沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)一(yi)種(zhong)常(chang)見的(de)食源性(xing)致病菌(jun)(jun)(jun)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)鑒定的(de)傳(chuan)統方法(fa)主要是(shi)根據形態學特征(zheng)、培養特征(zheng)、生(sheng)理生(sheng)化特征(zheng)、抗原特征(zheng)、噬菌(jun)(jun)(jun)體特征(zheng)等。1885年(nian)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)等在霍亂(luan)流(liu)行時(shi)分(fen)離到豬霍亂(luan)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),故定名為沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)屬。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)屬有的(de)專對(dui)人類致病,有的(de)只對(dui)動物致病,也有對(dui)人和動物都致病。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)病是(shi)指(zhi)由(you)各(ge)種(zhong)類型沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)所引(yin)起(qi)的(de)對(dui)人類、家(jia)畜以及(ji)野生(sheng)禽獸不同形式的(de)總稱(cheng)。感(gan)染沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)人或帶(dai)菌(jun)(jun)(jun)者的(de)糞便污染食品,可使人發生(sheng)食物中毒。據統計(ji)在世界各(ge)國的(de)種(zhong)類細菌(jun)(jun)(jun)性(xing)食物中毒中,沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)引(yin)起(qi)的(de)食物中毒常(chang)列榜(bang)首。我國內(nei)陸(lu)地(di)區也以沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)為首位(wei)。
沙門氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)病的(de)(de)(de)病原體(ti)。屬腸桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)科,革(ge)蘭氏(shi)陰(yin)性(xing)腸道桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)。已發現的(de)(de)(de)近一千種(或菌(jun)(jun)(jun)(jun)株)。按其抗(kang)原成分(fen),可分(fen)為(wei)甲(jia)、乙(yi)(yi)、丙(bing)、丁、戊等(deng)基本菌(jun)(jun)(jun)(jun)組。其中與人體(ti)疾病有關的(de)(de)(de)主要(yao)有甲(jia)組的(de)(de)(de)副傷(shang)(shang)寒甲(jia)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun),乙(yi)(yi)組的(de)(de)(de)副傷(shang)(shang)寒乙(yi)(yi)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)鼠傷(shang)(shang)寒桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun),丙(bing)組的(de)(de)(de)副傷(shang)(shang)寒丙(bing)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)豬(zhu)霍亂(luan)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun),丁組的(de)(de)(de)傷(shang)(shang)寒桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)腸炎桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)等(deng)。除傷(shang)(shang)寒桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)、副傷(shang)(shang)寒甲(jia)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)(he)副傷(shang)(shang)寒乙(yi)(yi)桿(gan)菌(jun)(jun)(jun)(jun)引(yin)起(qi)人類(lei)的(de)(de)(de)疾病外,大多(duo)數僅能引(yin)起(qi)家畜、鼠類(lei)和(he)(he)禽類(lei)等(deng)動物(wu)的(de)(de)(de)疾病,但有時也可污(wu)染(ran)人類(lei)的(de)(de)(de)食(shi)物(wu)而引(yin)起(qi)食(shi)物(wu)中毒(du)。
沙門(men)(men)氏菌(jun)在水中不易繁殖,但可生存2-3周,冰箱中可生存3-4個月,在自然環境的糞便中可存活1-2個月。沙門(men)(men)氏菌(jun)最適繁殖溫度(du)為37℃,在20℃以(yi)上即能大量繁殖,因此,低(di)溫儲(chu)存食品是一項重(zhong)要預防措施。
菌(jun)體大(da)小(0.6~0.9)×(1~3)微米無(wu)芽(ya)(ya)(ya)胞,一般無(wu)莢膜,除雞(ji)白痢沙門(men)氏(shi)菌(jun)和(he)雞(ji)傷寒(han)沙門(men)氏(shi)菌(jun)外,大(da)多(duo)有(you)周身(shen)鞭毛(mao)。營養要(yao)求不(bu)(bu)高,分(fen)離培養常采(cai)用腸道選擇鑒(jian)(jian)別培養基。生(sheng)化(hua)反應對本(ben)屬菌(jun)的鑒(jian)(jian)別具有(you)重要(yao)參考意義(見(jian)表)。不(bu)(bu)液化(hua)明膠,不(bu)(bu)分(fen)解尿素,不(bu)(bu)產(chan)(chan)生(sheng)吲哚,不(bu)(bu)發酵乳糖(tang)和(he)蔗糖(tang),能發酵葡萄糖(tang)、甘露(lu)醇、麥芽(ya)(ya)(ya)糖(tang)和(he)衛芽(ya)(ya)(ya)糖(tang),大(da)多(duo)產(chan)(chan)酸(suan)產(chan)(chan)氣,少數只產(chan)(chan)酸(suan)不(bu)(bu)產(chan)(chan)氣。VP試驗陰(yin)性,有(you)賴氨(an)酸(suan)脫羧酶。DNA的G+C含(han)量為50~53%。對熱抵抗(kang)力(li)不(bu)(bu)強,在(zai)60℃15分(fen)鐘可被(bei)殺死。在(zai)水(shui)中存活2~3周。在(zai)5%的石炭酸(suan)中,5分(fen)鐘死亡(wang)。
本屬菌按生(sheng)化反應(ying)分為4個亞(ya)屬。亞(ya)屬Ⅰ是生(sheng)化反應(ying)典型(xing)的和最常(chang)見的沙門(men)氏(shi)(shi)菌;亞(ya)屬Ⅱ和Ⅳ是生(sheng)化反應(ying)不典型(xing)的沙門(men)氏(shi)(shi)菌;亞(ya)屬Ⅲ是亞(ya)利(li)桑那沙門(men)氏(shi)(shi)菌。
沙門氏(shi)菌(jun)具有復(fu)雜的抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)結構(gou),一(yi)般可分為菌(jun)體(O)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)、鞭毛(H)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)和表面(Vi)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)3種。
生(sheng)化反應很活潑,能分解多種(zhong)糖類和醇。
1)需氧及兼(jian)性厭氧菌。
2)在普通瓊脂培養基上生長良好,培養24h后,形成中等大小、圓形、表(biao)面光(guang)滑、無色半(ban)透明、邊(bian)緣整齊的菌落,其菌落特(te)征亦與大腸桿菌相似(無糞臭味)。
3)鑒(jian)別培養基(麥康凱、SS、伊紅美(mei)藍):一般無色菌落。
4)三糖(tang)鐵瓊(qiong)脂斜(xie)面(mian):斜(xie)面(mian)為紅色,底部變(bian)黑(hei)并產氣。
1)發酵葡萄糖,麥芽糖,甘(gan)露(lu)醇(chun)和山梨醇(chun)產氣;
2)不發(fa)酵(jiao)乳糖(tang)、蔗糖(tang)和側金盞花醇;
3)不(bu)產(chan)吲(yin)哚、V-P反應(ying)陰性(xing);
4)不水解尿素和(he)對苯丙氨酸不脫氨。
傷(shang)寒(han)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌、雞傷(shang)寒(han)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌及一部分(fen)雞白(bai)痢沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌發(fa)酵糖不產氣,大多數(shu)雞白(bai)痢沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌不發(fa)酵麥芽糖;除(chu)雞白(bai)痢沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌、豬傷(shang)寒(han)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌、甲型副(fu)傷(shang)寒(han)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌、傷(shang)寒(han)沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌和仙臺沙門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌等(deng)外,均能利用(yong)枸櫞酸鹽。
沙(sha)門氏(shi)菌具(ju)有復雜的抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)結(jie)構,一(yi)般沙(sha)門氏(shi)菌具(ju)有菌體(O)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)、鞭毛(H)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)和表面抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)(莢(jia)膜(mo)或包膜(mo)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan))三種(zhong)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)。
肉及其制品(pin)的沙門氏菌(jun)檢出率美國(guo)為(wei)20%-25%、英國(guo)為(wei)9.9%、日(ri)本檢查進(jin)口家禽的污(wu)染率為(wei)10.3%,國(guo)內肉類沙門氏菌(jun)檢出率在1.1%-39.5%。
中國蛋及其制品(pin)沙(sha)門(men)氏菌(jun)檢出率為3.9%-43.7%,由于吃蛋引起鼠傷寒病(bing)(bing)的病(bing)(bing)例報告逐漸有(you)增(zeng)加的趨勢(shi)。
食品在(zai)加工、運輸(shu)、出售(shou)過程中(zhong)往往被沙門(men)氏菌污染。沙門(men)氏菌在(zai)糞(fen)便、土壤、食品、水中(zhong)可生存5個月(yue)至2年之久。
恢復(fu)期(qi)患者和(he)無癥狀的帶(dai)菌者也是常見的傳(chuan)染源。
廣泛分布于(yu)(yu)自然界,常常寄居在人和(he)動物體(ti)內,特別是(shi)家禽、家畜及寵物的腸道中(zhong)。主要(yao)污(wu)染的食(shi)品有:肉和(he)肉制(zhi)品、蛋和(he)蛋制(zhi)品、奶和(he)奶制(zhi)品等。由(you)于(yu)(yu)沙門氏(shi)菌不分解(jie)蛋白質,食(shi)物被其污(wu)染后表(biao)面看(kan)起來(lai)似乎(hu)并沒有變化(hua).
沙門氏菌感染癥(zheng)為人畜(chu)共患(huan)感染性(xing)疾病(bing),主要(yao)由食用遭受(shou)污(wu)染的食物導致,是(shi)許多國家食物中毒的重要(yao)病(bing)源。
典型癥狀包括發(fa)熱、惡心、嘔吐、腹瀉及腹部絞痛等癥狀,通(tong)常在(zai)發(fa)熱后72小(xiao)時內會好(hao)轉。嬰(ying)兒(er)、老年人(ren)、免疫功能低下的患者則可能因沙(sha)門氏菌進入血液而出(chu)現嚴(yan)重且危及生命的菌血癥,少數還(huan)會合并腦膜炎(yan)或骨髓炎(yan)。
一般(ban)沙門氏菌(jun)造(zao)成的腸胃(wei)炎不需要給予抗生素治療;而(er)以補充水分與電解(jie)質為主;但(dan)對于新生兒、免疫功能低下患者及特(te)殊傷員;則需要視(shi)情況紿(dai)予抗生素治療。
1、餐(can)前、便后(hou)、接觸食物(wu)前、接觸動物(wu)或生蛋后(hou)應仔細洗凈雙手。
2、處理生食(shi)和熟食(shi)的砧板要分開。
3、食物要(yao)熟透再吃(chi)(尤其是雞蛋與(yu)家禽(qin)類)。
4、非現做現吃的食物應以保鮮(xian)膜包覆后放(fang)進冰箱保存(cun),再次食用前(qian)應加熱或煮熟(shu)。
5、撲滅并阻(zu)隔蒼蠅等病(bing)媒。被蒼蠅沾染(ran)、過期或腐敗的不潔食物(wu)均應丟(diu)棄,切勿(wu)食用。
6、水(shui)塔應經常(chang)清(qing)洗、消毒。
7、旅(lv)行或野營時(shi)的飲(yin)用水應煮沸并消毒。
8、如(ru)有嘔吐、腹瀉或發熱等癥(zheng)狀,應盡快就(jiu)醫。
沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)是(shi)美國(guo)(guo)(guo)食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)(du)(du)致死的(de)(de)(de)(de)(de)主要(yao)(yao)原因(yin)。美國(guo)(guo)(guo)人(ren)對這(zhe)(zhe)(zhe)種病(bing)菌(jun)(jun)(jun)一(yi)(yi)點(dian)都不(bu)(bu)陌生(sheng),每年(nian)(nian)全國(guo)(guo)(guo)大(da)約報(bao)告40000例沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)染(ran)(ran)(ran)(ran)病(bing)例。但實(shi)際的(de)(de)(de)(de)(de)感(gan)染(ran)(ran)(ran)(ran)人(ren)數可(ke)(ke)能(neng)要(yao)(yao)達20倍以上,因(yin)為許多(duo)輕(qing)型病(bing)人(ren)可(ke)(ke)能(neng)未(wei)(wei)確診,據不(bu)(bu)完全統計,每年(nian)(nian)大(da)約有1000人(ren)死于急性沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)染(ran)(ran)(ran)(ran)。但是(shi),以前各州爆發的(de)(de)(de)(de)(de)疫(yi)情幾乎都與人(ren)們吃(chi)(chi)了(le)染(ran)(ran)(ran)(ran)上沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)肉類(lei)(lei)、蛋(dan)(dan)(dan)(dan)類(lei)(lei)、乳類(lei)(lei)有關(guan),但迄今(jin)為止,很少聽說吃(chi)(chi)蔬果大(da)面積受(shou)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)甚(shen)至(zhi)在(zai)人(ren)群中(zhong)引(yin)發大(da)疫(yi)情的(de)(de)(de)(de)(de)。對此,周(zhou)福生(sheng)教授解釋說,這(zhe)(zhe)(zhe)可(ke)(ke)能(neng)是(shi)西(xi)(xi)紅柿在(zai)生(sheng)長的(de)(de)(de)(de)(de)過程中(zhong),由于空(kong)氣中(zhong)紫(zi)外線不(bu)(bu)夠強烈(lie),植物(wu)在(zai)灌(guan)溉過程或因(yin)土壤中(zhong)含有沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),這(zhe)(zhe)(zhe)樣才(cai)使(shi)西(xi)(xi)紅柿的(de)(de)(de)(de)(de)表皮上沾染(ran)(ran)(ran)(ran)了(le)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),加上不(bu)(bu)少人(ren)有生(sheng)食(shi)西(xi)(xi)紅柿的(de)(de)(de)(de)(de)習(xi)慣(guan),如果沒有清(qing)洗干凈,就(jiu)完全有可(ke)(ke)能(neng)發生(sheng)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)感(gan)染(ran)(ran)(ran)(ran)。不(bu)(bu)光是(shi)食(shi)用(yong)西(xi)(xi)紅柿,其(qi)他(ta)瓜果蔬菜也(ye)一(yi)(yi)樣。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)主要(yao)(yao)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)肉類(lei)(lei)食(shi)品(pin),魚、禽(qin)、奶、蛋(dan)(dan)(dan)(dan)類(lei)(lei)食(shi)品(pin)也(ye)可(ke)(ke)受(shou)此菌(jun)(jun)(jun)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)(du)(du)全年(nian)(nian)都可(ke)(ke)發生(sheng),吃(chi)(chi)了(le)未(wei)(wei)煮(zhu)透的(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)、死牲畜肉或在(zai)屠宰后其(qi)他(ta)環節(jie)污(wu)(wu)染(ran)(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)牲畜肉是(shi)引(yin)起沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)食(shi)物(wu)中(zhong)毒(du)(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)主要(yao)(yao)原因(yin)。有食(shi)品(pin)專家指出美國(guo)(guo)(guo)人(ren)吃(chi)(chi)雞(ji)(ji)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)的(de)(de)(de)(de)(de)習(xi)慣(guan)與國(guo)(guo)(guo)人(ren)不(bu)(bu)同(tong),他(ta)們喜(xi)歡(huan)吃(chi)(chi)半熟的(de)(de)(de)(de)(de)雞(ji)(ji)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)甚(shen)至(zhi)是(shi)生(sheng)雞(ji)(ji)蛋(dan)(dan)(dan)(dan),所(suo)以一(yi)(yi)旦雞(ji)(ji)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)里(li)含有沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),感(gan)染(ran)(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)幾率就(jiu)比較高。“在(zai)國(guo)(guo)(guo)內,生(sheng)雞(ji)(ji)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)里(li)含有沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)其(qi)實(shi)并不(bu)(bu)奇(qi)怪,只不(bu)(bu)過國(guo)(guo)(guo)人(ren)喜(xi)歡(huan)將雞(ji)(ji)蛋(dan)(dan)(dan)(dan)煮(zhu)熟吃(chi)(chi),這(zhe)(zhe)(zhe)樣就(jiu)大(da)大(da)減少了(le)感(gan)染(ran)(ran)(ran)(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)幾率。”
由(you)沙門氏菌引起(qi)的(de)食品(pin)中(zhong)毒癥(zheng)狀(zhuang)主要(yao)有(you)惡心、嘔吐、腹(fu)痛、頭痛、畏寒(han)和(he)腹(fu)瀉(xie)等(deng),還伴有(you)乏力(li)、肌肉酸痛、視覺模糊、中(zhong)等(deng)程度(du)發熱、躁(zao)動不安和(he)嗜(shi)睡,延續(xu)時間2~3d,平均(jun)致死率為4.1%。其主要(yao)原因是由(you)于攝入了含(han)有(you)大(da)量(liang)沙門氏菌屬(shu)的(de)非寄(ji)主專一性菌種或血清(qing)型的(de)食品(pin)所引起(qi)的(de)。在攝入含(han)毒食品(pin)之后.癥(zheng)狀(zhuang)一般在12~14h內(nei)出現,有(you)些(xie)潛伏期較長。
防止(zhi)沙(sha)門氏菌(jun)污染食品(pin);控(kong)制食品(pin)中沙(sha)門氏菌(jun)的繁殖;加熱以徹底殺滅(mie)病(bing)原菌(jun)。
沙門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)不耐(nai)高溫,食(shi)物的中心溫度達(da)70℃以上(shang),持續5分鐘一(yi)(yi)般都可以殺死包括沙門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)等常見食(shi)源性(xing)致病(bing)菌(jun)(jun)。家(jia)庭(ting)中一(yi)(yi)般的熱(re)處(chu)理烹調方式都可有效殺滅該菌(jun)(jun)。
稱取25g(mL)樣(yang)品放入盛有225 mL BPW的(de)無菌均(jun)(jun)質(zhi)杯中,以(yi)8000 r/min~10 000 r/min均(jun)(jun)質(zhi)1min~2min,或(huo)置(zhi)于盛有225 mL BPW的(de)無菌均(jun)(jun)質(zhi)袋(dai)中,用(yong)拍擊式均(jun)(jun)質(zhi)器拍打(da)1min~2min。若樣(yang)品為液態,不需(xu)要均(jun)(jun)質(zhi),振蕩混勻。如需(xu)測定pH值(zhi),用(yong)1mol/mL無菌NaOH或(huo)HCl調pH至6.8±0.2。無菌操作(zuo)將樣(yang)品轉至500mL錐形(xing)瓶中,如使用(yong)均(jun)(jun)質(zhi)袋(dai),可直接進行(xing)培(pei)養,于36 ℃±1℃培(pei)養8h~18h。
如(ru)為冷凍產品,應在45℃以下不超過15min,或2℃~5℃不超過18h解(jie)凍。
輕輕搖動培養過的(de)樣品混(hun)合物,移(yi)取(qu)1mL,轉種于(yu)10mL TTB內,于(yu)42℃±1℃培養18h~24h。同時(shi),另取(qu)1mL,轉種于(yu)10 mL SC內,于(yu)36℃±1℃培養18h~24h。
分別(bie)用接種環(huan)(huan)取增(zeng)菌(jun)液1環(huan)(huan),劃線(xian)接種于一(yi)個BS瓊(qiong)(qiong)(qiong)脂平(ping)(ping)板(ban)和一(yi)個XLD瓊(qiong)(qiong)(qiong)脂平(ping)(ping)板(ban)(或HE瓊(qiong)(qiong)(qiong)脂平(ping)(ping)板(ban)或沙門氏菌(jun)屬(shu)顯(xian)色培養(yang)基平(ping)(ping)板(ban))。于36℃±1℃分別(bie)培養(yang)18h~24h(XLD瓊(qiong)(qiong)(qiong)脂平(ping)(ping)板(ban)、HE瓊(qiong)(qiong)(qiong)脂平(ping)(ping)板(ban)、沙門氏菌(jun)屬(shu)顯(xian)色培養(yang)基平(ping)(ping)板(ban))或40h~48h (BS瓊(qiong)(qiong)(qiong)脂平(ping)(ping)板(ban)),觀察各(ge)個平(ping)(ping)板(ban)上(shang)生長的(de)菌(jun)落,各(ge)個平(ping)(ping)板(ban)上(shang)的(de)菌(jun)落特(te)征見(jian)表1。
表 1 沙門(men)氏菌(jun)屬在不(bu)同(tong)選擇(ze)性瓊脂平板上的菌(jun)落特征
選擇性瓊脂平板 沙門氏菌
BS 瓊脂 菌落(luo)為黑色有金屬光澤、棕褐(he)色或(huo)(huo)灰(hui)(hui)色,菌落(luo)周圍(wei)培(pei)養(yang)基(ji)可(ke)呈黑色或(huo)(huo)棕色;有些(xie)菌株形成灰(hui)(hui)綠(lv)色的菌落(luo),周圍(wei)培(pei)養(yang)基(ji)不變。
HE 瓊脂 藍綠色(se)(se)(se)或藍色(se)(se)(se),多數菌(jun)落中心黑色(se)(se)(se)或幾(ji)乎全黑色(se)(se)(se);有些菌(jun)株(zhu)為黃色(se)(se)(se),中心黑色(se)(se)(se)或幾(ji)乎全黑色(se)(se)(se)。
XLD 瓊脂 菌(jun)落呈(cheng)粉紅色(se)(se)(se),帶或(huo)不(bu)帶黑(hei)色(se)(se)(se)中(zhong)心(xin),有(you)些(xie)菌(jun)株(zhu)可(ke)呈(cheng)現大的帶光澤的黑(hei)色(se)(se)(se)中(zhong)心(xin),或(huo)呈(cheng)現全部黑(hei)色(se)(se)(se)的菌(jun)落;有(you)些(xie)菌(jun)株(zhu)為黃色(se)(se)(se)菌(jun)落,帶或(huo)不(bu)帶黑(hei)色(se)(se)(se)中(zhong)心(xin)。
沙門(men)氏菌屬顯(xian)色培養 按照顯(xian)色培養基(ji)的說明進行判定(ding)。
自19世紀(ji)后期,沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)首次(ci)被(bei)鑒定(ding)為(wei)(wei)人(ren)(ren)(ren)類的(de)(de)(de)一(yi)種病(bing)(bing)(bing)原(yuan)以來,檢(jian)(jian)測方(fang)(fang)法(fa)學都(dou)是建立(li)在(zai)采取感染病(bing)(bing)(bing)人(ren)(ren)(ren)的(de)(de)(de)糞(fen)便或血液作為(wei)(wei)臨床病(bing)(bing)(bing)料的(de)(de)(de)基礎(chu)上(shang)(shang)。此(ci)后的(de)(de)(de)60年(nian)間,用于(yu)(yu)從(cong)食(shi)(shi)品(pin)中(zhong)(zhong)分離沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)實質(zhi)上(shang)(shang)與那些(xie)(xie)(xie)用于(yu)(yu)臨床病(bing)(bing)(bing)料的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)是相同的(de)(de)(de)。但至少有(you)三個因(yin)素限制了(le)用于(yu)(yu)臨床病(bing)(bing)(bing)料的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)應用在(zai)食(shi)(shi)品(pin)分析上(shang)(shang)。第(di)(di)一(yi),通(tong)(tong)常(chang),沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)含(han)量(liang)水(shui)(shui)平在(zai)污染食(shi)(shi)品(pin)中(zhong)(zhong)比有(you)感染病(bing)(bing)(bing)人(ren)(ren)(ren)的(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)料中(zhong)(zhong)要低很(hen)多(duo);第(di)(di)二(er),食(shi)(shi)品(pin)本(ben)身的(de)(de)(de)性(xing)質(zhi)會干擾病(bing)(bing)(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測,例(li)如,某些(xie)(xie)(xie)食(shi)(shi)品(pin)中(zhong)(zhong)固(gu)有(you)菌(jun)(jun)群可能處在(zai)一(yi)個很(hen)高的(de)(de)(de)水(shui)(shui)平,從(cong)而影響(xiang)特定(ding)細菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)選擇性(xing)分離和(he)(he)鑒定(ding);第(di)(di)三,與臨床病(bing)(bing)(bing)料不(bu)同的(de)(de)(de)是,經過加工的(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin),由于(yu)(yu)加熱(re)、干燥、高含(han)鹽量(liang)、酸(suan)和(he)(he)冷凍等因(yin)素的(de)(de)(de)作用,其中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)受到(dao)了(le)尚不(bu)致(zhi)(zhi)命的(de)(de)(de)損傷或稱(cheng)“致(zhi)(zhi)傷”。這(zhe)就形成了(le)一(yi)個具有(you)不(bu)同生長特性(xing)的(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)群。這(zhe)種現象對那些(xie)(xie)(xie)希望從(cong)食(shi)(shi)物(wu)樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)分離出(chu)沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)食(shi)(shi)品(pin)分析家來說有(you)很(hen)大影響(xiang),因(yin)為(wei)(wei)在(zai)選擇培養基上(shang)(shang)直接培養“致(zhi)(zhi)傷”的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)通(tong)(tong)常(chang)是以細菌(jun)(jun)死亡和(he)(he)試(shi)驗失敗而告終(zhong)。為(wei)(wei)克服這(zhe)些(xie)(xie)(xie)困(kun)難(nan),人(ren)(ren)(ren)們建立(li)了(le)一(yi)種簡單的(de)(de)(de)微生物(wu)增殖步驟(zou),專門(men)(men)(men)針對以食(shi)(shi)品(pin)為(wei)(wei)傳播載體(ti)(ti)的(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)原(yuan)。雖(sui)然這(zhe)些(xie)(xie)(xie)方(fang)(fang)法(fa)本(ben)身證明是可靠的(de)(de)(de),但卻很(hen)費力、耗時(shi)(shi),需要4~7天才能完(wan)成。因(yin)此(ci),在(zai)需要及時(shi)(shi)、快速(su)評價食(shi)(shi)品(pin)中(zhong)(zhong)微生物(wu)的(de)(de)(de)安(an)全(quan)性(xing)時(shi)(shi),通(tong)(tong)常(chang)不(bu)被(bei)采用。隨著(zhu)DNA和(he)(he)抗體(ti)(ti)技(ji)術的(de)(de)(de)發(fa)展,近10~15年(nian)間發(fa)展了(le)無數(shu)改進的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa),其中(zhong)(zhong)許多(duo)可以在(zai)48h內檢(jian)(jian)出(chu)沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun),這(zhe)些(xie)(xie)(xie)方(fang)(fang)法(fa)通(tong)(tong)稱(cheng)為(wei)(wei)快速(su)檢(jian)(jian)測。
利(li)用(yong)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)反應的(de)(de)(de)顯著特異(yi)性,來(lai)進(jin)行細菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)鑒別和血清學(xue)定(ding)型(xing),已(yi)有半個(ge)多(duo)世紀的(de)(de)(de)歷史。細菌(jun)(jun)菌(jun)(jun)體(ti)(ti)(ti)或(huo)鞭毛抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)(de)特異(yi)性抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)存在(zai),使(shi)得人們可(ke)(ke)以建立一些快(kuai)速方(fang)法(fa)(fa)來(lai)檢測(ce)(ce)以食品為載體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)病原(yuan)。已(yi)經建立的(de)(de)(de)沙(sha)門氏菌(jun)(jun)免(mian)疫學(xue)檢測(ce)(ce)方(fang)法(fa)(fa)有許多(duo)種,大致可(ke)(ke)分為以酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ELISA),熒(ying)光(guang)(guang)(guang)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)染(ran)色(免(mian)疫熒(ying)光(guang)(guang)(guang)法(fa)(fa)),同(tong)位(wei)(wei)素標(biao)(biao)記抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(放射(she)免(mian)疫試驗)為基礎的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)及其它多(duo)種以抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)為基礎,利(li)用(yong)乳(ru)膠凝(ning)集、免(mian)疫傳感器、免(mian)疫擴散及免(mian)疫色譜技術的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)。但常規中最廣泛采用(yong)的(de)(de)(de)是(shi)以雙位(wei)(wei)點ELISA技術即(ji)(ji)夾心ELISA為基礎的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)。此(ci)法(fa)(fa)改進(jin)后(hou)用(yong)有放射(she)活性的(de)(de)(de)同(tong)位(wei)(wei)素替代(dai)標(biao)(biao)記抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti),概(gai)括(kuo)地說,是(shi)指以固定(ding)在(zai)固體(ti)(ti)(ti)基質(zhi)上的(de)(de)(de)“捕(bu)(bu)捉(zhuo)”抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)來(lai)捕(bu)(bu)捉(zhuo)目標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan),經洗滌除去(qu)未結合的(de)(de)(de)成分,加(jia)入第(di)二種酶(mei)標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti),此(ci)者結合在(zai)捕(bu)(bu)捉(zhuo)到的(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)(de)不同(tong)位(wei)(wei)點上,第(di)二次洗滌后(hou)加(jia)入酶(mei)作(zuo)用(yong)基質(zhi),并令其與(yu)顏色成分反應,然后(hou)用(yong)分光(guang)(guang)(guang)光(guang)(guang)(guang)度法(fa)(fa)即(ji)(ji)很容(rong)易檢測(ce)(ce)到目標(biao)(biao)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)。采用(yong)微(wei)量滴定(ding)板作(zuo)為固態基質(zhi)使(shi)反應形式標(biao)(biao)準化,并促成其自動化。
黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)(gun)等(deng)(deng)人(ren)首次在(zai)國內口岸(an)系統應用(yong)微量(liang)(liang)板(ban)ELISA法(fa)(fa)(Salmonelletest1)對(dui)進(jin)(jin)出口動物產品(pin)(魚(yu)粉、肉骨粉等(deng)(deng))進(jin)(jin)行(xing)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢測。該法(fa)(fa)采用(yong)預(yu)先包被(bei)了(le)(le)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(A-E群)單(dan)克隆抗體(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)微量(liang)(liang)板(ban),加入(ru)經增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理(li)的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin),反應后再(zai)加入(ru)一(yi)定的(de)(de)(de)(de)(de)指示(shi)劑(ji),作(zuo)用(yong)畢后用(yong)酶(mei)標儀測定OD值來判定結(jie)果。食物樣(yang)(yang)(yang)品(pin)經適(shi)當的(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理(li),也可用(yong)此(ci)法(fa)(fa)進(jin)(jin)行(xing)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢測。ELISA法(fa)(fa)檢出沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)極(ji)限范圍在(zai)105~106個細(xi)胞/ml,因此(ci),要(yao)得(de)出可靠的(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)果,食物樣(yang)(yang)(yang)品(pin)首先必需(xu)進(jin)(jin)行(xing)預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)、選(xuan)擇性增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),通常(chang)還(huan)要(yao)在(zai)含有D-甘露糖的(de)(de)(de)(de)(de)肉湯(tang)(M肉湯(tang))中(zhong)進(jin)(jin)行(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),以促(cu)進(jin)(jin)鞭(bian)毛發育(yu)。總的(de)(de)(de)(de)(de)來說,標準(zhun)的(de)(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)備(bei),約需(xu)要(yao)經過40~48h的(de)(de)(de)(de)(de)孵育(yu)才能完(wan)成(cheng)。黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)(gun)等(deng)(deng)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)微量(liang)(liang)板(ban)ELISA法(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)過程分(fen)三步,共耗時(shi)24h:①選(xuan)用(yong)營(ying)養(yang)(yang)肉湯(tang)進(jin)(jin)行(xing)預(yu)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(6h),使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)“致傷”、冷(leng)凍的(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)復蘇。②使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)選(xuan)擇性培養(yang)(yang)基RV進(jin)(jin)行(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(14h),使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)大(da)量(liang)(liang)繁(fan)殖,同時(shi)抑制(zhi)其(qi)(qi)它雜菌(jun)(jun)(jun)(jun)生長(chang)。③使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)營(ying)養(yang)(yang)肉湯(tang)(蛋(dan)白(bai)胨水)進(jin)(jin)行(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(4h),使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)數量(liang)(liang)大(da)大(da)增(zeng)加。比上(shang)述(shu)標準(zhun)的(de)(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)過程縮(suo)短(duan)了(le)(le)一(yi)半的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)(jian)。ELISA方(fang)法(fa)(fa)本身,則(ze)僅需(xu)要(yao)大(da)約2h而已(其(qi)(qi)中(zhong)30min是(shi)操作(zuo)時(shi)間(jian)(jian)(jian),90min是(shi)孵育(yu)時(shi)間(jian)(jian)(jian))。相(xiang)比之下(xia),黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)(gun)等(deng)(deng)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)可在(zai)27h內完(wan)成(cheng),比上(shang)述(shu)方(fang)法(fa)(fa)縮(suo)短(duan)了(le)(le)一(yi)半的(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)(jian),頗值得(de)推廣應用(yong)。最新式的(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)免疫(yi)學檢測法(fa)(fa),利用(yong)經特異性抗體(ti)敏化的(de)(de)(de)(de)(de)免疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)(pian)為基礎。幾(ji)滴樣(yang)(yang)(yang)品(pin)加到卡(ka)片(pian)(pian)上(shang),結(jie)果可以直(zhi)接(jie)用(yong)肉眼讀出。免疫(yi)色(se)譜卡(ka)片(pian)(pian)極(ji)易(yi)操作(zuo),且(qie)由于無需(xu)要(yao)特殊設備(bei),很適(shi)合小型實驗室使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)用(yong)。盡管(guan)卡(ka)片(pian)(pian)檢測法(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)一(yi)樣(yang)(yang)(yang)需(xu)要(yao)對(dui)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)進(jin)(jin)行(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理(li),但它(卡(ka)片(pian)(pian)法(fa)(fa))本身通常(chang)需(xu)時(shi)不超過10min,如果采用(yong)黎(li)兆(zhao)(zhao)滾(gun)(gun)等(deng)(deng)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)制(zhi)備(bei)法(fa)(fa),則(ze)可使(shi)(shi)(shi)(shi)(shi)操作(zuo)時(shi)間(jian)(jian)(jian)更(geng)為縮(suo)短(duan)。
細(xi)(xi)(xi)胞核(he)(he)酸DNA和RNA是(shi)唯一(yi)(yi)一(yi)(yi)類可(ke)(ke)(ke)以(yi)(yi)攜帶信息(xi)的(de)(de)(de)(de)(de)大分(fen)子(zi)。由(you)于(yu)(yu)所有的(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞都含(han)有這(zhe)種分(fen)子(zi),可(ke)(ke)(ke)以(yi)(yi)利用它(ta)作(zuo)為(wei)(wei)(wei)檢(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)靶。標(biao)靶通常是(shi)一(yi)(yi)個(ge)特異性(xing)(xing)(xing)核(he)(he)酸序(xu)列(lie),它(ta)可(ke)(ke)(ke)通過以(yi)(yi)補體(ti)(ti)(ti)核(he)(he)酸分(fen)子(zi)作(zuo)為(wei)(wei)(wei)探針來(lai)(lai)檢(jian)出。與免(mian)疫學方(fang)法(fa)(fa)相(xiang)似,探針也需(xu)要(yao)(yao)加(jia)附適當(dang)的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)記,如(ru)放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)素、酶或(huo)發(fa)(fa)光的(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)識物(wu)。Fitts等人在食品(pin)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)(ce)中引入了第一(yi)(yi)代(dai)DNA—RNA雜交(jiao)技術(shu),此(ci)(ci)(ci)法(fa)(fa)應用的(de)(de)(de)(de)(de)探針含(han)有用放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)素標(biao)記的(de)(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)DNA片段,其敏感性(xing)(xing)(xing)高(gao),經(jing)大約(yue)48h的(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)步驟后,檢(jian)測(ce)(ce)極限(xian)可(ke)(ke)(ke)達108個(ge)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)/ml,但(dan)由(you)于(yu)(yu)要(yao)(yao)使用放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)素,只能(neng)在專門(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)實驗(yan)室應用,此(ci)(ci)(ci)方(fang)法(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)優點都被抵(di)消了。為(wei)(wei)(wei)此(ci)(ci)(ci),以(yi)(yi)核(he)(he)酸雜交(jiao)為(wei)(wei)(wei)基礎的(de)(de)(de)(de)(de)第二代(dai)技術(shu)—比色計已發(fa)(fa)展(zhan)起來(lai)(lai)。這(zhe)種方(fang)法(fa)(fa)依賴于(yu)(yu)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)核(he)(he)糖(tang)體(ti)(ti)(ti)RNA(rRNA)—核(he)(he)糖(tang)體(ti)(ti)(ti)發(fa)(fa)育過程中儲(chu)存的(de)(de)(de)(de)(de)核(he)(he)酸成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)。核(he)(he)糖(tang)體(ti)(ti)(ti)是(shi)細(xi)(xi)(xi)胞蛋白質合成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)器的(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)(yi)部分(fen),每個(ge)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)細(xi)(xi)(xi)胞中存在5000~20000個(ge)復制體(ti)(ti)(ti),而相(xiang)比之下染色體(ti)(ti)(ti)DNA復制體(ti)(ti)(ti)僅2~10個(ge)。這(zhe)種天然富含(han)rRNA標(biao)靶序(xu)列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)情況使得用無輻射(she)(she)計檢(jian)測(ce)(ce)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)為(wei)(wei)(wei)可(ke)(ke)(ke)能(neng),同時(shi)又保持(chi)了與放射(she)(she)性(xing)(xing)(xing)同位(wei)素方(fang)法(fa)(fa)相(xiang)當(dang)或(huo)更(geng)高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)敏感性(xing)(xing)(xing)。其另一(yi)(yi)優點是(shi)由(you)于(yu)(yu)rRNA為(wei)(wei)(wei)單鏈(而DNA為(wei)(wei)(wei)雙鏈),雜交(jiao)前(qian)無需(xu)經(jing)過變性(xing)(xing)(xing)步驟。要(yao)(yao)得到陽性(xing)(xing)(xing)結果,此(ci)(ci)(ci)法(fa)(fa)需(xu)要(yao)(yao)105個(ge)靶細(xi)(xi)(xi)胞/ml,因此(ci)(ci)(ci)對(dui)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)(ce)來(lai)(lai)說(shuo),需(xu)要(yao)(yao)進(jin)(jin)行預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和選擇性(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),總共約(yue)50h。rRNA探針法(fa)(fa)比沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(酶聯免(mian)疫檢(jian)測(ce)(ce)法(fa)(fa))更(geng)耗時(shi),但(dan)二者成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)本相(xiang)近。食品(pin)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測(ce)(ce)法(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)最新(xin)進(jin)(jin)展(zhan)是(shi)在化學擴增(zeng)體(ti)(ti)(ti)系方(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)展(zhan),即聚合酶鏈反(fan)應(PCR),用該(gai)體(ti)(ti)(ti)系可(ke)(ke)(ke)對(dui)制備好的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)進(jin)(jin)行細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)DNA擴增(zeng),以(yi)(yi)便更(geng)易于(yu)(yu)用諸如(ru)凝膠電泳法(fa)(fa)或(huo)比色型(xing)ELISA法(fa)(fa)檢(jian)測(ce)(ce)。用于(yu)(yu)檢(jian)測(ce)(ce)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和其它(ta)以(yi)(yi)食物(wu)為(wei)(wei)(wei)載(zai)體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)法(fa)(fa)業已建立,其中一(yi)(yi)些方(fang)法(fa)(fa)顯示(shi)了極好的(de)(de)(de)(de)(de)敏感性(xing)(xing)(xing)。但(dan)該(gai)法(fa)(fa)較難自動化,且(qie)必需(xu)經(jing)選擇性(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)以(yi)(yi)稀釋可(ke)(ke)(ke)能(neng)干(gan)擾檢(jian)測(ce)(ce)反(fan)應的(de)(de)(de)(de)(de)某些成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)分(fen)。一(yi)(yi)個(ge)完(wan)整的(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)PCR為(wei)(wei)(wei)基礎的(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa),需(xu)要(yao)(yao)2天才能(neng)完(wan)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng),很(hen)大程度(du)上(shang)抵(di)銷了其高(gao)敏感性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)優點,但(dan)這(zhe)種方(fang)法(fa)(fa)對(dui)那些含(han)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)較少或(huo)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)“致傷”嚴(yan)重(zhong)難以(yi)(yi)復蘇而仍保有沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)尤其有效。