大(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(Escherichia coli),又叫大(da)腸(chang)(chang)埃希氏菌(jun)(jun),Escherich在1885年發(fa)現的。大(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)是(shi)條(tiao)件致病菌(jun)(jun),在一定條(tiao)件下可以引起人和多(duo)種動(dong)物(wu)發(fa)生胃腸(chang)(chang)道(dao)(dao)感染或尿道(dao)(dao)等(deng)多(duo)種局部組織器官感染。
大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)是(shi)動物(wu)腸(chang)(chang)道(dao)中的(de)正常(chang)寄(ji)居菌(jun),其中很小一(yi)部分(fen)在(zai)一(yi)定(ding)條(tiao)件下引(yin)起(qi)(qi)疾病。大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)的(de)血(xue)清型能夠引(yin)起(qi)(qi)人(ren)體或動物(wu)胃腸(chang)(chang)道(dao)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran),主要是(shi)由特定(ding)的(de)菌(jun)毛抗原、致病性毒素等(deng)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)引(yin)起(qi)(qi)的(de),除胃腸(chang)(chang)道(dao)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)以外,還會引(yin)起(qi)(qi)尿道(dao)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)、關節炎(yan)、腦(nao)膜(mo)炎(yan)以及敗血(xue)型感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)等(deng)。
目(mu)前(qian)國際公認的(de)(de)分類(lei),主要有六個種類(lei)的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun),即(ji)能夠(gou)致使(shi)胃腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)感(gan)染(ran)的(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)致病性的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EPEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)產(chan)毒素性的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(ETEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)侵(qin)襲(xi)性的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EIEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)出血(xue)性的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EHEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)集(ji)聚性的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EAEC)以及近年來發現(xian)的(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)產(chan)志賀樣毒素同(tong)時(shi)具(ju)有一(yi)定侵(qin)襲(xi)力(li)的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(ESIES),另外,還有能夠(gou)致使(shi)尿道(dao)(dao)感(gan)染(ran)的(de)(de)尿道(dao)(dao)致病性的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(UPEC),以及最(zui)新命名的(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)(dao)集(ji)聚性的(de)(de)黏附大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EAggEC)。
根據大腸桿(gan)菌(jun)的(de)感(gan)染性狀(zhuang)能否產生(sheng)溶血素(su)和(he)有無溶血的(de)能力,可將大腸桿(gan)菌(jun)分為兩大類:即溶血性的(de)大腸桿(gan)菌(jun)和(he)非溶血性的(de)大腸桿(gan)菌(jun)。
根據大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)在感(gan)染(ran)過(guo)程中能否產生腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)能力(li)(li),可將大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)分為(wei)兩(liang)大(da)(da)(da)(da)類:即產腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)和(he)非產腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)。產腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)是(shi)人和(he)多種動物的(de)任何感(gan)染(ran)性(xing)(xing)腹瀉(xie)的(de)重(zhong)要病原,鑒(jian)定產腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)主(zhu)要是(shi)測定所(suo)分離大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)分泌的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)類型(xing)。除此之外(wai),也可以根據大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)產生腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)能力(li)(li),結合其對不同腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)敏感(gan)性(xing)(xing),而將大(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)分型(xing),稱為(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)型(xing)。
大(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)是(shi)(shi)短桿(gan)菌(jun)(jun),兩端呈(cheng)鈍圓(yuan)形(xing),革蘭陰(yin)性。有(you)時因(yin)環境不(bu)(bu)同(tong),個別菌(jun)(jun)體出現近似球桿(gan)狀(zhuang)或長(chang)絲狀(zhuang);大(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)多(duo)是(shi)(shi)單(dan)一(yi)或兩個存(cun)在,但不(bu)(bu)會排列呈(cheng)長(chang)鏈(lian)形(xing)狀(zhuang);大(da)多(duo)數的(de)大(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)株(zhu)具有(you)莢膜或微莢膜結構(gou),但是(shi)(shi)不(bu)(bu)能(neng)形(xing)成芽孢;多(duo)數大(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)株(zhu)生長(chang)有(you)菌(jun)(jun)毛,其中一(yi)些菌(jun)(jun)毛是(shi)(shi)針對宿(su)(su)主及其他的(de)一(yi)些組織或細胞具有(you)黏附作用的(de)宿(su)(su)主特(te)異性菌(jun)(jun)毛。
大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)的生(sheng)化(hua)代謝非常(chang)活(huo)躍。大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)可以發(fa)(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)葡萄(tao)糖產(chan)酸、產(chan)氣,個別(bie)(bie)菌(jun)(jun)株不(bu)產(chan)氣,大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)還能發(fa)(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)多(duo)種碳水(shui)化(hua)合物,也可以利(li)(li)用多(duo)種有機酸鹽(yan)。大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)在常(chang)用的生(sheng)化(hua)特性(xing)(xing)(xing)檢(jian)測項目中,甲基紅試驗呈(cheng)陽(yang)性(xing)(xing)(xing),吲哚產(chan)生(sheng)和乳糖發(fa)(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)是(shi)陽(yang)性(xing)(xing)(xing)(個別(bie)(bie)菌(jun)(jun)株表現陰(yin)(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing)),維-培試驗是(shi)陰(yin)(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing),尿素酶和檸檬酸鹽(yan)利(li)(li)用呈(cheng)陰(yin)(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing)(極個別(bie)(bie)菌(jun)(jun)株表現陽(yang)性(xing)(xing)(xing)),硝酸鹽(yan)還原試驗表現陽(yang)性(xing)(xing)(xing),氧化(hua)酶表現陰(yin)(yin)(yin)性(xing)(xing)(xing),氧化(hua)-發(fa)(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)試驗表現為F型。
對人(ren)(ren)(ren)和多種(zhong)動(dong)物(wu)(wu)來講(jiang),由于病(bing)原(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌常(chang)常(chang)傾(qing)向具有(you)一定的(de)(de)(de)宿主(zhu)特異(yi)性,對人(ren)(ren)(ren)有(you)致(zhi)病(bing)作用的(de)(de)(de)菌株常(chang)常(chang)是(shi)很少(shao)引起動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)感(gan)染(ran),反之(zhi)亦(yi)然,據此(ci)可(ke)將病(bing)原(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌大(da)(da)(da)致(zhi)上將其劃分為(wei)兩種(zhong):即人(ren)(ren)(ren)病(bing)原(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌和動(dong)物(wu)(wu)病(bing)原(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌。動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)致(zhi)瀉性大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌已被明確的(de)(de)(de)特征主(zhu)要是(shi)類似于ETEC的(de)(de)(de)菌株。UPEC是(shi)一群能夠(gou)引起人(ren)(ren)(ren)的(de)(de)(de)尿道感(gan)染(ran)最常(chang)見的(de)(de)(de)病(bing)原(yuan)大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌。尿道感(gan)染(ran)是(shi)很少(shao)獨立(li)存(cun)在(zai)于動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)大(da)(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌病(bing)中的(de)(de)(de)感(gan)染(ran)癥(zheng)狀。
大(da)(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)的(de)(de)發生(sheng)與流行(xing)感(gan)染是(shi)呈世(shi)界(jie)性(xing)分(fen)布的(de)(de),但大(da)(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)的(de)(de)流行(xing)性(xing)還是(shi)存(cun)在一定的(de)(de)區(qu)(qu)域(yu)(yu)分(fen)布特(te)(te)征(zheng)的(de)(de)。這些區(qu)(qu)域(yu)(yu)分(fen)布的(de)(de)特(te)(te)征(zheng)在人的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)感(gan)染中表現的(de)(de)更(geng)明顯(xian)些,最(zui)大(da)(da)的(de)(de)可能是(shi)因(yin)為與區(qu)(qu)域(yu)(yu)間經(jing)濟(ji)條(tiao)件(jian)和(he)社會(hui)衛生(sheng)狀況等(deng)有一定聯系(xi)的(de)(de)。
動物(wu)的大(da)腸桿菌病可以(yi)發生(sheng)在多種(zhong)家畜、家禽、養(yang)殖經濟動物(wu)以(yi)及其(qi)他陸生(sheng)動物(wu)和(he)某些水產(chan)動物(wu),其(qi)中豬(zhu)和(he)雞(ji)是(shi)最(zui)為易(yi)感的,而且危害十分嚴重。
大腸桿(gan)(gan)菌(jun)在(zai)動物(wu)群體(ti)間的感(gan)染的季(ji)(ji)(ji)(ji)節(jie)發(fa)(fa)病(bing)特征不(bu)是(shi)非常明顯。在(zai)一年四季(ji)(ji)(ji)(ji)豬(zhu)均(jun)可(ke)發(fa)(fa)生(sheng),但(dan)只要是(shi)發(fa)(fa)生(sheng)在(zai)豬(zhu)的產仔期(qi)至斷乳期(qi),這與豬(zhu)的易感(gan)日齡相(xiang)關聯(lian)。犢牛和羔(gao)羊多發(fa)(fa)生(sheng)于冬季(ji)(ji)(ji)(ji)和春季(ji)(ji)(ji)(ji)。其他(ta)動物(wu)的大腸桿(gan)(gan)菌(jun)感(gan)染在(zai)常年均(jun)有(you)發(fa)(fa)生(sheng),季(ji)(ji)(ji)(ji)節(jie)性不(bu)明顯。
人(ren)的大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)病的主要傳(chuan)染源(yuan)是(shi)因為(wei)在(zai)胃腸(chang)(chang)道感染患者(zhe)的糞便(bian)中有大(da)(da)(da)量大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)病原菌(jun)排至(zhi)體(ti)外構成的。大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)在(zai)人(ren)之間(jian)的傳(chuan)播途徑多(duo)是(shi)通過糞-口這一傳(chuan)播途徑,在(zai)一定的條件(jian)下可引起大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)病散(san)發或流行(xing)。
食品中(zhong)的(de)大(da)腸桿(gan)菌進行(xing)快速準(zhun)確的(de)檢(jian)測已成為了(le)人們經常關(guan)注的(de)問題。下面闡述食品中(zhong)的(de)大(da)腸桿(gan)菌檢(jian)測的(de)方法及分析。
這(zhe)種方(fang)法主(zhu)要是(shi)在44.5℃下(xia)的培(pei)養(yang)基上進(jin)行(xing)大(da)腸桿菌的培(pei)養(yang),該(gai)培(pei)養(yang)基含有熒(ying)光(guang)底物,需要培(pei)養(yang)24h。然后對(dui)熒(ying)光(guang)底物進(jin)行(xing)釋(shi)放(fang),需要采(cai)用(yong)葡萄(tao)糖醛(quan)酸進(jin)行(xing),讓培(pei)養(yang)基能夠在紫外光(guang)的照射下(xia)發出熒(ying)光(guang)。采(cai)用(yong)這(zhe)樣(yang)的方(fang)式方(fang)法,還可以進(jin)行(xing)統計學估計原來樣(yang)品中的菌落(luo)。主(zhu)要步驟(zou)包(bao)括發酵、分離(li)培(pei)養(yang)、二次發酵、顯微鏡(jing)觀察等。
該方法(fa)主要過程:加入10mL左(zuo)右的無菌(jun)(jun)(jun)水于濾(lv)器中(zhong),然后摻入一些(xie)無菌(jun)(jun)(jun)水進(jin)行清潔濾(lv)器的內壁(bi),再進(jin)行過濾(lv),將濾(lv)膜(mo)放在(zai)M-FC培(pei)養基中(zhong),兩者之間不能夠有氣泡,然后進(jin)行密封(feng),存放溫(wen)度為(wei)44.5℃,存放時間約24h,直到大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)的菌(jun)(jun)(jun)群變(bian)成藍(lan)色或藍(lan)綠色。然后記錄(lu)數(shu)據,估(gu)算每一單(dan)位的水溶(rong)液菌(jun)(jun)(jun)群數(shu)量(liang),然后進(jin)行大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)量(liang)值的換算。
用無菌(jun)吸管吸取稀(xi)釋(shi)度樣品1mL,該樣品與乳糖膽鹽發(fa)酵(jiao)類似(si),然(ran)后(hou)(hou)(hou)將其放入(ru)無菌(jun)培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿(min)中(zhong),再加入(ru)溫(wen)度于45℃下的(de)CDLJJD顯色培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)中(zhong)10mL的(de)量(liang),并進行培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿(min)中(zhong)溶液(ye)均(jun)(jun)勻(yun)混(hun)合,可(ke)以通(tong)過快(kuai)速轉動(dong)培(pei)(pei)養(yang)(yang)皿(min)的(de)方(fang)式,等溶液(ye)凝固以后(hou)(hou)(hou),加入(ru)5mL左右(you),然(ran)后(hou)(hou)(hou)快(kuai)速搖晃培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji),使其可(ke)以均(jun)(jun)勻(yun)覆蓋(gai)平板表(biao)面,等其凝固以后(hou)(hou)(hou),翻轉培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji),在(zai)溫(wen)度37℃中(zhong)培(pei)(pei)養(yang)(yang)24h左右(you),然(ran)后(hou)(hou)(hou)觀察其形態,顏色等變化。除此之外,平行設置兩(liang)個稀(xi)釋(shi)度培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji),步驟是(shi)先稀(xi)釋(shi)樣本(ben),通(tong)過稀(xi)釋(shi)后(hou)(hou)(hou),微生物可(ke)以分(fen)散為單個細胞,然(ran)后(hou)(hou)(hou)進行一定環(huan)境(jing)條件下培(pei)(pei)養(yang)(yang),直到其長成菌(jun)落為止,然(ran)后(hou)(hou)(hou)進行計算(suan)大腸桿菌(jun)的(de)數(shu)量(liang),通(tong)過稀(xi)釋(shi)度和(he)樣本(ben)數(shu)量(liang)進行計算(suan)。
該(gai)分(fen)離技術的(de)(de)主要原(yuan)理是以(yi)磁珠(zhu)為載體(ti)和抗(kang)體(ti),進(jin)(jin)行抗(kang)體(ti)和磁珠(zhu)的(de)(de)結合,然后通過磁力技術完(wan)成力學(xue)的(de)(de)移動,進(jin)(jin)而(er)分(fen)離大腸桿(gan)菌(jun)。與其他分(fen)離細菌(jun)的(de)(de)方(fang)(fang)式相比,這樣(yang)的(de)(de)方(fang)(fang)式方(fang)(fang)法具(ju)有一(yi)定的(de)(de)優點,該(gai)技術可以(yi)提(ti)升樣(yang)本中(zhong)病原(yuan)性弧(hu)菌(jun)的(de)(de)檢測成功率(lv),并(bing)且免疫磁珠(zhu)技術可以(yi)于不同菌(jun)種(zhong)中(zhong)對不同的(de)(de)微生物進(jin)(jin)行處理,進(jin)(jin)而(er)在(zai)很大程度上提(ti)高檢測效(xiao)率(lv)。
主要是運用免(mian)疫自(zi)動(dong)(dong)化(hua)(hua)分析(xi)儀,該(gai)技術(shu)(shu)產生并運用于1970年。隨(sui)著科技的(de)發展和(he)進步,自(zi)動(dong)(dong)化(hua)(hua)儀器檢(jian)測技術(shu)(shu)應用非(fei)常(chang)廣泛(fan),并且操作起來非(fei)常(chang)方便,可(ke)以(yi)(yi)節約很多時(shi)間,其受干(gan)擾的(de)程度(du)較小,可(ke)以(yi)(yi)節省(sheng)人(ren)力(li)物(wu)力(li)的(de)投(tou)入,也可(ke)以(yi)(yi)提(ti)高檢(jian)測的(de)精確度(du)。在現階段的(de)發展過(guo)程中,自(zi)動(dong)(dong)酶的(de)免(mian)疫檢(jian)測體系的(de)應用非(fei)常(chang)廣泛(fan)。
在(zai)近(jin)些年的(de)(de)發(fa)展過(guo)程中(zhong)(zhong),生(sheng)物(wu)發(fa)光(guang)(guang)(guang)技術(shu)(shu)應用(yong)(yong)很(hen)廣泛,是(shi)(shi)一(yi)種比較快(kuai)(kuai)速的(de)(de)檢測(ce)微生(sheng)物(wu)的(de)(de)技術(shu)(shu)。在(zai)活性(xing)細(xi)胞中(zhong)(zhong),ATP是(shi)(shi)其常(chang)見的(de)(de)能量代謝產(chan),可(ke)以提供細(xi)胞生(sheng)理活動過(guo)程中(zhong)(zhong)所(suo)需的(de)(de)能量。并且,該(gai)技術(shu)(shu)可(ke)以在(zai)生(sheng)物(wu)體內可(ke)以在(zai)一(yi)定范圍內保持(chi)一(yi)定的(de)(de)含量。食品中(zhong)(zhong)的(de)(de)大腸桿菌檢測(ce)技術(shu)(shu)可(ke)以采用(yong)(yong)熒光(guang)(guang)(guang)光(guang)(guang)(guang)度(du)的(de)(de)方(fang)(fang)法(fa),因為生(sheng)物(wu)體發(fa)光(guang)(guang)(guang)的(de)(de)原因是(shi)(shi)有熒光(guang)(guang)(guang)素(su)(su)酶的(de)(de)作用(yong)(yong),產(chan)生(sheng)了發(fa)光(guang)(guang)(guang)的(de)(de)效果。該(gai)物(wu)質(zhi)來源于北美的(de)(de)螢火蟲(chong)體內,可(ke)以催化熒光(guang)(guang)(guang)素(su)(su)的(de)(de)氧化作用(yong)(yong),不(bu)(bu)過(guo),該(gai)物(wu)質(zhi)性(xing)質(zhi)不(bu)(bu)穩定,可(ke)以對熒光(guang)(guang)(guang)進行快(kuai)(kuai)速分解。另外,該(gai)檢測(ce)技術(shu)(shu)結果獲得過(guo)程是(shi)(shi)非常(chang)快(kuai)(kuai)的(de)(de),并且該(gai)設備攜帶(dai)方(fang)(fang)便,十分適用(yong)(yong)于現(xian)場檢測(ce)。
可引(yin)起腹瀉的致(zhi)病性大腸桿菌(jun)、傷寒桿菌(jun)、霍亂弧(hu)菌(jun)等(deng)普通細菌(jun)繁殖體,80℃熱水(shui)需要5-10分(fen)鐘、沸水(shui)需要2-5分(fen)鐘才能殺滅。