美洲大赤魷(DosidicusGigas)在(zai)食(shi)品(pin)加工(gong)過(guo)程中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)軟骨(gu)廢棄(qi)物(wu)(wu)(wu)為(wei)(wei)原料,建立包括粉(fen)碎、脫水脫脂、酶(mei)解(jie)、除蛋(dan)白(bai)、醇沉(chen)、離(li)子(zi)交換、脫鹽等(deng)操作流程的(de)(de)(de)CS制(zhi)備方法(fa),制(zhi)備得到新(xin)型(xing)(xing)CS。最(zui)終產(chan)品(pin)的(de)(de)(de)產(chan)率達(da)到16±2%。用商品(pin)化的(de)(de)(de)硫(liu)酸軟骨(gu)素(su)(su)ABC酶(mei)、硫(liu)酸皮膚素(su)(su)酶(mei)、透明質(zhi)酸酶(mei)(來(lai)自于StreptomycesHyalurolyticus)、以及實驗室自有產(chan)權的(de)(de)(de)rHCLase降(jiang)解(jie)所(suo)得多糖(tang),根據(ju)酶(mei)的(de)(de)(de)底物(wu)(wu)(wu)專一性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing),確(que)認所(suo)制(zhi)備的(de)(de)(de)多糖(tang)為(wei)(wei)CS；通過(guo)咔(ka)唑反應檢(jian)測樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)型(xing)(xing)CS含(han)(han)(han)量,BCA蛋(dan)白(bai)定量法(fa)檢(jian)測樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)蛋(dan)白(bai)含(han)(han)(han)量。結(jie)果提示(shi)：樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)型(xing)(xing)CS含(han)(han)(han)量達(da)到97%以上,蛋(dan)白(bai)含(han)(han)(han)量低于2%。2.新(xin)型(xing)(xing)CS多糖(tang)結(jie)構(gou)的(de)(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi)：參照葡聚(ju)糖(tang)分(fen)(fen)子(zi)量標準物(wu)(wu)(wu),經(jing)凝膠過(guo)濾HPLC分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi),確(que)定所(suo)制(zhi)備的(de)(de)(de)NER-CS多糖(tang)平均分(fen)(fen)子(zi)量約為(wei)(wei)623.2 kDa。再通過(guo)硫(liu)酸軟骨(gu)素(su)(su)ABC酶(mei)完全降(jiang)解(jie),結(jie)合HPLC分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi)二糖(tang)組成,發現NER-CS主要含(han)(han)(han)有GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)(zhong)(zhong)E-unit含(han)(han)(han)量最(zui)高可達(da)44.5%,同時(shi)GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)(han)(han)量分(fen)(fen)別為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)酸化度為(wei)(wei)1.37。是一種(zhong)新(xin)型(xing)(xing)高硫(liu)酸化CS。3NER-CS生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)初(chu)步分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi)：1)用Aglyco試劑盒(he)檢(jian)測NER-CS的(de)(de)(de)抗凝血活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing),結(jie)果顯示(shi)：NER-CS抗FⅡa和(he)抗FXa活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)分(fen)(fen)別為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)0.9±0.2U/mg,是陽性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)對(dui)照肝素(su)(su)抗FⅡa活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)10%左右,抗FXa活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)4%左右；2)利用乳腺癌4T1細胞試驗轉移(yi)模型(xing)(xing),分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi)NER-CS在(zai)小鼠體內抗腫瘤轉移(yi)活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing),結(jie)果顯示(shi)：50、100和(he)200μgNER-CS的(de)(de)(de)抑(yi)瘤率分(fen)(fen)別為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同時(shi)陽性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)對(dui)照100μg肝素(su)(su)的(de)(de)(de)抑(yi)瘤率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用親(qin)和(he)素(su)(su)修(xiu)飾的(de)(de)(de)CM5芯片固(gu)定生(sheng)物(wu)(wu)(wu)素(su)(su)化NER-CS,分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi)NER-CS與五種(zhong)生(sheng)長(chang)因子(zi)、三(san)種(zhong)選擇素(su)(su)的(de)(de)(de)相互(hu)作用活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing),結(jie)果顯示(shi)NER-CS與生(sheng)長(chang)因子(zi)HGF、bFGF相互(hu)作用活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)較高,親(qin)和(he)力常數(shu)分(fen)(fen)別為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡(gua)糖(tang)的(de)(de)(de)制(zhi)備及其抗腫瘤活(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)分(fen)(fen)析(xi)(xi)(xi)(xi)。
