大腸桿菌(Escherichia coli),又叫大腸埃希氏菌,Escherich在(zai)1885年發(fa)現(xian)的(de)。大腸桿菌是條件(jian)致病菌,在(zai)一定條件(jian)下可(ke)以引起人和(he)多種動(dong)物發(fa)生胃腸道感(gan)染(ran)或(huo)尿(niao)道等多種局部組(zu)織器(qi)官感(gan)染(ran)。
大腸(chang)桿菌是(shi)動物腸(chang)道中(zhong)的正常寄居菌,其中(zhong)很小一部分(fen)在一定條件下引(yin)起(qi)疾病。大腸(chang)桿菌的血(xue)清型能(neng)夠(gou)引(yin)起(qi)人(ren)體(ti)或動物胃腸(chang)道感染,主要(yao)是(shi)由(you)特(te)定的菌毛抗(kang)原、致(zhi)病性毒素等感染引(yin)起(qi)的,除(chu)胃腸(chang)道感染以外,還會引(yin)起(qi)尿(niao)道感染、關(guan)節(jie)炎(yan)、腦膜炎(yan)以及(ji)敗血(xue)型感染等。
目前(qian)國際公(gong)認(ren)的(de)分類(lei),主(zhu)要有(you)六個種類(lei)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌,即能夠致(zhi)使(shi)(shi)胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)感染(ran)的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)致(zhi)病性(xing)(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(EPEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)產(chan)毒素性(xing)(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(ETEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)侵襲(xi)性(xing)(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(EIEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)出血性(xing)(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(EHEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)集聚性(xing)(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(EAEC)以及近年(nian)來發現的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)產(chan)志賀樣毒素同(tong)時具有(you)一(yi)定侵襲(xi)力(li)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(ESIES),另外,還有(you)能夠致(zhi)使(shi)(shi)尿道(dao)感染(ran)的(de)尿道(dao)致(zhi)病性(xing)(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(UPEC),以及最新命名的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道(dao)集聚性(xing)(xing)的(de)黏附大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(EAggEC)。
根據大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)的感染性(xing)狀能否產(chan)生溶(rong)血素和(he)有無溶(rong)血的能力,可將大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)分為兩(liang)大(da)(da)類:即溶(rong)血性(xing)的大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)和(he)非溶(rong)血性(xing)的大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)。
根據大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)在感染過程中能(neng)否產(chan)生腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)(de)能(neng)力,可(ke)將大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)分為兩大(da)(da)(da)(da)(da)(da)類:即產(chan)腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)非(fei)產(chan)腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)。產(chan)腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)是人和(he)多種動物的(de)(de)任何感染性腹(fu)瀉的(de)(de)重(zhong)要病原,鑒定產(chan)腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)主要是測定所分離大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)分泌的(de)(de)腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)(de)類型。除此之外,也可(ke)以根據大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)產(chan)生腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)(de)能(neng)力,結合(he)其(qi)對不同腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)的(de)(de)敏感性,而將大(da)(da)(da)(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)分型,稱為腸(chang)(chang)毒(du)素(su)(su)(su)(su)型。
大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)是(shi)短桿(gan)(gan)菌(jun)(jun),兩端呈(cheng)鈍(dun)圓(yuan)形,革蘭陰性。有(you)(you)時因環(huan)境不同,個別菌(jun)(jun)體出現近似球(qiu)桿(gan)(gan)狀(zhuang)或(huo)(huo)(huo)長(chang)絲狀(zhuang);大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)多是(shi)單一或(huo)(huo)(huo)兩個存在,但(dan)不會排(pai)列呈(cheng)長(chang)鏈形狀(zhuang);大(da)多數(shu)的(de)(de)大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)株具(ju)有(you)(you)莢膜或(huo)(huo)(huo)微莢膜結構,但(dan)是(shi)不能形成芽孢;多數(shu)大(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)株生(sheng)長(chang)有(you)(you)菌(jun)(jun)毛(mao),其(qi)中一些菌(jun)(jun)毛(mao)是(shi)針(zhen)對宿主及其(qi)他的(de)(de)一些組織或(huo)(huo)(huo)細胞具(ju)有(you)(you)黏附作用(yong)的(de)(de)宿主特(te)異性菌(jun)(jun)毛(mao)。
大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)的(de)生(sheng)化(hua)代謝非常(chang)活躍。大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)可(ke)以(yi)發(fa)(fa)酵葡萄糖產(chan)(chan)酸(suan)(suan)、產(chan)(chan)氣,個別菌(jun)(jun)(jun)株(zhu)不(bu)產(chan)(chan)氣,大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)還能發(fa)(fa)酵多(duo)種(zhong)碳水化(hua)合物,也(ye)可(ke)以(yi)利(li)用(yong)(yong)多(duo)種(zhong)有機酸(suan)(suan)鹽(yan)。大(da)腸桿菌(jun)(jun)(jun)在常(chang)用(yong)(yong)的(de)生(sheng)化(hua)特(te)性(xing)(xing)(xing)(xing)檢測(ce)項目中,甲基紅試(shi)驗(yan)呈陽性(xing)(xing)(xing)(xing),吲哚產(chan)(chan)生(sheng)和乳糖發(fa)(fa)酵是陽性(xing)(xing)(xing)(xing)(個別菌(jun)(jun)(jun)株(zhu)表(biao)現(xian)陰性(xing)(xing)(xing)(xing)),維(wei)-培試(shi)驗(yan)是陰性(xing)(xing)(xing)(xing),尿素酶和檸檬(meng)酸(suan)(suan)鹽(yan)利(li)用(yong)(yong)呈陰性(xing)(xing)(xing)(xing)(極個別菌(jun)(jun)(jun)株(zhu)表(biao)現(xian)陽性(xing)(xing)(xing)(xing)),硝酸(suan)(suan)鹽(yan)還原試(shi)驗(yan)表(biao)現(xian)陽性(xing)(xing)(xing)(xing),氧化(hua)酶表(biao)現(xian)陰性(xing)(xing)(xing)(xing),氧化(hua)-發(fa)(fa)酵試(shi)驗(yan)表(biao)現(xian)為F型。
對人(ren)(ren)和多種動(dong)物(wu)(wu)來講,由于(yu)病(bing)(bing)(bing)原大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)常常傾向具有一定的(de)(de)(de)(de)宿主特異性(xing)(xing),對人(ren)(ren)有致病(bing)(bing)(bing)作用(yong)的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)株常常是(shi)很少引起(qi)動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)感(gan)染,反之亦然,據(ju)此可將(jiang)病(bing)(bing)(bing)原大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)大(da)(da)致上將(jiang)其劃分為兩(liang)種:即人(ren)(ren)病(bing)(bing)(bing)原大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)和動(dong)物(wu)(wu)病(bing)(bing)(bing)原大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)。動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)致瀉性(xing)(xing)大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)已被(bei)明確的(de)(de)(de)(de)特征主要是(shi)類似于(yu)ETEC的(de)(de)(de)(de)菌(jun)(jun)株。UPEC是(shi)一群能(neng)夠引起(qi)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)(de)尿道感(gan)染最常見的(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)原大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)。尿道感(gan)染是(shi)很少獨立(li)存在(zai)于(yu)動(dong)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)病(bing)(bing)(bing)中的(de)(de)(de)(de)感(gan)染癥狀。
大(da)腸桿菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)發生(sheng)(sheng)與流行感(gan)染是呈世界性分布(bu)的(de)(de)(de)(de)(de),但(dan)大(da)腸桿菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)流行性還是存在(zai)一定的(de)(de)(de)(de)(de)區域(yu)分布(bu)特(te)征的(de)(de)(de)(de)(de)。這些(xie)區域(yu)分布(bu)的(de)(de)(de)(de)(de)特(te)征在(zai)人的(de)(de)(de)(de)(de)大(da)腸桿菌(jun)(jun)感(gan)染中表(biao)現(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)更明顯些(xie),最大(da)的(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)能是因為與區域(yu)間經濟(ji)條件和(he)社會衛(wei)生(sheng)(sheng)狀況等有一定聯系的(de)(de)(de)(de)(de)。
動物(wu)(wu)的大腸桿菌病可以(yi)發生在(zai)多種家畜、家禽、養殖經濟動物(wu)(wu)以(yi)及(ji)其他(ta)陸生動物(wu)(wu)和某些水產動物(wu)(wu),其中豬和雞是最為易(yi)感的,而且危(wei)害十分嚴重。
大腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)在(zai)動(dong)物(wu)群(qun)體(ti)間(jian)的感(gan)染的季節發(fa)(fa)病特征不(bu)是非常明(ming)顯(xian)。在(zai)一年四季豬均可發(fa)(fa)生,但只要(yao)是發(fa)(fa)生在(zai)豬的產(chan)仔期(qi)至(zhi)斷乳期(qi),這與豬的易感(gan)日齡相關聯。犢牛和羔(gao)羊(yang)多發(fa)(fa)生于冬季和春季。其他動(dong)物(wu)的大腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)感(gan)染在(zai)常年均有發(fa)(fa)生,季節性不(bu)明(ming)顯(xian)。
人(ren)(ren)的大(da)(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)病(bing)的主要傳(chuan)染源是因為在(zai)胃腸(chang)道感(gan)染患者的糞便(bian)中(zhong)有大(da)(da)量(liang)大(da)(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)病(bing)原菌(jun)排至體外(wai)構成的。大(da)(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)在(zai)人(ren)(ren)之間的傳(chuan)播途徑多(duo)是通過糞-口這(zhe)一傳(chuan)播途徑,在(zai)一定的條件(jian)下可(ke)引起大(da)(da)腸(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)病(bing)散發(fa)或流(liu)行。
食品中的(de)大腸(chang)桿菌(jun)進行(xing)快速準確的(de)檢測已成為了人們經常關注的(de)問題。下(xia)面闡述食品中的(de)大腸(chang)桿菌(jun)檢測的(de)方法及(ji)分析。
這種方(fang)法(fa)主(zhu)要(yao)是在44.5℃下(xia)的(de)培(pei)(pei)(pei)養基上進(jin)行(xing)大腸桿菌(jun)的(de)培(pei)(pei)(pei)養,該培(pei)(pei)(pei)養基含(han)有熒(ying)光(guang)底物(wu),需要(yao)培(pei)(pei)(pei)養24h。然后對熒(ying)光(guang)底物(wu)進(jin)行(xing)釋放,需要(yao)采用葡萄糖醛酸進(jin)行(xing),讓培(pei)(pei)(pei)養基能夠在紫外光(guang)的(de)照(zhao)射下(xia)發(fa)出熒(ying)光(guang)。采用這樣(yang)的(de)方(fang)式(shi)方(fang)法(fa),還可以(yi)進(jin)行(xing)統計學估計原來樣(yang)品中的(de)菌(jun)落(luo)。主(zhu)要(yao)步驟包括發(fa)酵(jiao)、分離培(pei)(pei)(pei)養、二次發(fa)酵(jiao)、顯微(wei)鏡觀察(cha)等。
該方法主要過程:加入(ru)10mL左右的無(wu)菌(jun)(jun)水(shui)于濾(lv)(lv)(lv)器中,然(ran)后摻(chan)入(ru)一些無(wu)菌(jun)(jun)水(shui)進(jin)行清潔濾(lv)(lv)(lv)器的內壁,再(zai)進(jin)行過濾(lv)(lv)(lv),將濾(lv)(lv)(lv)膜放在(zai)M-FC培(pei)養(yang)基中,兩者之間(jian)不能夠有氣(qi)泡,然(ran)后進(jin)行密封,存放溫度為(wei)44.5℃,存放時間(jian)約24h,直到(dao)大腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)的菌(jun)(jun)群(qun)變成(cheng)藍色或藍綠色。然(ran)后記錄數據,估(gu)算每(mei)一單位的水(shui)溶液菌(jun)(jun)群(qun)數量,然(ran)后進(jin)行大腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)量值的換算。
用無菌吸管吸取(qu)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)度樣品(pin)1mL,該樣品(pin)與乳(ru)糖膽鹽發酵類似,然(ran)后(hou)將其(qi)放(fang)入(ru)無菌培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)中(zhong),再(zai)加入(ru)溫度于45℃下的CDLJJD顯色培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基中(zhong)10mL的量(liang),并進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)中(zhong)溶(rong)液均(jun)勻(yun)混(hun)合(he),可以(yi)通過(guo)快速轉(zhuan)動培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)的方(fang)式,等(deng)溶(rong)液凝固以(yi)后(hou),加入(ru)5mL左右,然(ran)后(hou)快速搖晃(huang)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基,使(shi)其(qi)可以(yi)均(jun)勻(yun)覆蓋平板表(biao)面(mian),等(deng)其(qi)凝固以(yi)后(hou),翻轉(zhuan)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基,在溫度37℃中(zhong)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)24h左右,然(ran)后(hou)觀察其(qi)形態(tai),顏色等(deng)變化(hua)。除(chu)此之外,平行(xing)設置兩個稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)度培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)基,步驟(zou)是先稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)樣本,通過(guo)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)后(hou),微生物(wu)可以(yi)分散為(wei)(wei)單(dan)個細胞,然(ran)后(hou)進(jin)行(xing)一定環境條件下培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang),直到(dao)其(qi)長(chang)成菌落為(wei)(wei)止,然(ran)后(hou)進(jin)行(xing)計算(suan)大腸桿菌的數(shu)量(liang),通過(guo)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)度和樣本數(shu)量(liang)進(jin)行(xing)計算(suan)。
該分離技(ji)(ji)術(shu)(shu)的(de)主要原理是以磁(ci)(ci)珠(zhu)為載體(ti)(ti)和(he)抗(kang)(kang)體(ti)(ti),進(jin)行抗(kang)(kang)體(ti)(ti)和(he)磁(ci)(ci)珠(zhu)的(de)結合,然后通過磁(ci)(ci)力技(ji)(ji)術(shu)(shu)完成力學的(de)移(yi)動(dong),進(jin)而分離大腸(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)。與(yu)其他分離細菌(jun)(jun)的(de)方(fang)式相比(bi),這樣的(de)方(fang)式方(fang)法具有一定的(de)優點,該技(ji)(ji)術(shu)(shu)可以提(ti)升樣本中(zhong)病原性弧菌(jun)(jun)的(de)檢測(ce)成功率(lv),并(bing)且(qie)免(mian)疫磁(ci)(ci)珠(zhu)技(ji)(ji)術(shu)(shu)可以于不(bu)同(tong)菌(jun)(jun)種中(zhong)對不(bu)同(tong)的(de)微生(sheng)物進(jin)行處理,進(jin)而在很大程度上提(ti)高檢測(ce)效率(lv)。
主要是(shi)運用(yong)(yong)免(mian)疫自動(dong)化(hua)(hua)分(fen)析儀,該技(ji)術(shu)產生并運用(yong)(yong)于1970年。隨(sui)著(zhu)科(ke)技(ji)的發展和進步,自動(dong)化(hua)(hua)儀器(qi)檢測技(ji)術(shu)應(ying)用(yong)(yong)非(fei)常(chang)(chang)廣泛(fan),并且操作起來非(fei)常(chang)(chang)方(fang)便,可(ke)以節(jie)約很多時間,其受干擾的程度較小,可(ke)以節(jie)省人力物力的投入,也可(ke)以提高(gao)檢測的精確(que)度。在(zai)現階段的發展過程中,自動(dong)酶的免(mian)疫檢測體系的應(ying)用(yong)(yong)非(fei)常(chang)(chang)廣泛(fan)。
在(zai)近些年的(de)(de)(de)發展過程中(zhong),生(sheng)物(wu)(wu)(wu)發光技術(shu)(shu)應(ying)用(yong)(yong)很廣泛,是(shi)一種比較(jiao)快速(su)的(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)微生(sheng)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)技術(shu)(shu)。在(zai)活性細(xi)胞中(zhong),ATP是(shi)其常見(jian)的(de)(de)(de)能(neng)量代謝產,可(ke)(ke)(ke)以(yi)提(ti)供(gong)細(xi)胞生(sheng)理活動過程中(zhong)所需的(de)(de)(de)能(neng)量。并且,該(gai)(gai)(gai)技術(shu)(shu)可(ke)(ke)(ke)以(yi)在(zai)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)體內(nei)可(ke)(ke)(ke)以(yi)在(zai)一定范圍內(nei)保持一定的(de)(de)(de)含量。食品中(zhong)的(de)(de)(de)大(da)腸桿(gan)菌檢(jian)測(ce)(ce)技術(shu)(shu)可(ke)(ke)(ke)以(yi)采用(yong)(yong)熒(ying)(ying)光光度的(de)(de)(de)方(fang)法,因為生(sheng)物(wu)(wu)(wu)體發光的(de)(de)(de)原因是(shi)有熒(ying)(ying)光素酶的(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong),產生(sheng)了(le)發光的(de)(de)(de)效(xiao)果。該(gai)(gai)(gai)物(wu)(wu)(wu)質來(lai)源于北美的(de)(de)(de)螢火蟲體內(nei),可(ke)(ke)(ke)以(yi)催化熒(ying)(ying)光素的(de)(de)(de)氧化作(zuo)用(yong)(yong),不過,該(gai)(gai)(gai)物(wu)(wu)(wu)質性質不穩定,可(ke)(ke)(ke)以(yi)對熒(ying)(ying)光進行快速(su)分解。另外,該(gai)(gai)(gai)檢(jian)測(ce)(ce)技術(shu)(shu)結果獲得過程是(shi)非常快的(de)(de)(de),并且該(gai)(gai)(gai)設備攜帶方(fang)便,十(shi)分適用(yong)(yong)于現場檢(jian)測(ce)(ce)。
可(ke)引起腹瀉的致病性(xing)大腸桿菌(jun)、傷寒桿菌(jun)、霍亂弧菌(jun)等(deng)普通細(xi)菌(jun)繁殖體,80℃熱水需要(yao)(yao)5-10分鐘(zhong)、沸水需要(yao)(yao)2-5分鐘(zhong)才能殺滅。