大腸(chang)桿(gan)菌(jun)(Escherichia coli),又叫(jiao)大腸(chang)埃希氏菌(jun),Escherich在(zai)1885年發(fa)現的。大腸(chang)桿(gan)菌(jun)是條件(jian)(jian)致病(bing)菌(jun),在(zai)一定(ding)條件(jian)(jian)下可以(yi)引起人和多種動物發(fa)生胃腸(chang)道(dao)感(gan)染或尿道(dao)等多種局(ju)部組織器官感(gan)染。
大腸桿菌(jun)是動物腸道(dao)中(zhong)的正常(chang)寄(ji)居菌(jun),其中(zhong)很小(xiao)一(yi)部分(fen)在(zai)一(yi)定(ding)條件下引(yin)起(qi)疾(ji)病(bing)。大腸桿菌(jun)的血(xue)清型(xing)(xing)能夠引(yin)起(qi)人(ren)體或(huo)動物胃腸道(dao)感染,主要是由特定(ding)的菌(jun)毛抗原、致病(bing)性毒素等感染引(yin)起(qi)的,除胃腸道(dao)感染以外,還會引(yin)起(qi)尿道(dao)感染、關節(jie)炎、腦膜(mo)炎以及敗血(xue)型(xing)(xing)感染等。
目前國際公認的(de)(de)分類(lei),主要(yao)有六個(ge)種類(lei)的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun),即能夠(gou)致(zhi)使胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道感(gan)染的(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道致(zhi)病(bing)性的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(EPEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道產(chan)毒(du)素性的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(ETEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道侵(qin)襲(xi)性的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(EIEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道出血性的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(EHEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)集(ji)聚(ju)性的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(EAEC)以(yi)及近年來發現的(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)產(chan)志賀樣毒(du)素同時具有一定侵(qin)襲(xi)力的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(ESIES),另外,還(huan)有能夠(gou)致(zhi)使尿道感(gan)染的(de)(de)尿道致(zhi)病(bing)性的(de)(de)大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(UPEC),以(yi)及最新命(ming)名的(de)(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道集(ji)聚(ju)性的(de)(de)黏附大腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(EAggEC)。
根據大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)(jun)的感(gan)染性狀能否產生溶(rong)血素(su)和有無溶(rong)血的能力,可(ke)將大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)(jun)分(fen)為兩大(da)(da)類:即溶(rong)血性的大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)(jun)和非溶(rong)血性的大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)(jun)。
根據(ju)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)在感(gan)染過程中能(neng)否產(chan)生腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素的(de)能(neng)力,可將大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)分為兩大(da)(da)類(lei):即產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素性的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)和(he)(he)非產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素性的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)。產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素性的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)是(shi)人和(he)(he)多種(zhong)動物的(de)任(ren)何感(gan)染性腹瀉(xie)的(de)重要(yao)病原,鑒定(ding)產(chan)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素性的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)主要(yao)是(shi)測定(ding)所分離大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)分泌的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素的(de)類(lei)型(xing)。除此之(zhi)外,也可以根據(ju)大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)產(chan)生腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素的(de)能(neng)力,結合其對不同腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素的(de)敏感(gan)性,而將大(da)(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)分型(xing),稱為腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)毒素型(xing)。
大(da)腸(chang)桿菌(jun)是短桿菌(jun),兩(liang)端呈鈍圓形,革蘭陰性。有(you)時因環境不同,個別菌(jun)體出(chu)現(xian)近似球桿狀(zhuang)或長絲狀(zhuang);大(da)腸(chang)桿菌(jun)多是單一或兩(liang)個存在,但不會排列呈長鏈形狀(zhuang);大(da)多數(shu)的(de)大(da)腸(chang)桿菌(jun)菌(jun)株具有(you)莢膜或微莢膜結構,但是不能形成芽孢;多數(shu)大(da)腸(chang)桿菌(jun)菌(jun)株生(sheng)長有(you)菌(jun)毛(mao),其中(zhong)一些菌(jun)毛(mao)是針對宿主及其他的(de)一些組(zu)織或細(xi)胞(bao)具有(you)黏附(fu)作用(yong)的(de)宿主特(te)異(yi)性菌(jun)毛(mao)。
大(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)的生化代謝非常(chang)活躍。大(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)可(ke)以發(fa)酵(jiao)葡萄(tao)糖產(chan)(chan)酸(suan)、產(chan)(chan)氣,個(ge)別(bie)菌(jun)(jun)(jun)株不產(chan)(chan)氣,大(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)還能發(fa)酵(jiao)多種碳水化合物,也可(ke)以利(li)用(yong)(yong)多種有(you)機(ji)酸(suan)鹽。大(da)腸桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)在常(chang)用(yong)(yong)的生化特性(xing)(xing)檢測項(xiang)目中,甲基(ji)紅試(shi)驗呈陽(yang)性(xing)(xing),吲(yin)哚產(chan)(chan)生和乳糖發(fa)酵(jiao)是陽(yang)性(xing)(xing)(個(ge)別(bie)菌(jun)(jun)(jun)株表(biao)現陰(yin)(yin)性(xing)(xing)),維(wei)-培試(shi)驗是陰(yin)(yin)性(xing)(xing),尿(niao)素酶和檸檬酸(suan)鹽利(li)用(yong)(yong)呈陰(yin)(yin)性(xing)(xing)(極個(ge)別(bie)菌(jun)(jun)(jun)株表(biao)現陽(yang)性(xing)(xing)),硝酸(suan)鹽還原試(shi)驗表(biao)現陽(yang)性(xing)(xing),氧化酶表(biao)現陰(yin)(yin)性(xing)(xing),氧化-發(fa)酵(jiao)試(shi)驗表(biao)現為F型。
對(dui)人和多種動(dong)物來講(jiang),由于病(bing)原大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)常(chang)(chang)(chang)常(chang)(chang)(chang)傾向具有(you)一(yi)定的(de)宿主(zhu)特(te)異性,對(dui)人有(you)致(zhi)病(bing)作用的(de)菌(jun)株常(chang)(chang)(chang)常(chang)(chang)(chang)是(shi)很少引起動(dong)物的(de)感(gan)染,反之亦然(ran),據此可(ke)將(jiang)病(bing)原大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)大(da)(da)致(zhi)上將(jiang)其劃分為兩(liang)種:即(ji)人病(bing)原大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)和動(dong)物病(bing)原大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)。動(dong)物的(de)致(zhi)瀉性大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)已被明確(que)的(de)特(te)征主(zhu)要是(shi)類似(si)于ETEC的(de)菌(jun)株。UPEC是(shi)一(yi)群(qun)能(neng)夠引起人的(de)尿道(dao)感(gan)染最常(chang)(chang)(chang)見的(de)病(bing)原大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)。尿道(dao)感(gan)染是(shi)很少獨(du)立存在于動(dong)物的(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿菌(jun)病(bing)中的(de)感(gan)染癥狀。
大腸桿(gan)菌的(de)發生(sheng)與流(liu)行(xing)感(gan)染是呈世(shi)界性(xing)分(fen)(fen)布(bu)的(de),但大腸桿(gan)菌的(de)流(liu)行(xing)性(xing)還是存在一(yi)定(ding)的(de)區域(yu)分(fen)(fen)布(bu)特征(zheng)的(de)。這(zhe)些區域(yu)分(fen)(fen)布(bu)的(de)特征(zheng)在人的(de)大腸桿(gan)菌感(gan)染中表現的(de)更明顯些,最(zui)大的(de)可(ke)能是因為(wei)與區域(yu)間(jian)經(jing)濟條件和社會衛生(sheng)狀況(kuang)等有(you)一(yi)定(ding)聯系的(de)。
動(dong)(dong)物(wu)的(de)大腸桿(gan)菌病可以發生(sheng)在多(duo)種家畜、家禽、養殖經濟動(dong)(dong)物(wu)以及其他陸生(sheng)動(dong)(dong)物(wu)和某些水產動(dong)(dong)物(wu),其中(zhong)豬和雞是最為(wei)易感的(de),而且危害十分嚴(yan)重。
大(da)腸桿(gan)菌在動物群體間的(de)感染的(de)季節發(fa)病特(te)征不是非常明顯。在一(yi)年(nian)四季豬均(jun)可(ke)發(fa)生,但只(zhi)要是發(fa)生在豬的(de)產仔期(qi)至斷乳期(qi),這與豬的(de)易感日齡相(xiang)關聯。犢牛和羔羊多(duo)發(fa)生于冬(dong)季和春季。其他(ta)動物的(de)大(da)腸桿(gan)菌感染在常年(nian)均(jun)有發(fa)生,季節性不明顯。
人的(de)大(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)病(bing)的(de)主要(yao)傳(chuan)染源是因為在(zai)胃腸道感染患者(zhe)的(de)糞便中有大(da)量大(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)病(bing)原菌(jun)(jun)排至體外(wai)構成的(de)。大(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)在(zai)人之(zhi)間(jian)的(de)傳(chuan)播(bo)途徑(jing)多是通過糞-口這一傳(chuan)播(bo)途徑(jing),在(zai)一定的(de)條(tiao)件下可引起大(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)病(bing)散發或流行。
食(shi)品中的大腸桿(gan)菌進(jin)行(xing)快速準確的檢測已成為了人們經(jing)常關(guan)注(zhu)的問題(ti)。下面闡(chan)述食(shi)品中的大腸桿(gan)菌檢測的方法及分(fen)析(xi)。
這種方(fang)法主(zhu)要是在44.5℃下的培(pei)(pei)養(yang)(yang)基上(shang)進行大腸(chang)桿菌的培(pei)(pei)養(yang)(yang),該培(pei)(pei)養(yang)(yang)基含有熒光(guang)底(di)物(wu),需要培(pei)(pei)養(yang)(yang)24h。然(ran)后對熒光(guang)底(di)物(wu)進行釋(shi)放,需要采用葡萄糖(tang)醛(quan)酸進行,讓培(pei)(pei)養(yang)(yang)基能(neng)夠在紫外光(guang)的照射下發出熒光(guang)。采用這樣(yang)(yang)的方(fang)式方(fang)法,還可以進行統計(ji)學估計(ji)原來樣(yang)(yang)品中的菌落(luo)。主(zhu)要步驟包括發酵(jiao)、分離培(pei)(pei)養(yang)(yang)、二次(ci)發酵(jiao)、顯(xian)微鏡觀(guan)察等。
該方法(fa)主要過(guo)程:加入(ru)10mL左右(you)的無(wu)菌(jun)水于(yu)濾(lv)(lv)器中,然后(hou)摻入(ru)一些無(wu)菌(jun)水進(jin)行(xing)(xing)清潔濾(lv)(lv)器的內壁,再(zai)進(jin)行(xing)(xing)過(guo)濾(lv)(lv),將濾(lv)(lv)膜(mo)放(fang)(fang)在(zai)M-FC培養基中,兩者之(zhi)間不(bu)能夠有氣泡(pao),然后(hou)進(jin)行(xing)(xing)密封,存放(fang)(fang)溫度為(wei)44.5℃,存放(fang)(fang)時間約24h,直到大(da)(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)的菌(jun)群變(bian)成(cheng)藍(lan)色或藍(lan)綠色。然后(hou)記錄數(shu)據,估算每一單(dan)位(wei)的水溶液菌(jun)群數(shu)量,然后(hou)進(jin)行(xing)(xing)大(da)(da)腸桿(gan)(gan)菌(jun)量值的換算。
用無菌吸管吸取稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)度樣品1mL,該樣品與乳糖(tang)膽鹽(yan)發酵類似,然(ran)后(hou)(hou)(hou)(hou)將其(qi)放(fang)入(ru)無菌培養(yang)(yang)(yang)皿中,再加入(ru)溫(wen)度于45℃下的CDLJJD顯色培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji)中10mL的量(liang)(liang),并進行(xing)(xing)培養(yang)(yang)(yang)皿中溶(rong)液均勻混合,可以(yi)(yi)通(tong)過快(kuai)速轉動培養(yang)(yang)(yang)皿的方式,等(deng)(deng)溶(rong)液凝(ning)固以(yi)(yi)后(hou)(hou)(hou)(hou),加入(ru)5mL左右,然(ran)后(hou)(hou)(hou)(hou)快(kuai)速搖晃培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji),使(shi)其(qi)可以(yi)(yi)均勻覆(fu)蓋平(ping)(ping)板表面,等(deng)(deng)其(qi)凝(ning)固以(yi)(yi)后(hou)(hou)(hou)(hou),翻轉培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji),在溫(wen)度37℃中培養(yang)(yang)(yang)24h左右,然(ran)后(hou)(hou)(hou)(hou)觀察其(qi)形態,顏色等(deng)(deng)變化。除此(ci)之外(wai),平(ping)(ping)行(xing)(xing)設置兩個稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)度培養(yang)(yang)(yang)基(ji)(ji),步驟是先(xian)稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)樣本,通(tong)過稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)后(hou)(hou)(hou)(hou),微生物可以(yi)(yi)分散為單個細胞(bao),然(ran)后(hou)(hou)(hou)(hou)進行(xing)(xing)一定(ding)環境條件下培養(yang)(yang)(yang),直到其(qi)長成(cheng)菌落為止,然(ran)后(hou)(hou)(hou)(hou)進行(xing)(xing)計(ji)算大(da)腸桿菌的數(shu)量(liang)(liang),通(tong)過稀(xi)(xi)釋(shi)(shi)度和樣本數(shu)量(liang)(liang)進行(xing)(xing)計(ji)算。
該分(fen)離技術的(de)(de)(de)主要原理是以(yi)磁珠(zhu)為載體(ti)和(he)抗(kang)體(ti),進行(xing)(xing)抗(kang)體(ti)和(he)磁珠(zhu)的(de)(de)(de)結合,然(ran)后通過(guo)磁力技術完成力學的(de)(de)(de)移動(dong),進而(er)分(fen)離大腸桿菌(jun)(jun)(jun)。與其他分(fen)離細菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)式(shi)相比(bi),這(zhe)樣的(de)(de)(de)方(fang)(fang)式(shi)方(fang)(fang)法具有一(yi)定的(de)(de)(de)優(you)點,該技術可(ke)以(yi)提升樣本中病原性弧菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)檢測(ce)成功(gong)率(lv),并且免疫磁珠(zhu)技術可(ke)以(yi)于不同菌(jun)(jun)(jun)種中對不同的(de)(de)(de)微生(sheng)物進行(xing)(xing)處理,進而(er)在很(hen)大程(cheng)度上提高檢測(ce)效率(lv)。
主要(yao)是(shi)運(yun)(yun)用(yong)(yong)免(mian)疫(yi)自(zi)動化分析(xi)儀(yi),該技(ji)術(shu)產生并(bing)運(yun)(yun)用(yong)(yong)于1970年。隨(sui)著科技(ji)的發(fa)展(zhan)和進步,自(zi)動化儀(yi)器檢(jian)測技(ji)術(shu)應用(yong)(yong)非(fei)(fei)常(chang)廣泛,并(bing)且操作起(qi)來非(fei)(fei)常(chang)方便(bian),可以(yi)節約很多時(shi)間,其受(shou)干擾(rao)的程度較(jiao)小,可以(yi)節省人力物力的投(tou)入,也可以(yi)提高檢(jian)測的精(jing)確度。在現階段(duan)的發(fa)展(zhan)過程中,自(zi)動酶的免(mian)疫(yi)檢(jian)測體系的應用(yong)(yong)非(fei)(fei)常(chang)廣泛。
在近些年的(de)(de)(de)(de)發(fa)展過(guo)(guo)程中,生物(wu)(wu)發(fa)光(guang)技(ji)術(shu)應用(yong)很廣泛,是一(yi)種比較快(kuai)速的(de)(de)(de)(de)檢測微(wei)生物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)技(ji)術(shu)。在活(huo)性(xing)細胞中,ATP是其(qi)常見的(de)(de)(de)(de)能(neng)量代謝產,可(ke)以(yi)(yi)提供細胞生理(li)活(huo)動(dong)過(guo)(guo)程中所(suo)需的(de)(de)(de)(de)能(neng)量。并且,該技(ji)術(shu)可(ke)以(yi)(yi)在生物(wu)(wu)體(ti)內可(ke)以(yi)(yi)在一(yi)定范(fan)圍(wei)內保持一(yi)定的(de)(de)(de)(de)含量。食品中的(de)(de)(de)(de)大(da)腸桿菌(jun)檢測技(ji)術(shu)可(ke)以(yi)(yi)采用(yong)熒光(guang)光(guang)度的(de)(de)(de)(de)方法,因為生物(wu)(wu)體(ti)發(fa)光(guang)的(de)(de)(de)(de)原因是有熒光(guang)素酶(mei)的(de)(de)(de)(de)作用(yong),產生了發(fa)光(guang)的(de)(de)(de)(de)效果(guo)(guo)。該物(wu)(wu)質來源于(yu)北美的(de)(de)(de)(de)螢火蟲(chong)體(ti)內,可(ke)以(yi)(yi)催化(hua)熒光(guang)素的(de)(de)(de)(de)氧化(hua)作用(yong),不(bu)過(guo)(guo),該物(wu)(wu)質性(xing)質不(bu)穩定,可(ke)以(yi)(yi)對熒光(guang)進行快(kuai)速分解(jie)。另外,該檢測技(ji)術(shu)結果(guo)(guo)獲得過(guo)(guo)程是非(fei)常快(kuai)的(de)(de)(de)(de),并且該設備攜帶方便,十(shi)分適用(yong)于(yu)現場檢測。
可(ke)引起腹(fu)瀉的致病性大腸(chang)桿(gan)(gan)菌、傷寒桿(gan)(gan)菌、霍亂弧菌等普(pu)通細菌繁殖體(ti),80℃熱水(shui)需(xu)要5-10分鐘、沸水(shui)需(xu)要2-5分鐘才能殺滅。