao)的(de)意見(jian)書(shu)提出,“應考(kao)慮對有(you)(you)罹(li)患霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)危險性的(de)人(ren)群使用rBS/WC疫(yi)苗(miao)”。該疫(yi)苗(miao)對霍(huo)(huo)亂(luan)(luan)的(de)保護期(qi)為3年,國(guo)內有(you)(you)上海聯合賽(sai)爾(er)生物工程有(you)(you)限公司生產rBS/WC疫(yi)苗(miao)。
治療主(zhu)要為及時補充液體和電解質(zhi)及應用抗菌藥物如鏈霉(mei)(mei)素、氯霉(mei)(mei)素、強力(li)霉(mei)(mei)素、復(fu)方SMZ-TMP等。