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電子顯微鏡的組成部分 電子顯微鏡樣本的預處理方法

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摘要:電子顯微鏡,簡稱電鏡,經過五十多年的發展已成為現代科學技術中不可缺少的重要工具。電子顯微鏡由鏡筒、真空裝置和電源柜三部分組成。我們知道電子顯微鏡對樣本的要求比較高,因此在觀察生物樣本的時候必須進行預處理。一般的處理過程包括:固定、冷固定、脫干、墊入、分割、染色等。接下來就一起來了解下電子顯微鏡的知識吧。

一、電子顯微鏡的組成

電子顯(xian)微鏡(jing)由鏡(jing)筒、真空(kong)裝置和電源柜三(san)部分組成(cheng)。

1、鏡筒

主要有電(dian)子(zi)源、電(dian)子(zi)透鏡(jing)、樣品架、熒光屏和探(tan)測器等部件,這些(xie)部件通(tong)常(chang)是(shi)自上(shang)而下(xia)地裝配成(cheng)一個柱體(ti)。

電子(zi)(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)用(yong)(yong)來(lai)聚焦(jiao)電子(zi)(zi)(zi)(zi),是(shi)電子(zi)(zi)(zi)(zi)顯(xian)(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)鏡(jing)(jing)(jing)筒(tong)中最重要的(de)(de)(de)(de)部件。一(yi)般(ban)使(shi)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)是(shi)磁(ci)(ci)透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing),有(you)(you)時也有(you)(you)使(shi)用(yong)(yong)靜(jing)電透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)。它用(yong)(yong)一(yi)個對(dui)稱于鏡(jing)(jing)(jing)筒(tong)軸(zhou)線的(de)(de)(de)(de)空間電場(chang)(chang)或磁(ci)(ci)場(chang)(chang)使(shi)電子(zi)(zi)(zi)(zi)軌跡向軸(zhou)線彎(wan)曲形(xing)成聚焦(jiao),其作(zuo)(zuo)用(yong)(yong)與光(guang)學顯(xian)(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)中的(de)(de)(de)(de)光(guang)學透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)(凸透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing))使(shi)光(guang)束(shu)(shu)聚焦(jiao)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)(zuo)用(yong)(yong)是(shi)一(yi)樣(yang)的(de)(de)(de)(de),所以(yi)稱為電子(zi)(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)。光(guang)學透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)焦(jiao)點(dian)是(shi)固定的(de)(de)(de)(de),而(er)電子(zi)(zi)(zi)(zi)透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)的(de)(de)(de)(de)焦(jiao)點(dian)可(ke)以(yi)被(bei)調(diao)節,因(yin)此電子(zi)(zi)(zi)(zi)顯(xian)(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)不(bu)像(xiang)光(guang)學顯(xian)(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)那樣(yang)有(you)(you)可(ke)以(yi)移動(dong)的(de)(de)(de)(de)透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing)系統。現(xian)代電子(zi)(zi)(zi)(zi)顯(xian)(xian)(xian)微(wei)(wei)鏡(jing)(jing)(jing)大多(duo)采用(yong)(yong)電磁(ci)(ci)透(tou)(tou)(tou)(tou)(tou)鏡(jing)(jing)(jing),由很穩(wen)定的(de)(de)(de)(de)直流勵磁(ci)(ci)電流通過帶極(ji)靴的(de)(de)(de)(de)線圈產生的(de)(de)(de)(de)強磁(ci)(ci)場(chang)(chang)使(shi)電子(zi)(zi)(zi)(zi)聚焦(jiao)。電子(zi)(zi)(zi)(zi)源是(shi)一(yi)個釋(shi)放自由電子(zi)(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)陰極(ji),柵極(ji),一(yi)個環狀加速電子(zi)(zi)(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)陽極(ji)構(gou)成的(de)(de)(de)(de)。陰極(ji)和陽極(ji)之間的(de)(de)(de)(de)電壓差(cha)必須非常高,一(yi)般(ban)在數千伏到3百萬伏特之間。它能(neng)發射并形(xing)成速度均勻的(de)(de)(de)(de)電子(zi)(zi)(zi)(zi)束(shu)(shu),所以(yi)加速電壓的(de)(de)(de)(de)穩(wen)定度要求(qiu)不(bu)低(di)于萬分之一(yi)。

樣品(pin)可以(yi)穩(wen)定地(di)放在樣品(pin)架(jia)上,此(ci)外往往還有(you)可以(yi)用(yong)來(lai)改變樣品(pin)(如移動、轉動、加熱、降溫(wen)、拉長等)的裝置(zhi)。

探(tan)測器用(yong)來收(shou)集電子的(de)信號(hao)或次級信號(hao)。

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2、真空裝置

用(yong)以保障顯(xian)微鏡內的真(zhen)空狀態,這樣電子在其路徑(jing)上(shang)不會(hui)被吸(xi)收或偏向,由機械真(zhen)空泵(beng)、擴(kuo)散泵(beng)和真(zhen)空閥門等(deng)構成,并通過抽氣管道與鏡筒相(xiang)聯(lian)接。

3、電源柜

由高壓發生器、勵磁電流穩流器和各種調節控制單元組成。

二、電子顯微鏡如何進行樣本處理

1、固定:為了盡量保存樣本(ben)的原樣使(shi)用戊(wu)二醛來硬(ying)化樣本(ben)和使(shi)用鋨(e)酸來染色脂肪。

2、冷固定:將(jiang)樣本(ben)放在液(ye)態的乙烷中速凍,這樣水不會結晶(jing),而形成非晶(jing)體(ti)的冰。這樣保(bao)存的樣品損壞比較小,但(dan)圖像的對比度(du)非常低。

3、脫干(gan):使用乙醇和丙(bing)酮來取代水。

4、墊(dian)入:樣本被墊(dian)入后可以分割。

5、分割(ge):將(jiang)樣本(ben)使用金剛(gang)石刃切成薄(bo)片(pian)。

6、染(ran)色:重的原子如鉛或鈾比(bi)輕的原子散射電子的能力高(gao),因此可被(bei)用來提高(gao)對(dui)比(bi)度(du)。

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