一、免疫診斷原理有哪幾種
免(mian)(mian)疫診斷(duan)是應(ying)用免(mian)(mian)疫學的理(li)論、技術和(he)方法(fa)診斷(duan)各種疾(ji)病和(he)測定免(mian)(mian)疫狀態的診斷(duan)方法(fa),目(mu)前免(mian)(mian)疫診斷(duan)的平(ping)臺和(he)方法(fa)有(you)多種多樣,但是都(dou)基于(yu)相(xiang)同或相(xiang)似的原理(li),主要有(you)五大基本原理(li):
1、雙抗體夾心
(1)原(yuan)(yuan)(yuan)理:雙(shuang)抗(kang)(kang)體夾(jia)心法是(shi)檢測抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)最常用(yong)的方法,雙(shuang)抗(kang)(kang)體夾(jia)心法適用(yong)于(yu)測定擁(yong)有至少兩個表位(wei)(wei)的大分子抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)。不適用(yong)于(yu)測定半抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)及小分子單價抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan),不能形成兩位(wei)(wei)點夾(jia)心。
(2)應用場(chang)景(jing):絕大多(duo)數(shu)檢測(ce)(ce)蛋白(bai)都可以使用雙抗(kang)體(ti)夾心法。有些抗(kang)體(ti)檢測(ce)(ce)項目(mu),如(ru)總IgE檢測(ce)(ce)。
(3)注(zhu)意事(shi)宜:在一步法,待測抗(kang)原與標記(ji)抗(kang)體一起加入反(fan)應中,當(dang)標本中受檢(jian)抗(kang)原的含量很高(gao)時,過量抗(kang)原會(hui)分(fen)別(bie)和固相包(bao)被(bei)抗(kang)體及標記(ji)抗(kang)體結合,不會(hui)形成(cheng)“夾心復合物”就(jiu)出現鉤狀(zhuang)效應,導(dao)致結果(guo)偏低或者甚(shen)至可(ke)出現假陰性結果(guo)。
2、雙抗原夾心
(1)原(yuan)理:雙(shuang)抗(kang)原(yuan)夾(jia)心法(fa)的反應模式與雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心法(fa)類似。用(yong)特(te)異(yi)性(xing)抗(kang)原(yuan)進(jin)行包被(bei)和(he)標記。有研究表明,雙(shuang)抗(kang)原(yuan)夾(jia)心法(fa)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)的靈敏度和(he)準確性(xing)要抗(kang)體(ti)檢(jian)測(ce)使用(yong)的間接(jie)法(fa)(檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)更為(wei)常用(yong)的一種方法(fa))。
(2)應(ying)用場景:理論上,檢(jian)測抗(kang)體的項目均(jun)可使(shi)用,如乙肝表(biao)面蛋白抗(kang)體檢(jian)測。待檢(jian)抗(kang)體IgG的兩(liang)個Fab需要分別同(tong)固相(xiang)包被抗(kang)原(yuan)和標記抗(kang)原(yuan)同(tong)時結合。
(3)注意事宜:抗(kang)原標(biao)記(ji)(ji)過程可(ke)能(neng)導致蛋白構象變(bian)化(hua),需要尋找(zhao)最適合的標(biao)記(ji)(ji)物和標(biao)記(ji)(ji)方法。
3、間接法
(1)原理:間(jian)接法(fa)是檢(jian)測抗體常用的(de)方法(fa)。其原理為(wei)利(li)用標記(ji)的(de)抗抗體,俗(su)稱二抗,來檢(jian)測與固相(xiang)包被抗原結合的(de)受檢(jian)抗體。本(ben)法(fa)主要(yao)用于對(dui)病(bing)原體抗體的(de)檢(jian)測而進行(xing)傳(chuan)染(ran)病(bing)的(de)診斷。
(2)應用(yong)場景(jing):所有的IgG抗體檢測(ce)都可以使用(yong)。如新冠血清IgG檢測(ce)。
(3)注意(yi)事宜:本方法的優點(dian)是只要變換(huan)包被(bei)抗原的種類就可(ke)利(li)用同一標(biao)記抗抗體(二抗)建立(li)檢測相(xiang)應抗體的方法。
4、競爭法
(1)原理:當小分子抗(kang)原或半抗(kang)原因(yin)缺乏可作夾(jia)心法的(de)(de)(de)(de)兩(liang)個表(biao)位供包被(bei)和檢(jian)測(ce)(ce)抗(kang)體(ti)同時識別結(jie)(jie)合(he)(he),因(yin)此不能(neng)用雙抗(kang)體(ti)夾(jia)心法進(jin)(jin)行測(ce)(ce)定,可以采用競(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)法模式。由于物(wu)質的(de)(de)(de)(de)相互(hu)作用或者結(jie)(jie)合(he)(he)是(shi)相對動(dong)態平(ping)衡(heng)的(de)(de)(de)(de)過程,一旦樣(yang)本(ben)中(zhong)存在(zai)待(dai)(dai)檢(jian)測(ce)(ce)物(wu),樣(yang)品中(zhong)的(de)(de)(de)(de)待(dai)(dai)檢(jian)測(ce)(ce)物(wu)會(hui)同試劑中(zhong)的(de)(de)(de)(de)標記物(wu)去競(jing)(jing)爭(zheng)(zheng)結(jie)(jie)合(he)(he)包被(bei)物(wu)。這樣(yang)就會(hui)導致原來結(jie)(jie)合(he)(he)在(zai)一起(qi)的(de)(de)(de)(de)包被(bei)物(wu)和標記物(wu)分離,使原本(ben)飽滿的(de)(de)(de)(de)信(xin)號值進(jin)(jin)行降低。信(xin)號降低的(de)(de)(de)(de)程度(du)同待(dai)(dai)檢(jian)測(ce)(ce)物(wu)的(de)(de)(de)(de)濃度(du)成正相關。
(2)應用場景(jing):小分子抗(kang)原或半抗(kang)原,如激素檢(jian)(jian)測,雌二(er)醇(chun),睪酮;甲狀(zhuang)腺功(gong)能檢(jian)(jian)測,T4,T3等。
(3)注意事宜:競爭(zheng)法(fa)中,有些待檢測(ce)物分(fen)子特別小,很難制備或找到適合(he)使(shi)用(yong)的抗體,而(er)且(qie)生理條(tiao)件下可以同其他蛋白結(jie)合(he),那么可以使(shi)用(yong)該(gai)分(fen)子的結(jie)合(he)蛋白來(lai)代替抗體實現。如(ru),25OH-Vd檢測(ce),可使(shi)用(yong)25OH-Vd特異性抗體,也可使(shi)用(yong)Vd結(jie)合(he)蛋白。
5、捕獲法(反向間接法)
(1)原理:捕獲包(bao)被法,又稱為(wei)反(fan)向間接法,采用抗抗體(二抗)包(bao)被,抗原進行標記的(de)(de)檢測方法。以目前常用的(de)(de)IgM測定(ding)(ding)(ding)為(wei)例,因血清(qing)中針(zhen)對某種(zhong)抗原的(de)(de)特異(yi)(yi)性IgM和(he)IgG同(tong)時存在(zai),則后者可干(gan)擾IgM的(de)(de)測定(ding)(ding)(ding)。因此先將所有血清(qing)IgM(包(bao)括(kuo)異(yi)(yi)性IgM和(he)非(fei)特異(yi)(yi)性IgM)固定(ding)(ding)(ding)在(zai)固相上,在(zai)去除(chu)IgG后再測定(ding)(ding)(ding)特異(yi)(yi)性IgM。
(2)應用場景:IgM測定最(zui)為(wei)常見(jian),特(te)定過(guo)敏原IgE檢測。
(3)注意事(shi)宜:IgM型類風濕因(yin)子(zi)(RF)的干(gan)擾(rao),IgE型類風濕因(yin)子(zi)相對較少。
二、免疫診斷有什么特點
1、特異性強,不出(chu)現(xian)交叉反應,不出(chu)現(xian)假(jia)陽(yang)性,可保證(zheng)診斷的(de)準確性。
2、靈(ling)敏(min)度高,能測(ce)出微量(liang)反應物質(zhi)和(he)輕微的異常變(bian)化(hua),有利于(yu)早期診斷和(he)排除可(ke)疑病例。
3、簡(jian)便、快(kuai)速、安全(quan)。