一、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚度(du)(du)通常(chang)為4~7微米,切(qie)出(chu)一片接(jie)一片的(de)蠟帶(dai),用毛筆(bi)輕托輕放在紙上。這個厚度(du)(du)通常(chang)可(ke)以滿足大部分實驗室的(de)需(xu)求。如(ru)果需(xu)要更(geng)(geng)薄的(de)切(qie)片厚度(du)(du),則可(ke)以使用微切(qie)機進行切(qie)割(ge),厚度(du)(du)可(ke)達(da)1-2微米,但這種(zhong)切(qie)片會更(geng)(geng)脆弱,操(cao)作難度(du)(du)更(geng)(geng)大。
二、石蠟切片制作過程是什么
石蠟切片的制(zhi)作步驟(zou)如下:
1、組織包埋
(1)乙醇脫水:組織經不同濃度的(de)乙(yi)醇溶(rong)液進(jin)行(xing)逐級(ji)脫(tuo)水(shui)(shui)70%、80%、90%、95%、100%、100%,各級(ji)乙(yi)醇 40min(注意:骨性及(ji)鈣(gai)化(hua)組織需(xu)在JYBL-Ⅱ脫(tuo)鈣(gai)液中浸泡24h,待組織軟(ruan)化(hua)后再進(jin)行(xing)乙(yi)醇脫(tuo)水(shui)(shui)步(bu)驟)。
(2)透明:組織依次浸泡于三個二甲苯(ben)中,每缸(gang)各1h。
(3)浸蠟:組織依次浸泡于三個石蠟缸(gang)中,每(mei)缸(gang)各1h。
(4)包埋:將液態的石(shi)(shi)蠟(la)倒入(ru)模具盒中(zhong),再將浸(jin)好(hao)蠟(la)的組織塊平放(fang)底(di)部,注(zhu)意切(qie)面方向朝下放(fang)置(zhi),待石(shi)(shi)蠟(la)凝固后去掉包埋框,完全(quan)冷卻變硬(ying)后再修整(zheng)蠟(la)塊,組織外圍(wei)的石(shi)(shi)蠟(la)保(bao)留適中(zhong)以(yi)便切(qie)片。
2、切片與貼片
切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的切(qie)(qie)面與(yu)刀口成平行(xing)方向(xiang),刀的傾斜(xie)度通(tong)常(chang)15℃,轉動(dong)輪轉推進器,調節切(qie)(qie)片(pian)厚(hou)度為4μm,切(qie)(qie)成厚(hou)度均勻(yun)的切(qie)(qie)片(pian)。
左手持毛筆,右手旋動切片機轉把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片(pian)貼附后(hou),放在空氣中稍晾干,放置65℃烤(kao)(kao)片(pian)機(ji)上烤(kao)(kao)1h,再(zai)放置烘(hong)箱(xiang)內(nei)烘(hong)烤(kao)(kao)2h。
3、石蠟切片脫蠟至水
依次將石蠟切片放入二(er)(er)甲(jia)(jia)苯Ⅰ10min-二(er)(er)甲(jia)(jia)苯Ⅱ10min-二(er)(er)甲(jia)(jia)苯Ⅲ10min-無(wu)水乙(yi)醇Ⅰ5min-無(wu)水乙(yi)醇Ⅱ5min-90%酒(jiu)(jiu)精(jing)(jing)5min-80%酒(jiu)(jiu)精(jing)(jing)5min-70%酒(jiu)(jiu)精(jing)(jing)5min-50%酒(jiu)(jiu)精(jing)(jing)5min梯(ti)度脫蠟。
4、HE染色
石(shi)蠟(la)切(qie)片入(ru)(ru)蘇(su)木素(su)染(ran)0.5-1分鐘min,自來水漂洗(xi)(xi),1%鹽酸酒精分化數(shu)秒(miao),自來水漂洗(xi)(xi),然(ran)后1%氨水水溶液返藍1min,流水沖(chong)洗(xi)(xi)數(shu)秒(miao),放入(ru)(ru)伊紅染(ran)液中(zhong)染(ran)色數(shu)秒(miao),流水漂洗(xi)(xi)。
5、脫水封片
石蠟切片依(yi)次放入(ru)75%乙(yi)醇(chun)2min-85%乙(yi)醇(chun)2min-無水(shui)乙(yi)醇(chun)5min-無水(shui)乙(yi)醇(chun)5min-二甲(jia)苯5min透明,將切片從二甲(jia)苯拿出(chu)來中性樹膠(jiao)封片。