美洲大赤魷(DosidicusGigas)在食(shi)品(pin)(pin)(pin)加工過(guo)程中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)軟骨廢棄物為(wei)(wei)原料,建立包括粉(fen)碎、脫(tuo)水脫(tuo)脂、酶(mei)(mei)解(jie)(jie)、除(chu)蛋(dan)白(bai)、醇沉、離子交(jiao)換、脫(tuo)鹽等操作流程的(de)(de)(de)CS制備(bei)方法,制備(bei)得到新(xin)型CS。最終產品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)產率達到16±2%。用(yong)商(shang)品(pin)(pin)(pin)化的(de)(de)(de)硫(liu)酸(suan)(suan)軟骨素ABC酶(mei)(mei)、硫(liu)酸(suan)(suan)皮膚素酶(mei)(mei)、透明質酸(suan)(suan)酶(mei)(mei)(來(lai)自(zi)(zi)于(yu)StreptomycesHyalurolyticus)、以(yi)及實驗(yan)室(shi)自(zi)(zi)有(you)產權(quan)的(de)(de)(de)rHCLase降解(jie)(jie)所(suo)得多(duo)(duo)糖(tang),根據酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)底(di)物專一性(xing)(xing),確(que)認所(suo)制備(bei)的(de)(de)(de)多(duo)(duo)糖(tang)為(wei)(wei)CS；通(tong)過(guo)咔唑反應檢(jian)測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)中(zhong)(zhong)新(xin)型CS含(han)量(liang),BCA蛋(dan)白(bai)定量(liang)法檢(jian)測樣(yang)品(pin)(pin)(pin)中(zhong)(zhong)蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)。結(jie)(jie)果提(ti)示：樣(yang)品(pin)(pin)(pin)中(zhong)(zhong)新(xin)型CS含(han)量(liang)達到97%以(yi)上,蛋(dan)白(bai)含(han)量(liang)低于(yu)2%。2.新(xin)型CS多(duo)(duo)糖(tang)結(jie)(jie)構的(de)(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)析(xi)：參照(zhao)(zhao)葡聚糖(tang)分(fen)(fen)子量(liang)標準物,經凝膠過(guo)濾(lv)HPLC分(fen)(fen)析(xi),確(que)定所(suo)制備(bei)的(de)(de)(de)NER-CS多(duo)(duo)糖(tang)平均(jun)分(fen)(fen)子量(liang)約為(wei)(wei)623.2 kDa。再(zai)通(tong)過(guo)硫(liu)酸(suan)(suan)軟骨素ABC酶(mei)(mei)完全降解(jie)(jie),結(jie)(jie)合(he)HPLC分(fen)(fen)析(xi)二(er)糖(tang)組成,發現NER-CS主要含(han)有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)(zhong)E-unit含(han)量(liang)最高(gao)可達44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)量(liang)分(fen)(fen)別為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)酸(suan)(suan)化度為(wei)(wei)1.37。是一種(zhong)新(xin)型高(gao)硫(liu)酸(suan)(suan)化CS。3NER-CS生物活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)析(xi)：1)用(yong)Aglyco試劑盒檢(jian)測NER-CS的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)凝血活(huo)(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果顯示：NER-CS抗(kang)(kang)(kang)FⅡa和(he)(he)抗(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)別為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)(he)0.9±0.2U/mg,是陽性(xing)(xing)對照(zhao)(zhao)肝(gan)素抗(kang)(kang)(kang)FⅡa活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)10%左(zuo)右,抗(kang)(kang)(kang)FXa活(huo)(huo)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)4%左(zuo)右；2)利(li)用(yong)乳(ru)腺癌4T1細(xi)胞(bao)試驗(yan)轉(zhuan)移(yi)模型,分(fen)(fen)析(xi)NER-CS在小鼠(shu)體內抗(kang)(kang)(kang)腫瘤轉(zhuan)移(yi)活(huo)(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果顯示：50、100和(he)(he)200μgNER-CS的(de)(de)(de)抑(yi)瘤率分(fen)(fen)別為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽性(xing)(xing)對照(zhao)(zhao)100μg肝(gan)素的(de)(de)(de)抑(yi)瘤率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)親(qin)和(he)(he)素修(xiu)飾(shi)的(de)(de)(de)CM5芯片固定生物素化NER-CS,分(fen)(fen)析(xi)NER-CS與五種(zhong)生長因(yin)子、三種(zhong)選擇素的(de)(de)(de)相(xiang)互作用(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)果顯示NER-CS與生長因(yin)子HGF、bFGF相(xiang)互作用(yong)活(huo)(huo)性(xing)(xing)較高(gao),親(qin)和(he)(he)力常(chang)數分(fen)(fen)別為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡(gua)糖(tang)的(de)(de)(de)制備(bei)及其抗(kang)(kang)(kang)腫瘤活(huo)(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)析(xi)。
