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電子顯微鏡的組成部分 電子顯微鏡樣本的預處理方法

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摘要:電子顯微鏡,簡稱電鏡,經過五十多年的發展已成為現代科學技術中不可缺少的重要工具。電子顯微鏡由鏡筒、真空裝置和電源柜三部分組成。我們知道電子顯微鏡對樣本的要求比較高,因此在觀察生物樣本的時候必須進行預處理。一般的處理過程包括:固定、冷固定、脫干、墊入、分割、染色等。接下來就一起來了解下電子顯微鏡的知識吧。

一、電子顯微鏡的組成

電子顯微鏡(jing)由鏡(jing)筒、真空(kong)裝置和電源柜三部分組(zu)成。

1、鏡筒

主要有電(dian)子源(yuan)、電(dian)子透鏡(jing)、樣品架、熒光屏和探測器等部(bu)(bu)件(jian),這(zhe)些(xie)部(bu)(bu)件(jian)通(tong)常是自上而下地裝(zhuang)配成一個柱體。

電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)用(yong)(yong)來聚(ju)(ju)焦(jiao)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi),是電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)鏡(jing)(jing)(jing)筒中(zhong)最重要的(de)(de)(de)部件。一(yi)般使(shi)(shi)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)是磁(ci)(ci)(ci)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing),有(you)(you)時也有(you)(you)使(shi)(shi)用(yong)(yong)靜(jing)電(dian)(dian)(dian)(dian)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)。它(ta)用(yong)(yong)一(yi)個(ge)對稱于鏡(jing)(jing)(jing)筒軸線的(de)(de)(de)空間電(dian)(dian)(dian)(dian)場或磁(ci)(ci)(ci)場使(shi)(shi)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)軌(gui)跡(ji)向(xiang)軸線彎曲形(xing)成聚(ju)(ju)焦(jiao),其作(zuo)用(yong)(yong)與光學(xue)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)中(zhong)的(de)(de)(de)光學(xue)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(凸透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing))使(shi)(shi)光束聚(ju)(ju)焦(jiao)的(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)是一(yi)樣的(de)(de)(de),所以稱為電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)。光學(xue)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)焦(jiao)點(dian)是固定的(de)(de)(de),而電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)焦(jiao)點(dian)可以被調(diao)節(jie),因(yin)此(ci)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)不像光學(xue)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)那樣有(you)(you)可以移動的(de)(de)(de)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)系統。現代電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)顯微(wei)鏡(jing)(jing)(jing)大(da)多采用(yong)(yong)電(dian)(dian)(dian)(dian)磁(ci)(ci)(ci)透(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing),由(you)很穩定的(de)(de)(de)直流勵磁(ci)(ci)(ci)電(dian)(dian)(dian)(dian)流通過(guo)帶極靴的(de)(de)(de)線圈產生的(de)(de)(de)強磁(ci)(ci)(ci)場使(shi)(shi)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)聚(ju)(ju)焦(jiao)。電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)源是一(yi)個(ge)釋放自由(you)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)陰極,柵極,一(yi)個(ge)環狀加(jia)速(su)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)陽(yang)極構成的(de)(de)(de)。陰極和陽(yang)極之間的(de)(de)(de)電(dian)(dian)(dian)(dian)壓差必(bi)須非常高(gao),一(yi)般在數千伏(fu)到(dao)3百萬伏(fu)特之間。它(ta)能(neng)發(fa)射并形(xing)成速(su)度(du)均勻的(de)(de)(de)電(dian)(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)束,所以加(jia)速(su)電(dian)(dian)(dian)(dian)壓的(de)(de)(de)穩定度(du)要求(qiu)不低于萬分之一(yi)。

樣(yang)品(pin)(pin)可以穩定地放(fang)在樣(yang)品(pin)(pin)架上(shang),此外往(wang)往(wang)還有可以用來(lai)改變樣(yang)品(pin)(pin)(如移動、轉動、加(jia)熱、降(jiang)溫、拉長等(deng))的裝置(zhi)。

探(tan)測(ce)器用來收(shou)集電子的信(xin)號(hao)或次(ci)級信(xin)號(hao)。

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2、真空裝置

用以(yi)保(bao)障顯微(wei)鏡內的真(zhen)(zhen)空狀(zhuang)態,這樣電子在其(qi)路徑(jing)上不會被(bei)吸(xi)收(shou)或(huo)偏向(xiang),由機械真(zhen)(zhen)空泵、擴散泵和真(zhen)(zhen)空閥門等(deng)構成,并(bing)通過抽(chou)氣管(guan)道與(yu)鏡筒相聯(lian)接。

3、電源柜

由高壓發生器、勵磁電流穩流器和各種調節控制單元組成。

二、電子顯微鏡如何進行樣本處理

1、固(gu)定:為(wei)了盡(jin)量(liang)保存樣(yang)本(ben)(ben)的原樣(yang)使用戊二醛來(lai)硬化樣(yang)本(ben)(ben)和使用鋨酸(suan)來(lai)染色脂肪。

2、冷(leng)固定:將樣(yang)本放在液(ye)態的(de)乙烷中速凍,這樣(yang)水不會結晶(jing),而(er)形成非晶(jing)體的(de)冰。這樣(yang)保存的(de)樣(yang)品損壞比較小,但圖像的(de)對比度非常低。

3、脫(tuo)干(gan):使用乙醇和丙酮來取(qu)代水。

4、墊入:樣本被(bei)墊入后可以分割。

5、分割(ge):將樣本(ben)使用金剛石(shi)刃切成薄片(pian)。

6、染色:重的(de)原子(zi)如(ru)鉛或鈾比輕的(de)原子(zi)散(san)射(she)電子(zi)的(de)能力(li)高,因此可被用來提(ti)高對比度。

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