美洲大赤魷(DosidicusGigas)在(zai)食品加工過程中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)軟骨(gu)廢棄物(wu)(wu)(wu)為(wei)(wei)原料,建立(li)包(bao)括粉碎、脫水脫脂、酶(mei)(mei)(mei)解(jie)(jie)、除(chu)蛋白、醇沉、離子(zi)(zi)交(jiao)換、脫鹽等操作流(liu)程的(de)CS制(zhi)備(bei)方(fang)法(fa),制(zhi)備(bei)得到新型CS。最終產(chan)(chan)品的(de)產(chan)(chan)率達到16±2%。用(yong)(yong)(yong)商品化的(de)硫(liu)(liu)酸(suan)軟骨(gu)素(su)ABC酶(mei)(mei)(mei)、硫(liu)(liu)酸(suan)皮膚素(su)酶(mei)(mei)(mei)、透(tou)明質酸(suan)酶(mei)(mei)(mei)(來(lai)自于(yu)StreptomycesHyalurolyticus)、以(yi)及實驗室自有(you)產(chan)(chan)權的(de)rHCLase降(jiang)解(jie)(jie)所(suo)得多(duo)糖(tang)(tang),根(gen)據酶(mei)(mei)(mei)的(de)底物(wu)(wu)(wu)專一性(xing)(xing),確(que)認所(suo)制(zhi)備(bei)的(de)多(duo)糖(tang)(tang)為(wei)(wei)CS；通(tong)過咔(ka)唑反應檢(jian)測樣(yang)(yang)品中(zhong)(zhong)(zhong)新型CS含(han)量(liang)(liang)(liang),BCA蛋白定(ding)量(liang)(liang)(liang)法(fa)檢(jian)測樣(yang)(yang)品中(zhong)(zhong)(zhong)蛋白含(han)量(liang)(liang)(liang)。結(jie)(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)提示：樣(yang)(yang)品中(zhong)(zhong)(zhong)新型CS含(han)量(liang)(liang)(liang)達到97%以(yi)上(shang),蛋白含(han)量(liang)(liang)(liang)低于(yu)2%。2.新型CS多(duo)糖(tang)(tang)結(jie)(jie)(jie)(jie)構的(de)初(chu)步分(fen)(fen)(fen)析：參(can)照葡聚糖(tang)(tang)分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)量(liang)(liang)(liang)標準物(wu)(wu)(wu),經凝膠過濾HPLC分(fen)(fen)(fen)析,確(que)定(ding)所(suo)制(zhi)備(bei)的(de)NER-CS多(duo)糖(tang)(tang)平(ping)均分(fen)(fen)(fen)子(zi)(zi)量(liang)(liang)(liang)約為(wei)(wei)623.2 kDa。再通(tong)過硫(liu)(liu)酸(suan)軟骨(gu)素(su)ABC酶(mei)(mei)(mei)完(wan)全降(jiang)解(jie)(jie),結(jie)(jie)(jie)(jie)合HPLC分(fen)(fen)(fen)析二糖(tang)(tang)組成,發現NER-CS主要(yao)含(han)有(you)GlcAβ1-3GalNAcGlcAβ1-3GalNAc(4S)、GlcAβ1-3GalNAc(6S)、E-unit,其中(zhong)(zhong)(zhong)E-unit含(han)量(liang)(liang)(liang)最高(gao)(gao)可達44.5%,同(tong)時GlcAp1-3GalNAc、GlcAβ1-3GalNAc(4S)]、GlcAβ1-3GalNAc(6S)]含(han)量(liang)(liang)(liang)分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)7.1%、12.6%、35.8%,總硫(liu)(liu)酸(suan)化度為(wei)(wei)1.37。是(shi)一種新型高(gao)(gao)硫(liu)(liu)酸(suan)化CS。3NER-CS生(sheng)物(wu)(wu)(wu)活(huo)性(xing)(xing)的(de)初(chu)步分(fen)(fen)(fen)析：1)用(yong)(yong)(yong)Aglyco試(shi)劑盒(he)檢(jian)測NER-CS的(de)抗(kang)凝血活(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)顯示：NER-CS抗(kang)FⅡa和(he)(he)抗(kang)FXa活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)20±2U/mg和(he)(he)0.9±0.2U/mg,是(shi)陽(yang)(yang)性(xing)(xing)對照肝素(su)抗(kang)FⅡa活(huo)性(xing)(xing)的(de)10%左右,抗(kang)FXa活(huo)性(xing)(xing)的(de)4%左右；2)利用(yong)(yong)(yong)乳腺癌4T1細胞試(shi)驗轉移模型,分(fen)(fen)(fen)析NER-CS在(zai)小鼠體內抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)(liu)轉移活(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)顯示：50、100和(he)(he)200μgNER-CS的(de)抑瘤(liu)(liu)率分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)54.3±2.5%、75.1±3.5%、42.9±2.1%,同(tong)時陽(yang)(yang)性(xing)(xing)對照100μg肝素(su)的(de)抑瘤(liu)(liu)率為(wei)(wei)74.6±1.8%；3)用(yong)(yong)(yong)親和(he)(he)素(su)修飾的(de)CM5芯(xin)片固定(ding)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)素(su)化NER-CS,分(fen)(fen)(fen)析NER-CS與五種生(sheng)長因子(zi)(zi)、三種選(xuan)擇素(su)的(de)相互作用(yong)(yong)(yong)活(huo)性(xing)(xing),結(jie)(jie)(jie)(jie)果(guo)(guo)顯示NER-CS與生(sheng)長因子(zi)(zi)HGF、bFGF相互作用(yong)(yong)(yong)活(huo)性(xing)(xing)較高(gao)(gao),親和(he)(he)力常數分(fen)(fen)(fen)別(bie)為(wei)(wei)(3.47±1.73)x10-6、(5.39±2.92)x10-8。4.NER-CS寡糖(tang)(tang)的(de)制(zhi)備(bei)及其抗(kang)腫(zhong)瘤(liu)(liu)活(huo)性(xing)(xing)分(fen)(fen)(fen)析。
