美洲大赤魷(you)(DosidicusGigas)在食(shi)品(pin)加工過(guo)程中(zhong)的(de)軟骨廢(fei)棄物(wu)(wu)為(wei)原料,建立包括粉碎、脫水(shui)脫脂(zhi)、酶(mei)解(jie)、除蛋白、醇沉(chen)、離子(zi)交換、脫鹽(yan)等操作流程的(de)CS制(zhi)(zhi)備方法,制(zhi)(zhi)備得到(dao)新型(xing)CS。最終產品(pin)的(de)產率達到(dao)16±2%。用(yong)商品(pin)化(hua)的(de)硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)軟骨素(su)ABC酶(mei)、硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)皮膚素(su)酶(mei)、透明質酸(suan)(suan)酶(mei)(來自于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗室自有(you)產權的(de)rHCLase降解(jie)所(suo)(suo)得多糖,根據酶(mei)的(de)底物(wu)(wu)專一(yi)性(xing),確(que)認所(suo)(suo)制(zhi)(zhi)備的(de)多糖為(wei)CS；通過(guo)咔唑反應檢測樣品(pin)中(zhong)新型(xing)CS含(han)(han)量(liang)(liang),BCA蛋白定量(liang)(liang)法檢測樣品(pin)中(zhong)蛋白含(han)(han)量(liang)(liang)。結(jie)(jie)果提示(shi)：樣品(pin)中(zhong)新型(xing)CS含(han)(han)量(liang)(liang)達到(dao)97%以上,蛋白含(han)(han)量(liang)(liang)低于2%。2.新型(xing)CS多糖結(jie)(jie)構的(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)：參照(zhao)葡聚糖分(fen)(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)標準物(wu)(wu),經凝膠(jiao)過(guo)濾HPLC分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi),確(que)定所(suo)(suo)制(zhi)(zhi)備的(de)NER-CS多糖平(ping)均(jun)分(fen)(fen)(fen)子(zi)量(liang)(liang)約為(wei)623.2 kDa。再(zai)通過(guo)硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)軟骨素(su)ABC酶(mei)完全降解(jie),結(jie)(jie)合HPLC分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)二(er)糖組成,發現NER-CS主要含(han)(han)有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其(qi)(qi)中(zhong)E-unit含(han)(han)量(liang)(liang)最高可達44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)(han)量(liang)(liang)分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)化(hua)度(du)為(wei)1.37。是一(yi)種新型(xing)高硫(liu)(liu)酸(suan)(suan)化(hua)CS。3NER-CS生(sheng)物(wu)(wu)活(huo)(huo)性(xing)的(de)初步(bu)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)：1)用(yong)Aglyco試劑盒(he)檢測NER-CS的(de)抗(kang)(kang)凝血活(huo)(huo)性(xing),結(jie)(jie)果顯示(shi)：NER-CS抗(kang)(kang)FⅡa和(he)抗(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)20±2U/mg和(he)0.9±0.2U/mg,是陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)肝素(su)抗(kang)(kang)FⅡa活(huo)(huo)性(xing)的(de)10%左(zuo)右,抗(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)的(de)4%左(zuo)右；2)利用(yong)乳腺癌4T1細胞(bao)試驗轉(zhuan)移模(mo)型(xing),分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS在小鼠(shu)體(ti)內抗(kang)(kang)腫瘤轉(zhuan)移活(huo)(huo)性(xing),結(jie)(jie)果顯示(shi)：50、100和(he)200μgNER-CS的(de)抑瘤率分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)100μg肝素(su)的(de)抑瘤率為(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親和(he)素(su)修飾的(de)CM5芯片固(gu)定生(sheng)物(wu)(wu)素(su)化(hua)NER-CS,分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)NER-CS與(yu)五種生(sheng)長因子(zi)、三種選擇(ze)素(su)的(de)相互作用(yong)活(huo)(huo)性(xing),結(jie)(jie)果顯示(shi)NER-CS與(yu)生(sheng)長因子(zi)HGF、bFGF相互作用(yong)活(huo)(huo)性(xing)較高,親和(he)力常數分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖的(de)制(zhi)(zhi)備及其(qi)(qi)抗(kang)(kang)腫瘤活(huo)(huo)性(xing)分(fen)(fen)(fen)析(xi)(xi)。
