大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(Escherichia coli),又叫大(da)(da)腸(chang)(chang)埃希氏菌(jun),Escherich在1885年發現的。大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)是條(tiao)件致病菌(jun),在一(yi)定條(tiao)件下可以引起人和(he)多種動物(wu)發生胃腸(chang)(chang)道(dao)感(gan)染(ran)或尿道(dao)等多種局部(bu)組(zu)織(zhi)器官感(gan)染(ran)。
大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)是(shi)動(dong)(dong)物腸(chang)道(dao)(dao)中的正(zheng)常寄居菌(jun)(jun),其中很小(xiao)一部分(fen)在一定條件下引(yin)起疾病。大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)的血(xue)清型能夠引(yin)起人體或動(dong)(dong)物胃腸(chang)道(dao)(dao)感(gan)染(ran),主要是(shi)由特定的菌(jun)(jun)毛抗原、致病性毒素等(deng)感(gan)染(ran)引(yin)起的,除胃腸(chang)道(dao)(dao)感(gan)染(ran)以外,還會引(yin)起尿道(dao)(dao)感(gan)染(ran)、關節炎、腦膜(mo)炎以及敗血(xue)型感(gan)染(ran)等(deng)。
目前國際公(gong)認的(de)(de)(de)分類(lei),主要有(you)六個種類(lei)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun),即(ji)能夠致(zhi)使胃腸(chang)(chang)(chang)道(dao)感染的(de)(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)道(dao)致(zhi)病性(xing)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EPEC)、腸(chang)(chang)(chang)道(dao)產毒(du)素(su)性(xing)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(ETEC)、腸(chang)(chang)(chang)道(dao)侵襲性(xing)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EIEC)、腸(chang)(chang)(chang)道(dao)出(chu)血性(xing)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EHEC)、腸(chang)(chang)(chang)集聚性(xing)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EAEC)以及(ji)近年來發(fa)現(xian)的(de)(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)產志賀(he)樣毒(du)素(su)同時具有(you)一定侵襲力的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(ESIES),另外,還(huan)有(you)能夠致(zhi)使尿(niao)道(dao)感染的(de)(de)(de)尿(niao)道(dao)致(zhi)病性(xing)的(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(UPEC),以及(ji)最新(xin)命名的(de)(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)道(dao)集聚性(xing)的(de)(de)(de)黏(nian)附大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(EAggEC)。
根據(ju)大(da)腸(chang)桿菌的感染性狀能否產生溶血素和有無溶血的能力(li),可將(jiang)大(da)腸(chang)桿菌分為(wei)兩大(da)類:即溶血性的大(da)腸(chang)桿菌和非溶血性的大(da)腸(chang)桿菌。
根據大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)在(zai)感染過程(cheng)中能否產(chan)生腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)能力,可將大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)分(fen)為(wei)兩大(da)(da)(da)類:即(ji)產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)和非產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)。產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)是(shi)人和多種動物的(de)(de)(de)(de)(de)任何(he)感染性(xing)(xing)腹瀉的(de)(de)(de)(de)(de)重要(yao)病(bing)原,鑒(jian)定(ding)產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)主要(yao)是(shi)測定(ding)所分(fen)離大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)分(fen)泌(mi)的(de)(de)(de)(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)類型。除此之外,也(ye)可以根據大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)產(chan)生腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)能力,結合(he)其對(dui)不同腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)敏感性(xing)(xing),而將大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)分(fen)型,稱為(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒(du)(du)素(su)(su)(su)型。
大腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)短桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),兩(liang)端呈鈍圓形,革蘭陰性。有時(shi)因(yin)環境(jing)不(bu)同,個別菌(jun)(jun)(jun)體出(chu)現近似球桿(gan)(gan)狀(zhuang)或(huo)長絲狀(zhuang);大腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)多(duo)是(shi)單一(yi)或(huo)兩(liang)個存(cun)在,但不(bu)會(hui)排(pai)列呈長鏈(lian)形狀(zhuang);大多(duo)數的大腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)株具有莢膜或(huo)微莢膜結構,但是(shi)不(bu)能(neng)形成芽孢;多(duo)數大腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)菌(jun)(jun)(jun)株生長有菌(jun)(jun)(jun)毛,其中(zhong)一(yi)些(xie)(xie)菌(jun)(jun)(jun)毛是(shi)針(zhen)對(dui)宿(su)主及其他的一(yi)些(xie)(xie)組織或(huo)細胞具有黏附(fu)作(zuo)用的宿(su)主特異性菌(jun)(jun)(jun)毛。
大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)的生(sheng)化(hua)代謝(xie)非(fei)常活躍。大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)可(ke)以發(fa)酵葡萄糖(tang)產(chan)(chan)酸(suan)(suan)、產(chan)(chan)氣,個(ge)別菌(jun)(jun)株不產(chan)(chan)氣,大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)還能發(fa)酵多種碳水化(hua)合物(wu),也可(ke)以利(li)用(yong)多種有機酸(suan)(suan)鹽(yan)。大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)在常用(yong)的生(sheng)化(hua)特性(xing)(xing)檢測項目中,甲基紅(hong)試(shi)驗呈陽(yang)性(xing)(xing),吲(yin)哚產(chan)(chan)生(sheng)和(he)乳糖(tang)發(fa)酵是(shi)陽(yang)性(xing)(xing)(個(ge)別菌(jun)(jun)株表現陰(yin)性(xing)(xing)),維-培試(shi)驗是(shi)陰(yin)性(xing)(xing),尿(niao)素酶(mei)(mei)和(he)檸(ning)檬(meng)酸(suan)(suan)鹽(yan)利(li)用(yong)呈陰(yin)性(xing)(xing)(極(ji)個(ge)別菌(jun)(jun)株表現陽(yang)性(xing)(xing)),硝酸(suan)(suan)鹽(yan)還原試(shi)驗表現陽(yang)性(xing)(xing),氧(yang)化(hua)酶(mei)(mei)表現陰(yin)性(xing)(xing),氧(yang)化(hua)-發(fa)酵試(shi)驗表現為(wei)F型。
對(dui)人(ren)(ren)和多種動(dong)物(wu)來講(jiang),由于(yu)病(bing)(bing)原(yuan)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)常(chang)常(chang)傾向具(ju)有一(yi)定的(de)(de)(de)(de)宿主特異(yi)性(xing)(xing),對(dui)人(ren)(ren)有致(zhi)病(bing)(bing)作用的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)(jun)株常(chang)常(chang)是很(hen)(hen)少引(yin)起(qi)動(dong)物(wu)的(de)(de)(de)(de)感(gan)染(ran),反之(zhi)亦然,據此可將病(bing)(bing)原(yuan)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)大(da)(da)致(zhi)上將其劃分為兩種:即人(ren)(ren)病(bing)(bing)原(yuan)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和動(dong)物(wu)病(bing)(bing)原(yuan)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)。動(dong)物(wu)的(de)(de)(de)(de)致(zhi)瀉性(xing)(xing)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)已被明確的(de)(de)(de)(de)特征(zheng)主要是類似于(yu)ETEC的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)(jun)株。UPEC是一(yi)群能夠引(yin)起(qi)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)尿道感(gan)染(ran)最常(chang)見的(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)原(yuan)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)。尿道感(gan)染(ran)是很(hen)(hen)少獨(du)立(li)存在于(yu)動(dong)物(wu)的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)病(bing)(bing)中的(de)(de)(de)(de)感(gan)染(ran)癥狀。
大腸桿(gan)菌的(de)(de)(de)(de)發(fa)生與(yu)流(liu)行感染(ran)是(shi)呈(cheng)世界性(xing)分布的(de)(de)(de)(de),但大腸桿(gan)菌的(de)(de)(de)(de)流(liu)行性(xing)還是(shi)存在一(yi)定的(de)(de)(de)(de)區域(yu)(yu)分布特(te)征的(de)(de)(de)(de)。這些(xie)區域(yu)(yu)分布的(de)(de)(de)(de)特(te)征在人的(de)(de)(de)(de)大腸桿(gan)菌感染(ran)中表現的(de)(de)(de)(de)更明顯些(xie),最大的(de)(de)(de)(de)可能(neng)是(shi)因(yin)為與(yu)區域(yu)(yu)間(jian)經濟條件和社會衛生狀況等有(you)一(yi)定聯系的(de)(de)(de)(de)。
動物的(de)大腸桿菌(jun)病可以發生在多種(zhong)家畜、家禽、養殖(zhi)經濟動物以及其他陸(lu)生動物和(he)某些(xie)水產動物,其中豬(zhu)和(he)雞是最(zui)為易感的(de),而且危害(hai)十(shi)分嚴(yan)重。
大腸桿菌(jun)在(zai)動(dong)物群(qun)體間的(de)(de)(de)感染的(de)(de)(de)季(ji)(ji)節發(fa)(fa)病特征不是非常(chang)明顯(xian)。在(zai)一年(nian)四季(ji)(ji)豬(zhu)均(jun)可發(fa)(fa)生,但只要是發(fa)(fa)生在(zai)豬(zhu)的(de)(de)(de)產仔期至(zhi)斷乳期,這(zhe)與豬(zhu)的(de)(de)(de)易(yi)感日(ri)齡(ling)相關(guan)聯(lian)。犢牛和羔羊多(duo)發(fa)(fa)生于冬季(ji)(ji)和春季(ji)(ji)。其他動(dong)物的(de)(de)(de)大腸桿菌(jun)感染在(zai)常(chang)年(nian)均(jun)有發(fa)(fa)生,季(ji)(ji)節性不明顯(xian)。
人(ren)(ren)的(de)大(da)(da)腸桿(gan)菌病的(de)主要傳染源(yuan)是因為在胃(wei)腸道感染患者的(de)糞便中有大(da)(da)量(liang)大(da)(da)腸桿(gan)菌病原菌排(pai)至體外構(gou)成的(de)。大(da)(da)腸桿(gan)菌在人(ren)(ren)之間的(de)傳播途(tu)徑多(duo)是通(tong)過糞-口這(zhe)一傳播途(tu)徑,在一定(ding)的(de)條件下可引起大(da)(da)腸桿(gan)菌病散發或流(liu)行。
食品(pin)中(zhong)(zhong)的大腸(chang)桿菌進(jin)行(xing)快速準確(que)的檢(jian)測已成(cheng)為了人們(men)經(jing)常關注的問題。下面闡述食品(pin)中(zhong)(zhong)的大腸(chang)桿菌檢(jian)測的方法及(ji)分析(xi)。
這(zhe)種方(fang)法(fa)主(zhu)要是在44.5℃下(xia)的(de)培養(yang)基(ji)上(shang)進(jin)行大腸(chang)桿菌(jun)的(de)培養(yang),該培養(yang)基(ji)含有熒光(guang)底物(wu),需要培養(yang)24h。然(ran)后對熒光(guang)底物(wu)進(jin)行釋放,需要采(cai)用(yong)葡萄(tao)糖醛酸(suan)進(jin)行,讓培養(yang)基(ji)能(neng)夠在紫(zi)外光(guang)的(de)照(zhao)射下(xia)發(fa)出熒光(guang)。采(cai)用(yong)這(zhe)樣的(de)方(fang)式方(fang)法(fa),還可以進(jin)行統計學(xue)估計原(yuan)來樣品(pin)中的(de)菌(jun)落(luo)。主(zhu)要步驟(zou)包括(kuo)發(fa)酵(jiao)、分離培養(yang)、二次發(fa)酵(jiao)、顯微鏡(jing)觀察等。
該方(fang)法主要(yao)過程:加入10mL左右的(de)(de)無菌水(shui)于濾器中,然(ran)后(hou)摻入一(yi)(yi)些(xie)無菌水(shui)進行(xing)清潔濾器的(de)(de)內壁,再進行(xing)過濾,將濾膜放在M-FC培養基中,兩者之(zhi)間(jian)不能夠有氣泡(pao),然(ran)后(hou)進行(xing)密封,存放溫度為44.5℃,存放時(shi)間(jian)約24h,直到大(da)腸(chang)桿(gan)菌的(de)(de)菌群變成(cheng)藍色(se)或(huo)藍綠色(se)。然(ran)后(hou)記錄數(shu)據,估算每一(yi)(yi)單位的(de)(de)水(shui)溶(rong)液菌群數(shu)量,然(ran)后(hou)進行(xing)大(da)腸(chang)桿(gan)菌量值的(de)(de)換算。
用(yong)無菌(jun)(jun)吸管(guan)吸取(qu)稀(xi)釋(shi)(shi)度(du)(du)樣品(pin)1mL,該樣品(pin)與(yu)乳(ru)糖(tang)膽(dan)鹽發酵類似(si),然(ran)后(hou)將其放入(ru)無菌(jun)(jun)培(pei)(pei)養(yang)皿(min)中,再加入(ru)溫(wen)度(du)(du)于45℃下的(de)CDLJJD顯(xian)色培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)中10mL的(de)量,并進(jin)行(xing)(xing)(xing)培(pei)(pei)養(yang)皿(min)中溶(rong)液均勻(yun)混合,可(ke)(ke)以通(tong)(tong)過(guo)快(kuai)速轉(zhuan)動培(pei)(pei)養(yang)皿(min)的(de)方(fang)式,等溶(rong)液凝固(gu)(gu)以后(hou),加入(ru)5mL左(zuo)右,然(ran)后(hou)快(kuai)速搖晃培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji),使其可(ke)(ke)以均勻(yun)覆蓋(gai)平板表面,等其凝固(gu)(gu)以后(hou),翻轉(zhuan)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji),在(zai)溫(wen)度(du)(du)37℃中培(pei)(pei)養(yang)24h左(zuo)右,然(ran)后(hou)觀察其形態(tai),顏色等變(bian)化(hua)。除此之外(wai),平行(xing)(xing)(xing)設置兩個稀(xi)釋(shi)(shi)度(du)(du)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji),步驟是(shi)先稀(xi)釋(shi)(shi)樣本,通(tong)(tong)過(guo)稀(xi)釋(shi)(shi)后(hou),微生(sheng)物可(ke)(ke)以分散為單個細(xi)胞,然(ran)后(hou)進(jin)行(xing)(xing)(xing)一定環境條件(jian)下培(pei)(pei)養(yang),直到其長成(cheng)菌(jun)(jun)落為止,然(ran)后(hou)進(jin)行(xing)(xing)(xing)計算大腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)的(de)數(shu)量,通(tong)(tong)過(guo)稀(xi)釋(shi)(shi)度(du)(du)和樣本數(shu)量進(jin)行(xing)(xing)(xing)計算。
該分(fen)離技術(shu)的(de)(de)主要原理(li)是以(yi)磁(ci)珠為(wei)載(zai)體和(he)抗體,進行抗體和(he)磁(ci)珠的(de)(de)結合(he),然后通過(guo)磁(ci)力技術(shu)完成(cheng)(cheng)力學(xue)的(de)(de)移動,進而(er)分(fen)離大(da)腸桿菌(jun)(jun)。與其(qi)他分(fen)離細菌(jun)(jun)的(de)(de)方式(shi)相比,這樣的(de)(de)方式(shi)方法具有一定(ding)的(de)(de)優(you)點,該技術(shu)可以(yi)提升(sheng)樣本中(zhong)病(bing)原性弧菌(jun)(jun)的(de)(de)檢測成(cheng)(cheng)功率(lv),并且免疫(yi)磁(ci)珠技術(shu)可以(yi)于不(bu)同菌(jun)(jun)種中(zhong)對不(bu)同的(de)(de)微生物(wu)進行處理(li),進而(er)在很大(da)程度上提高檢測效率(lv)。
主要是(shi)運用(yong)免疫自動化分析(xi)儀(yi),該技(ji)(ji)術產生并運用(yong)于(yu)1970年(nian)。隨著科技(ji)(ji)的發(fa)展和(he)進步(bu),自動化儀(yi)器檢(jian)測技(ji)(ji)術應用(yong)非(fei)常(chang)廣泛(fan),并且操(cao)作起來(lai)非(fei)常(chang)方便,可以節約很多時間,其(qi)受干(gan)擾的程度(du)較小,可以節省(sheng)人力(li)物力(li)的投入,也可以提(ti)高檢(jian)測的精確度(du)。在現(xian)階段的發(fa)展過程中,自動酶(mei)的免疫檢(jian)測體系的應用(yong)非(fei)常(chang)廣泛(fan)。
在(zai)(zai)近些年的(de)(de)(de)發(fa)展過(guo)程中(zhong),生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)發(fa)光(guang)(guang)(guang)技(ji)術應用(yong)很廣泛,是一種比較快速(su)的(de)(de)(de)檢(jian)測微生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)技(ji)術。在(zai)(zai)活性細(xi)胞(bao)中(zhong),ATP是其常(chang)見的(de)(de)(de)能量(liang)代謝(xie)產,可(ke)(ke)(ke)以提供細(xi)胞(bao)生(sheng)(sheng)理活動過(guo)程中(zhong)所需的(de)(de)(de)能量(liang)。并且,該(gai)技(ji)術可(ke)(ke)(ke)以在(zai)(zai)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)體內可(ke)(ke)(ke)以在(zai)(zai)一定(ding)范圍(wei)內保持一定(ding)的(de)(de)(de)含(han)量(liang)。食品中(zhong)的(de)(de)(de)大腸桿菌檢(jian)測技(ji)術可(ke)(ke)(ke)以采用(yong)熒光(guang)(guang)(guang)光(guang)(guang)(guang)度的(de)(de)(de)方法(fa),因為(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)體發(fa)光(guang)(guang)(guang)的(de)(de)(de)原因是有熒光(guang)(guang)(guang)素酶(mei)的(de)(de)(de)作(zuo)用(yong),產生(sheng)(sheng)了(le)發(fa)光(guang)(guang)(guang)的(de)(de)(de)效果。該(gai)物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)來源于北美的(de)(de)(de)螢火蟲體內,可(ke)(ke)(ke)以催化熒光(guang)(guang)(guang)素的(de)(de)(de)氧化作(zuo)用(yong),不過(guo),該(gai)物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)性質(zhi)(zhi)不穩定(ding),可(ke)(ke)(ke)以對熒光(guang)(guang)(guang)進行(xing)快速(su)分(fen)解。另外(wai),該(gai)檢(jian)測技(ji)術結果獲得過(guo)程是非(fei)常(chang)快的(de)(de)(de),并且該(gai)設(she)備攜帶方便(bian),十分(fen)適用(yong)于現(xian)場檢(jian)測。
可(ke)引起腹瀉(xie)的(de)致病性大(da)腸(chang)桿(gan)菌、傷寒(han)桿(gan)菌、霍亂弧菌等普(pu)通細菌繁(fan)殖體,80℃熱(re)水需(xu)要5-10分鐘(zhong)、沸水需(xu)要2-5分鐘(zhong)才(cai)能殺(sha)滅。