大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)(jun)(Escherichia coli),又叫大(da)腸(chang)埃希氏(shi)菌(jun)(jun)(jun),Escherich在(zai)(zai)1885年發(fa)現的。大(da)腸(chang)桿菌(jun)(jun)(jun)是(shi)條(tiao)件(jian)致病菌(jun)(jun)(jun),在(zai)(zai)一定條(tiao)件(jian)下可(ke)以引起人和(he)多種動物(wu)發(fa)生胃腸(chang)道感(gan)染或尿(niao)道等多種局部組織器官(guan)感(gan)染。
大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)是(shi)(shi)動物腸(chang)(chang)(chang)道(dao)中的正常(chang)寄居(ju)菌(jun),其中很小(xiao)一(yi)部分在一(yi)定條件下引起(qi)疾病。大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)的血清型能夠引起(qi)人體(ti)或動物胃腸(chang)(chang)(chang)道(dao)感染(ran),主要是(shi)(shi)由特定的菌(jun)毛抗原(yuan)、致病性毒素(su)等(deng)感染(ran)引起(qi)的,除胃腸(chang)(chang)(chang)道(dao)感染(ran)以外,還會(hui)引起(qi)尿道(dao)感染(ran)、關節炎(yan)、腦膜(mo)炎(yan)以及敗血型感染(ran)等(deng)。
目前國際公認的(de)分類,主(zhu)要有(you)六個(ge)種類的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun),即能夠(gou)致使胃(wei)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道感染的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道致病性(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EPEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道產毒(du)素(su)性(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(ETEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道侵(qin)襲性(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EIEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道出(chu)血性(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EHEC)、腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)集聚性(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EAEC)以(yi)及近年來發現的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)產志賀(he)樣毒(du)素(su)同(tong)時具(ju)有(you)一定侵(qin)襲力的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(ESIES),另(ling)外,還有(you)能夠(gou)致使尿(niao)道感染的(de)尿(niao)道致病性(xing)的(de)大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(UPEC),以(yi)及最(zui)新命名的(de)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)道集聚性(xing)的(de)黏(nian)附大(da)腸(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(EAggEC)。
根據大腸(chang)桿菌的感染性狀能(neng)否產生(sheng)溶(rong)血(xue)素和(he)有無溶(rong)血(xue)的能(neng)力,可(ke)將大腸(chang)桿菌分為兩(liang)大類(lei):即溶(rong)血(xue)性的大腸(chang)桿菌和(he)非溶(rong)血(xue)性的大腸(chang)桿菌。
根(gen)據(ju)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)在感(gan)染過(guo)程中(zhong)能否產生腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)能力(li),可(ke)將大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)分(fen)(fen)(fen)為(wei)兩大(da)(da)類:即產腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)和(he)非產腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)。產腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)是(shi)人和(he)多種動物的(de)(de)(de)(de)任何感(gan)染性腹瀉的(de)(de)(de)(de)重要病原,鑒定產腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)性的(de)(de)(de)(de)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)主要是(shi)測定所分(fen)(fen)(fen)離大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)分(fen)(fen)(fen)泌的(de)(de)(de)(de)腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)類型(xing)。除此之外,也可(ke)以根(gen)據(ju)大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)產生腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)能力(li),結合其對不同腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)的(de)(de)(de)(de)敏感(gan)性,而將大(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)(gan)菌(jun)(jun)分(fen)(fen)(fen)型(xing),稱為(wei)腸(chang)(chang)毒(du)(du)(du)素(su)(su)(su)(su)(su)型(xing)。
大(da)腸桿菌(jun)(jun)是(shi)短桿菌(jun)(jun),兩端呈鈍圓形,革蘭陰性。有(you)時因環境不(bu)同,個(ge)別菌(jun)(jun)體出現近似球桿狀(zhuang)或長(chang)絲狀(zhuang);大(da)腸桿菌(jun)(jun)多(duo)是(shi)單一(yi)或兩個(ge)存(cun)在,但不(bu)會排列(lie)呈長(chang)鏈形狀(zhuang);大(da)多(duo)數(shu)的(de)(de)大(da)腸桿菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)株具有(you)莢膜(mo)或微莢膜(mo)結構(gou),但是(shi)不(bu)能形成芽孢;多(duo)數(shu)大(da)腸桿菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)株生長(chang)有(you)菌(jun)(jun)毛,其中一(yi)些(xie)菌(jun)(jun)毛是(shi)針對宿(su)主及其他的(de)(de)一(yi)些(xie)組織或細胞具有(you)黏附作用的(de)(de)宿(su)主特異性菌(jun)(jun)毛。
大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)的生化(hua)代(dai)謝非常活(huo)躍。大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)可(ke)以(yi)發(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)葡萄糖產酸(suan)、產氣(qi),個別(bie)菌(jun)株(zhu)不產氣(qi),大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)還能發(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)多種碳水化(hua)合物,也可(ke)以(yi)利用(yong)多種有機酸(suan)鹽。大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)菌(jun)在(zai)常用(yong)的生化(hua)特性檢測項目中,甲基紅試(shi)驗呈(cheng)陽(yang)性,吲哚產生和(he)乳糖發(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)是陽(yang)性(個別(bie)菌(jun)株(zhu)表現陰性),維-培(pei)試(shi)驗是陰性,尿素酶(mei)和(he)檸檬酸(suan)鹽利用(yong)呈(cheng)陰性(極個別(bie)菌(jun)株(zhu)表現陽(yang)性),硝酸(suan)鹽還原試(shi)驗表現陽(yang)性,氧化(hua)酶(mei)表現陰性,氧化(hua)-發(fa)(fa)酵(jiao)(jiao)試(shi)驗表現為F型。
對(dui)(dui)人和(he)多(duo)種(zhong)動(dong)物來(lai)講,由于(yu)病(bing)(bing)(bing)原大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)常(chang)(chang)常(chang)(chang)傾向具(ju)有(you)一定(ding)的(de)宿主特(te)異性,對(dui)(dui)人有(you)致(zhi)病(bing)(bing)(bing)作用(yong)的(de)菌(jun)株常(chang)(chang)常(chang)(chang)是(shi)很少引起動(dong)物的(de)感染(ran)(ran),反之亦(yi)然,據此(ci)可將病(bing)(bing)(bing)原大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)大致(zhi)上將其劃分為兩種(zhong):即人病(bing)(bing)(bing)原大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)和(he)動(dong)物病(bing)(bing)(bing)原大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)。動(dong)物的(de)致(zhi)瀉(xie)性大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)已被明確的(de)特(te)征(zheng)主要(yao)是(shi)類似(si)于(yu)ETEC的(de)菌(jun)株。UPEC是(shi)一群(qun)能夠(gou)引起人的(de)尿道感染(ran)(ran)最(zui)常(chang)(chang)見的(de)病(bing)(bing)(bing)原大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)。尿道感染(ran)(ran)是(shi)很少獨立(li)存在于(yu)動(dong)物的(de)大腸(chang)(chang)(chang)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)病(bing)(bing)(bing)中(zhong)的(de)感染(ran)(ran)癥狀。
大(da)(da)腸(chang)桿菌的(de)(de)發生與流行感染(ran)是呈世界性分(fen)布的(de)(de),但大(da)(da)腸(chang)桿菌的(de)(de)流行性還(huan)是存在(zai)(zai)一定的(de)(de)區(qu)域分(fen)布特征的(de)(de)。這些區(qu)域分(fen)布的(de)(de)特征在(zai)(zai)人的(de)(de)大(da)(da)腸(chang)桿菌感染(ran)中表現的(de)(de)更(geng)明顯些,最大(da)(da)的(de)(de)可能是因(yin)為與區(qu)域間(jian)經(jing)濟條(tiao)件和(he)社會衛生狀況等有一定聯系的(de)(de)。
動物的大腸桿菌病可以發生在多種(zhong)家畜、家禽、養殖經濟(ji)動物以及其他(ta)陸生動物和(he)某些(xie)水產動物,其中豬和(he)雞是(shi)最(zui)為易感(gan)的,而(er)且危害十分(fen)嚴重。
大腸桿(gan)菌(jun)在(zai)(zai)(zai)動物群體(ti)間的(de)(de)感染的(de)(de)季(ji)節發病特征(zheng)不是非常(chang)明顯。在(zai)(zai)(zai)一年(nian)四季(ji)豬(zhu)均(jun)可(ke)發生(sheng)(sheng),但只要是發生(sheng)(sheng)在(zai)(zai)(zai)豬(zhu)的(de)(de)產仔期(qi)至(zhi)斷乳(ru)期(qi),這(zhe)與(yu)豬(zhu)的(de)(de)易感日齡相關聯。犢牛和(he)羔羊多發生(sheng)(sheng)于冬季(ji)和(he)春季(ji)。其他(ta)動物的(de)(de)大腸桿(gan)菌(jun)感染在(zai)(zai)(zai)常(chang)年(nian)均(jun)有發生(sheng)(sheng),季(ji)節性不明顯。
人的大腸桿菌(jun)(jun)病(bing)的主(zhu)要(yao)傳(chuan)(chuan)染源(yuan)是(shi)(shi)因為在胃腸道感染患者(zhe)的糞(fen)便中有大量大腸桿菌(jun)(jun)病(bing)原菌(jun)(jun)排至體(ti)外(wai)構成的。大腸桿菌(jun)(jun)在人之間的傳(chuan)(chuan)播(bo)途徑(jing)多是(shi)(shi)通過糞(fen)-口這一傳(chuan)(chuan)播(bo)途徑(jing),在一定的條(tiao)件下可引起大腸桿菌(jun)(jun)病(bing)散(san)發或流行(xing)。
食品(pin)中的大(da)(da)腸桿(gan)菌進行(xing)快速準確的檢測已成為了人們經常關注(zhu)的問(wen)題。下面(mian)闡述食品(pin)中的大(da)(da)腸桿(gan)菌檢測的方(fang)法及分析。
這種方法(fa)主要(yao)是(shi)在44.5℃下(xia)的培(pei)養(yang)(yang)(yang)基上(shang)進(jin)(jin)行大腸桿菌的培(pei)養(yang)(yang)(yang),該培(pei)養(yang)(yang)(yang)基含有熒(ying)光(guang)底物(wu),需要(yao)培(pei)養(yang)(yang)(yang)24h。然后對熒(ying)光(guang)底物(wu)進(jin)(jin)行釋(shi)放,需要(yao)采用葡萄糖醛(quan)酸進(jin)(jin)行,讓(rang)培(pei)養(yang)(yang)(yang)基能夠在紫外(wai)光(guang)的照射下(xia)發出(chu)熒(ying)光(guang)。采用這樣(yang)的方式方法(fa),還可以進(jin)(jin)行統計(ji)學估計(ji)原來樣(yang)品中的菌落。主要(yao)步驟包括發酵(jiao)、分離培(pei)養(yang)(yang)(yang)、二次發酵(jiao)、顯(xian)微鏡觀察等。
該方法主要(yao)過程:加入10mL左右的(de)無(wu)菌水于濾(lv)器中(zhong),然(ran)后(hou)(hou)摻入一些無(wu)菌水進(jin)行清潔濾(lv)器的(de)內壁,再(zai)進(jin)行過濾(lv),將濾(lv)膜放在M-FC培養基中(zhong),兩(liang)者之間不能夠有氣泡(pao),然(ran)后(hou)(hou)進(jin)行密封,存放溫度(du)為44.5℃,存放時間約(yue)24h,直到大腸(chang)桿(gan)菌的(de)菌群變成藍(lan)色或藍(lan)綠色。然(ran)后(hou)(hou)記錄數據,估算(suan)每(mei)一單位的(de)水溶液菌群數量(liang),然(ran)后(hou)(hou)進(jin)行大腸(chang)桿(gan)菌量(liang)值的(de)換算(suan)。
用無(wu)菌吸管吸取稀(xi)釋度(du)樣(yang)品(pin)(pin)1mL,該樣(yang)品(pin)(pin)與乳糖膽鹽(yan)發(fa)酵(jiao)類似,然(ran)后將其放入(ru)無(wu)菌培(pei)養(yang)皿中(zhong),再加(jia)入(ru)溫度(du)于45℃下(xia)的(de)(de)(de)CDLJJD顯色(se)(se)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中(zhong)10mL的(de)(de)(de)量(liang),并進(jin)行培(pei)養(yang)皿中(zhong)溶(rong)液(ye)均(jun)(jun)勻(yun)混合(he),可(ke)(ke)以通過(guo)快速轉(zhuan)動培(pei)養(yang)皿的(de)(de)(de)方式,等(deng)溶(rong)液(ye)凝(ning)固(gu)以后,加(jia)入(ru)5mL左右(you),然(ran)后快速搖晃培(pei)養(yang)基(ji)(ji),使其可(ke)(ke)以均(jun)(jun)勻(yun)覆(fu)蓋平(ping)板表面,等(deng)其凝(ning)固(gu)以后,翻轉(zhuan)培(pei)養(yang)基(ji)(ji),在溫度(du)37℃中(zhong)培(pei)養(yang)24h左右(you),然(ran)后觀察(cha)其形(xing)態,顏(yan)色(se)(se)等(deng)變化。除(chu)此(ci)之外,平(ping)行設置兩個稀(xi)釋度(du)培(pei)養(yang)基(ji)(ji),步(bu)驟是先稀(xi)釋樣(yang)本,通過(guo)稀(xi)釋后,微生物可(ke)(ke)以分散為(wei)單個細胞,然(ran)后進(jin)行一定(ding)環(huan)境條(tiao)件下(xia)培(pei)養(yang),直(zhi)到其長成菌落為(wei)止,然(ran)后進(jin)行計算大(da)腸桿菌的(de)(de)(de)數量(liang),通過(guo)稀(xi)釋度(du)和樣(yang)本數量(liang)進(jin)行計算。
該(gai)分離(li)技(ji)術(shu)的(de)主要原(yuan)理(li)是以磁珠(zhu)為(wei)載體(ti)和(he)抗體(ti),進(jin)行(xing)(xing)抗體(ti)和(he)磁珠(zhu)的(de)結合,然后通過(guo)磁力技(ji)術(shu)完成(cheng)力學的(de)移(yi)動,進(jin)而(er)分離(li)大(da)腸(chang)桿菌。與(yu)其他分離(li)細菌的(de)方式相比,這樣(yang)的(de)方式方法(fa)具有一定的(de)優點,該(gai)技(ji)術(shu)可(ke)以提升樣(yang)本中病原(yuan)性(xing)弧菌的(de)檢測(ce)成(cheng)功率,并且免(mian)疫磁珠(zhu)技(ji)術(shu)可(ke)以于(yu)不同(tong)菌種(zhong)中對不同(tong)的(de)微(wei)生物進(jin)行(xing)(xing)處理(li),進(jin)而(er)在很(hen)大(da)程度上(shang)提高檢測(ce)效(xiao)率。
主要是運用(yong)(yong)免疫(yi)自(zi)動化分析(xi)儀,該(gai)技術(shu)產生并(bing)運用(yong)(yong)于1970年。隨著科技的(de)(de)發展和進步,自(zi)動化儀器檢測(ce)技術(shu)應用(yong)(yong)非常(chang)廣泛,并(bing)且操作起來非常(chang)方便,可(ke)以(yi)節約很多時間,其受干擾的(de)(de)程度較(jiao)小(xiao),可(ke)以(yi)節省人力物力的(de)(de)投入(ru),也可(ke)以(yi)提高檢測(ce)的(de)(de)精確(que)度。在現階(jie)段(duan)的(de)(de)發展過程中,自(zi)動酶(mei)的(de)(de)免疫(yi)檢測(ce)體系的(de)(de)應用(yong)(yong)非常(chang)廣泛。
在(zai)(zai)近些年的(de)發展過(guo)程(cheng)(cheng)中(zhong),生(sheng)(sheng)(sheng)物發光技(ji)(ji)術(shu)應(ying)用(yong)很廣泛,是(shi)一(yi)種比較快速(su)的(de)檢(jian)測微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物的(de)技(ji)(ji)術(shu)。在(zai)(zai)活(huo)(huo)性細胞(bao)中(zhong),ATP是(shi)其常見的(de)能量(liang)代謝產,可以提供細胞(bao)生(sheng)(sheng)(sheng)理活(huo)(huo)動過(guo)程(cheng)(cheng)中(zhong)所需的(de)能量(liang)。并(bing)且,該(gai)技(ji)(ji)術(shu)可以在(zai)(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)物體(ti)(ti)內可以在(zai)(zai)一(yi)定范(fan)圍內保持一(yi)定的(de)含(han)量(liang)。食品(pin)中(zhong)的(de)大腸桿(gan)菌檢(jian)測技(ji)(ji)術(shu)可以采(cai)用(yong)熒光光度的(de)方(fang)(fang)法,因(yin)為生(sheng)(sheng)(sheng)物體(ti)(ti)發光的(de)原因(yin)是(shi)有熒光素酶(mei)的(de)作用(yong),產生(sheng)(sheng)(sheng)了發光的(de)效(xiao)果。該(gai)物質來源于(yu)北美的(de)螢火(huo)蟲體(ti)(ti)內,可以催化熒光素的(de)氧化作用(yong),不(bu)過(guo),該(gai)物質性質不(bu)穩定,可以對熒光進行快速(su)分(fen)解(jie)。另外(wai),該(gai)檢(jian)測技(ji)(ji)術(shu)結(jie)果獲(huo)得(de)過(guo)程(cheng)(cheng)是(shi)非(fei)常快的(de),并(bing)且該(gai)設備攜帶方(fang)(fang)便,十分(fen)適用(yong)于(yu)現場檢(jian)測。
可引(yin)起腹瀉的(de)致病性大腸桿菌(jun)(jun)、傷寒桿菌(jun)(jun)、霍亂(luan)弧菌(jun)(jun)等普通細菌(jun)(jun)繁殖體,80℃熱(re)水(shui)需(xu)要(yao)5-10分鐘、沸水(shui)需(xu)要(yao)2-5分鐘才(cai)能殺(sha)滅(mie)。