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電子顯微鏡的組成部分 電子顯微鏡樣本的預處理方法

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摘要:電子顯微鏡,簡稱電鏡,經過五十多年的發展已成為現代科學技術中不可缺少的重要工具。電子顯微鏡由鏡筒、真空裝置和電源柜三部分組成。我們知道電子顯微鏡對樣本的要求比較高,因此在觀察生物樣本的時候必須進行預處理。一般的處理過程包括:固定、冷固定、脫干、墊入、分割、染色等。接下來就一起來了解下電子顯微鏡的知識吧。

一、電子顯微鏡的組成

電(dian)子顯微(wei)鏡由鏡筒、真(zhen)空(kong)裝置和(he)電(dian)源柜三(san)部(bu)分(fen)組成。

1、鏡筒

主要(yao)有電(dian)子(zi)源、電(dian)子(zi)透鏡、樣品架(jia)、熒光屏和探測器等部件,這(zhe)些部件通常是(shi)自上而下地裝配成一個柱體。

電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)用(yong)來聚焦(jiao)電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi),是(shi)電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)顯微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)筒中(zhong)最(zui)重要(yao)的(de)(de)部件。一(yi)(yi)般(ban)使用(yong)的(de)(de)是(shi)磁(ci)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing),有(you)時也有(you)使用(yong)靜電(dian)(dian)(dian)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)。它用(yong)一(yi)(yi)個(ge)(ge)對稱于鏡(jing)(jing)(jing)(jing)筒軸線的(de)(de)空間(jian)電(dian)(dian)(dian)場或磁(ci)場使電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)軌(gui)跡向軸線彎曲形成(cheng)聚焦(jiao),其作用(yong)與光學(xue)顯微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)中(zhong)的(de)(de)光學(xue)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)(凸透鏡(jing)(jing)(jing)(jing))使光束聚焦(jiao)的(de)(de)作用(yong)是(shi)一(yi)(yi)樣(yang)的(de)(de),所以(yi)稱為電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)。光學(xue)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)焦(jiao)點是(shi)固(gu)定(ding)的(de)(de),而(er)電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)的(de)(de)焦(jiao)點可(ke)以(yi)被調節,因(yin)此(ci)電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)顯微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)不像光學(xue)顯微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)那樣(yang)有(you)可(ke)以(yi)移動的(de)(de)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing)系統。現(xian)代電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)顯微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)(jing)大(da)多采用(yong)電(dian)(dian)(dian)磁(ci)透鏡(jing)(jing)(jing)(jing),由(you)很穩定(ding)的(de)(de)直流(liu)勵磁(ci)電(dian)(dian)(dian)流(liu)通過(guo)帶極靴的(de)(de)線圈產生的(de)(de)強磁(ci)場使電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)聚焦(jiao)。電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)源是(shi)一(yi)(yi)個(ge)(ge)釋放自由(you)電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)陰極,柵極,一(yi)(yi)個(ge)(ge)環狀加(jia)速電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)的(de)(de)陽極構成(cheng)的(de)(de)。陰極和陽極之間(jian)的(de)(de)電(dian)(dian)(dian)壓差(cha)必須非常高(gao),一(yi)(yi)般(ban)在數(shu)千伏到3百(bai)萬(wan)伏特之間(jian)。它能發(fa)射并形成(cheng)速度均(jun)勻的(de)(de)電(dian)(dian)(dian)子(zi)(zi)(zi)束,所以(yi)加(jia)速電(dian)(dian)(dian)壓的(de)(de)穩定(ding)度要(yao)求不低于萬(wan)分之一(yi)(yi)。

樣(yang)(yang)(yang)品(pin)可(ke)以(yi)穩(wen)定地(di)放在樣(yang)(yang)(yang)品(pin)架(jia)上,此外往往還(huan)有可(ke)以(yi)用來改(gai)變樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(如移(yi)動(dong)、轉動(dong)、加(jia)熱、降溫、拉長等)的裝置(zhi)。

探測器用來收集電(dian)子的信號或次級信號。

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2、真空裝置

用(yong)以(yi)保障顯微鏡內(nei)的(de)真(zhen)(zhen)空狀(zhuang)態,這樣(yang)電子(zi)在其路徑(jing)上不會被(bei)吸(xi)收或偏向,由機械真(zhen)(zhen)空泵(beng)、擴散泵(beng)和真(zhen)(zhen)空閥門等(deng)構成,并(bing)通過抽氣管道與鏡筒相聯接。

3、電源柜

由高壓發生器、勵磁電流穩流器和各種調節控制單元組成。

二、電子顯微鏡如何進行樣本處理

1、固(gu)定(ding):為了(le)盡量(liang)保存樣(yang)本的原樣(yang)使用戊二醛來硬(ying)化樣(yang)本和使用鋨酸來染色脂肪。

2、冷固定(ding):將樣(yang)本放(fang)在液態的(de)乙烷中速凍,這樣(yang)水不會(hui)結晶,而形成非晶體的(de)冰。這樣(yang)保存(cun)的(de)樣(yang)品(pin)損壞比(bi)較小,但圖像(xiang)的(de)對(dui)比(bi)度非常低。

3、脫干:使用乙醇和丙(bing)酮來(lai)取代水。

4、墊(dian)入:樣本被墊(dian)入后(hou)可以分割。

5、分割:將樣本使用金(jin)剛(gang)石(shi)刃切(qie)成薄(bo)片(pian)。

6、染色:重的原(yuan)子(zi)(zi)如鉛或鈾比輕的原(yuan)子(zi)(zi)散射電(dian)子(zi)(zi)的能力高,因此可被(bei)用來(lai)提高對比度。

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