沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌是一種常(chang)見(jian)的(de)(de)食(shi)源性(xing)致(zhi)病(bing)菌。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌鑒(jian)定(ding)的(de)(de)傳統方法(fa)主要是根據(ju)形態學特(te)(te)征(zheng)(zheng)、培養(yang)特(te)(te)征(zheng)(zheng)、生(sheng)(sheng)(sheng)理生(sheng)(sheng)(sheng)化特(te)(te)征(zheng)(zheng)、抗原特(te)(te)征(zheng)(zheng)、噬菌體(ti)特(te)(te)征(zheng)(zheng)等(deng)。1885年沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)等(deng)在(zai)(zai)霍(huo)亂流行時分離到豬霍(huo)亂沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌,故定(ding)名為沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌屬。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌屬有(you)的(de)(de)專對(dui)人(ren)類致(zhi)病(bing),有(you)的(de)(de)只對(dui)動物(wu)致(zhi)病(bing),也有(you)對(dui)人(ren)和動物(wu)都致(zhi)病(bing)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌病(bing)是指由(you)各種類型沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌所引起(qi)的(de)(de)對(dui)人(ren)類、家(jia)畜以及野生(sheng)(sheng)(sheng)禽獸不同形式的(de)(de)總稱。感染(ran)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌的(de)(de)人(ren)或(huo)帶菌者的(de)(de)糞便污染(ran)食(shi)品,可(ke)使人(ren)發生(sheng)(sheng)(sheng)食(shi)物(wu)中毒(du)。據(ju)統計在(zai)(zai)世界(jie)各國(guo)的(de)(de)種類細菌性(xing)食(shi)物(wu)中毒(du)中,沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌引起(qi)的(de)(de)食(shi)物(wu)中毒(du)常(chang)列榜(bang)首。我國(guo)內陸地區也以沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌為首位。
沙門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)病的(de)病原(yuan)(yuan)體。屬腸(chang)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)科,革蘭(lan)氏(shi)陰性(xing)腸(chang)道桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)。已發現的(de)近(jin)一千種(或(huo)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)株)。按其抗原(yuan)(yuan)成分,可(ke)分為甲、乙(yi)、丙、丁、戊等(deng)基本菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)組。其中與(yu)人(ren)體疾(ji)病有關的(de)主要有甲組的(de)副(fu)傷寒(han)甲桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),乙(yi)組的(de)副(fu)傷寒(han)乙(yi)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)鼠傷寒(han)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丙組的(de)副(fu)傷寒(han)丙桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)豬霍亂(luan)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),丁組的(de)傷寒(han)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)腸(chang)炎桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)等(deng)。除傷寒(han)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)、副(fu)傷寒(han)甲桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)副(fu)傷寒(han)乙(yi)桿菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)引(yin)(yin)起人(ren)類的(de)疾(ji)病外,大多數僅能引(yin)(yin)起家畜、鼠類和(he)禽類等(deng)動物的(de)疾(ji)病,但有時也可(ke)污染(ran)人(ren)類的(de)食物而引(yin)(yin)起食物中毒。
沙(sha)門氏菌(jun)在(zai)水中不(bu)易繁(fan)(fan)殖(zhi),但可(ke)生存(cun)2-3周,冰(bing)箱中可(ke)生存(cun)3-4個月,在(zai)自然環境的糞便中可(ke)存(cun)活1-2個月。沙(sha)門氏菌(jun)最適繁(fan)(fan)殖(zhi)溫度(du)為37℃,在(zai)20℃以上即能大量繁(fan)(fan)殖(zhi),因(yin)此(ci),低溫儲存(cun)食品是一項(xiang)重要預防措施(shi)。
菌(jun)(jun)體(ti)大小(0.6~0.9)×(1~3)微(wei)米(mi)無(wu)芽(ya)胞,一般無(wu)莢膜,除(chu)雞白痢沙(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)和(he)雞傷寒沙(sha)門氏(shi)菌(jun)(jun)外(wai),大多有周(zhou)身(shen)鞭毛(mao)。營養(yang)(yang)要(yao)求不(bu)高(gao),分(fen)(fen)離培(pei)養(yang)(yang)常(chang)采用腸道選(xuan)擇(ze)鑒(jian)別培(pei)養(yang)(yang)基。生(sheng)化反應(ying)對本屬菌(jun)(jun)的(de)鑒(jian)別具有重(zhong)要(yao)參考意義(yi)(見表)。不(bu)液化明膠,不(bu)分(fen)(fen)解尿素,不(bu)產生(sheng)吲哚,不(bu)發酵乳糖(tang)和(he)蔗(zhe)糖(tang),能發酵葡萄糖(tang)、甘露醇、麥芽(ya)糖(tang)和(he)衛芽(ya)糖(tang),大多產酸(suan)(suan)(suan)產氣,少數(shu)只產酸(suan)(suan)(suan)不(bu)產氣。VP試驗陰性,有賴氨(an)酸(suan)(suan)(suan)脫羧酶(mei)。DNA的(de)G+C含量為50~53%。對熱抵抗力(li)不(bu)強,在60℃15分(fen)(fen)鐘可被殺死。在水中(zhong)存活2~3周(zhou)。在5%的(de)石(shi)炭酸(suan)(suan)(suan)中(zhong),5分(fen)(fen)鐘死亡(wang)。
本屬(shu)(shu)菌(jun)按生化(hua)反應(ying)分(fen)為(wei)4個亞(ya)(ya)屬(shu)(shu)。亞(ya)(ya)屬(shu)(shu)Ⅰ是(shi)生化(hua)反應(ying)典(dian)(dian)型的(de)和(he)最常見的(de)沙門氏(shi)菌(jun);亞(ya)(ya)屬(shu)(shu)Ⅱ和(he)Ⅳ是(shi)生化(hua)反應(ying)不典(dian)(dian)型的(de)沙門氏(shi)菌(jun);亞(ya)(ya)屬(shu)(shu)Ⅲ是(shi)亞(ya)(ya)利桑(sang)那沙門氏(shi)菌(jun)。
沙門氏菌(jun)具有復雜的抗(kang)原結構,一(yi)般可(ke)分為菌(jun)體(ti)(O)抗(kang)原、鞭毛(H)抗(kang)原和(he)表面(mian)(Vi)抗(kang)原3種(zhong)。
生化(hua)反應很活(huo)潑(po),能分解(jie)多種糖類和(he)醇(chun)。
1)需氧及(ji)兼性厭(yan)氧菌。
2)在普通瓊脂培(pei)養基上(shang)生長(chang)良好(hao),培(pei)養24h后,形(xing)成中等大(da)小、圓形(xing)、表(biao)面光滑(hua)、無色半透明、邊緣整齊的(de)菌(jun)落(luo),其菌(jun)落(luo)特征亦與大(da)腸(chang)桿菌(jun)相(xiang)似(無糞臭(chou)味)。
3)鑒(jian)別培養(yang)基(麥康凱(kai)、SS、伊紅美藍):一般無(wu)色(se)菌落。
4)三糖鐵瓊脂斜(xie)(xie)面:斜(xie)(xie)面為(wei)紅色,底部變黑(hei)并產氣。
1)發酵葡萄糖(tang),麥(mai)芽糖(tang),甘露醇和山梨醇產氣;
2)不發酵乳糖(tang)、蔗(zhe)糖(tang)和側金(jin)盞花(hua)醇(chun);
3)不產吲哚、V-P反應陰性;
4)不(bu)水解尿(niao)素和對苯丙氨(an)酸不(bu)脫氨(an)。
傷寒沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)、雞(ji)傷寒沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)及一部分(fen)雞(ji)白(bai)(bai)痢(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)發酵糖不產氣(qi),大多數雞(ji)白(bai)(bai)痢(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)不發酵麥芽糖;除雞(ji)白(bai)(bai)痢(li)沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)、豬傷寒沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)、甲(jia)型(xing)副傷寒沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)、傷寒沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)和仙臺沙(sha)(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)菌(jun)等(deng)外,均能利用枸櫞(yuan)酸鹽。
沙門氏(shi)菌(jun)具有復雜的抗原(yuan)結構,一般沙門氏(shi)菌(jun)具有菌(jun)體(O)抗原(yuan)、鞭毛(H)抗原(yuan)和表面抗原(yuan)(莢膜或(huo)包(bao)膜抗原(yuan))三種抗原(yuan)。
肉及其制品(pin)的(de)沙(sha)門(men)氏(shi)菌檢出(chu)率美國(guo)為(wei)20%-25%、英國(guo)為(wei)9.9%、日本檢查(cha)進口家(jia)禽的(de)污染率為(wei)10.3%,國(guo)內肉類沙(sha)門(men)氏(shi)菌檢出(chu)率在1.1%-39.5%。
中(zhong)國蛋(dan)及其(qi)制(zhi)品沙門氏(shi)菌(jun)檢(jian)出率(lv)為3.9%-43.7%,由于吃(chi)蛋(dan)引起鼠傷寒病的病例(li)報告逐(zhu)漸有增加的趨勢。
食(shi)品在(zai)加工、運輸、出售過程中往往被沙(sha)門氏(shi)菌污染。沙(sha)門氏(shi)菌在(zai)糞便、土壤(rang)、食(shi)品、水(shui)中可生存5個月至2年之(zhi)久。
恢復期患者(zhe)和無癥狀的(de)帶菌(jun)者(zhe)也(ye)是常(chang)見(jian)的(de)傳染源(yuan)。
廣(guang)泛分布(bu)于自(zi)然(ran)界,常常寄居在人和(he)動物(wu)體(ti)內(nei),特別是家禽、家畜及寵物(wu)的腸道中。主要(yao)污(wu)染(ran)的食品(pin)(pin)有:肉(rou)和(he)肉(rou)制(zhi)品(pin)(pin)、蛋(dan)和(he)蛋(dan)制(zhi)品(pin)(pin)、奶和(he)奶制(zhi)品(pin)(pin)等。由于沙門氏菌不分解(jie)蛋(dan)白質(zhi),食物(wu)被其污(wu)染(ran)后表面看起(qi)來似乎(hu)并(bing)沒有變化.
沙門氏菌(jun)感(gan)染(ran)癥為人畜共患感(gan)染(ran)性疾病(bing),主(zhu)要由食(shi)(shi)用(yong)遭(zao)受污染(ran)的食(shi)(shi)物(wu)導致,是許多(duo)國家食(shi)(shi)物(wu)中毒的重(zhong)要病(bing)源。
典型癥(zheng)(zheng)狀(zhuang)包括發(fa)熱、惡(e)心、嘔(ou)吐、腹(fu)瀉及腹(fu)部絞痛等癥(zheng)(zheng)狀(zhuang),通(tong)常在發(fa)熱后72小(xiao)時內(nei)會好轉。嬰(ying)兒、老(lao)年(nian)人、免疫功能低下(xia)的患者則(ze)可(ke)能因沙門氏菌進入血液而出現嚴重且危及生命的菌血癥(zheng)(zheng),少(shao)數還會合并腦膜炎或骨髓炎。
一(yi)般(ban)沙門(men)氏菌(jun)造成的腸(chang)胃炎不需要給予抗生素治療(liao);而以補充水分(fen)與電(dian)解質為(wei)主;但對于新生兒、免疫功能低下患者(zhe)及特(te)殊傷員;則需要視情況(kuang)紿予抗生素治療(liao)。
1、餐前(qian)、便后、接(jie)觸食(shi)物前(qian)、接(jie)觸動物或生(sheng)蛋后應仔細洗凈雙手。
2、處理生食和熟(shu)食的砧(zhen)板要分開。
3、食物(wu)要熟透(tou)再吃(尤其(qi)是雞蛋(dan)與家(jia)禽類)。
4、非現做現吃的食物(wu)應以保鮮膜包(bao)覆(fu)后放進冰箱保存(cun),再次食用前應加熱或煮(zhu)熟。
5、撲(pu)滅(mie)并(bing)阻隔蒼(cang)蠅等病媒。被(bei)蒼(cang)蠅沾染、過(guo)期或腐敗(bai)的(de)不潔食物均應丟棄,切(qie)勿食用。
6、水塔應經(jing)常清洗、消毒。
7、旅行或野(ye)營時的飲用水應煮沸并消毒。
8、如有(you)嘔(ou)吐、腹(fu)瀉或發熱等癥狀,應(ying)盡快就(jiu)醫。
沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)是美(mei)國(guo)(guo)食(shi)物(wu)中毒致死(si)的(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)原(yuan)因(yin)。美(mei)國(guo)(guo)人對這種(zhong)病(bing)菌(jun)一點(dian)都(dou)不(bu)(bu)(bu)(bu)陌生(sheng)(sheng)(sheng),每年全(quan)(quan)國(guo)(guo)大約報告40000例沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)感(gan)(gan)染(ran)病(bing)例。但實(shi)際的(de)(de)(de)(de)感(gan)(gan)染(ran)人數可(ke)能要(yao)達20倍以(yi)(yi)上,因(yin)為(wei)許(xu)多輕型(xing)病(bing)人可(ke)能未確診,據不(bu)(bu)(bu)(bu)完全(quan)(quan)統計(ji),每年大約有(you)(you)(you)1000人死(si)于(yu)急性沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)感(gan)(gan)染(ran)。但是,以(yi)(yi)前各州爆發(fa)的(de)(de)(de)(de)疫(yi)情幾乎都(dou)與(yu)人們(men)(men)吃(chi)(chi)了染(ran)上沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)肉(rou)類(lei)、蛋(dan)(dan)類(lei)、乳類(lei)有(you)(you)(you)關,但迄今(jin)為(wei)止,很少聽說吃(chi)(chi)蔬(shu)果大面積(ji)受沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)污染(ran)甚(shen)至(zhi)在(zai)(zai)人群中引(yin)發(fa)大疫(yi)情的(de)(de)(de)(de)。對此(ci),周福生(sheng)(sheng)(sheng)教授解釋說,這可(ke)能是西(xi)紅柿(shi)在(zai)(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)長的(de)(de)(de)(de)過(guo)程(cheng)(cheng)中,由于(yu)空氣中紫外線(xian)不(bu)(bu)(bu)(bu)夠強烈,植(zhi)物(wu)在(zai)(zai)灌溉過(guo)程(cheng)(cheng)或因(yin)土壤中含(han)有(you)(you)(you)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun),這樣才(cai)使西(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)(de)表皮上沾染(ran)了沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun),加(jia)上不(bu)(bu)(bu)(bu)少人有(you)(you)(you)生(sheng)(sheng)(sheng)食(shi)西(xi)紅柿(shi)的(de)(de)(de)(de)習慣,如(ru)果沒有(you)(you)(you)清洗干凈,就(jiu)(jiu)完全(quan)(quan)有(you)(you)(you)可(ke)能發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)感(gan)(gan)染(ran)。不(bu)(bu)(bu)(bu)光是食(shi)用西(xi)紅柿(shi),其他(ta)瓜果蔬(shu)菜也一樣。沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)主(zhu)要(yao)污染(ran)肉(rou)類(lei)食(shi)品,魚、禽、奶(nai)、蛋(dan)(dan)類(lei)食(shi)品也可(ke)受此(ci)菌(jun)污染(ran)。沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)食(shi)物(wu)中毒全(quan)(quan)年都(dou)可(ke)發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng),吃(chi)(chi)了未煮透的(de)(de)(de)(de)病(bing)、死(si)牲畜肉(rou)或在(zai)(zai)屠宰(zai)后其他(ta)環(huan)節污染(ran)的(de)(de)(de)(de)牲畜肉(rou)是引(yin)起(qi)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)食(shi)物(wu)中毒的(de)(de)(de)(de)最(zui)主(zhu)要(yao)原(yuan)因(yin)。有(you)(you)(you)食(shi)品專(zhuan)家(jia)指出美(mei)國(guo)(guo)人吃(chi)(chi)雞(ji)蛋(dan)(dan)的(de)(de)(de)(de)習慣與(yu)國(guo)(guo)人不(bu)(bu)(bu)(bu)同,他(ta)們(men)(men)喜(xi)歡吃(chi)(chi)半熟(shu)的(de)(de)(de)(de)雞(ji)蛋(dan)(dan)甚(shen)至(zhi)是生(sheng)(sheng)(sheng)雞(ji)蛋(dan)(dan),所(suo)以(yi)(yi)一旦雞(ji)蛋(dan)(dan)里含(han)有(you)(you)(you)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun),感(gan)(gan)染(ran)的(de)(de)(de)(de)幾率(lv)(lv)就(jiu)(jiu)比較高。“在(zai)(zai)國(guo)(guo)內(nei),生(sheng)(sheng)(sheng)雞(ji)蛋(dan)(dan)里含(han)有(you)(you)(you)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)其實(shi)并不(bu)(bu)(bu)(bu)奇怪,只(zhi)不(bu)(bu)(bu)(bu)過(guo)國(guo)(guo)人喜(xi)歡將雞(ji)蛋(dan)(dan)煮熟(shu)吃(chi)(chi),這樣就(jiu)(jiu)大大減(jian)少了感(gan)(gan)染(ran)的(de)(de)(de)(de)幾率(lv)(lv)。”
由沙(sha)門氏菌引起(qi)的(de)食品(pin)中毒癥狀(zhuang)主(zhu)要有(you)惡心(xin)、嘔吐、腹(fu)痛、頭痛、畏寒(han)和腹(fu)瀉等,還伴有(you)乏力、肌肉(rou)酸痛、視覺模糊、中等程度(du)發熱、躁動不安和嗜睡,延續(xu)時間2~3d,平(ping)均(jun)致死率為4.1%。其主(zhu)要原因是由于(yu)攝入了含有(you)大量(liang)沙(sha)門氏菌屬(shu)的(de)非寄(ji)主(zhu)專(zhuan)一性(xing)菌種或血清型(xing)的(de)食品(pin)所引起(qi)的(de)。在攝入含毒食品(pin)之后.癥狀(zhuang)一般在12~14h內出現,有(you)些潛伏期較長。
防止沙門氏菌(jun)(jun)污(wu)染(ran)食品;控制(zhi)食品中沙門氏菌(jun)(jun)的繁(fan)殖;加(jia)熱以徹底殺滅(mie)病原菌(jun)(jun)。
沙門(men)氏(shi)菌不耐高(gao)溫(wen),食物的(de)中(zhong)心溫(wen)度(du)達70℃以上,持續5分鐘一(yi)般都可以殺(sha)死包括沙門(men)氏(shi)菌等常(chang)見食源性致病(bing)菌。家庭中(zhong)一(yi)般的(de)熱(re)處理烹調方式都可有效(xiao)殺(sha)滅該(gai)菌。
稱取25g(mL)樣品(pin)放入盛有225 mL BPW的(de)無(wu)菌均質(zhi)(zhi)杯中(zhong),以8000 r/min~10 000 r/min均質(zhi)(zhi)1min~2min,或(huo)置于盛有225 mL BPW的(de)無(wu)菌均質(zhi)(zhi)袋(dai)中(zhong),用拍(pai)擊式均質(zhi)(zhi)器拍(pai)打1min~2min。若樣品(pin)為液態,不(bu)需要均質(zhi)(zhi),振蕩(dang)混勻。如需測定pH值,用1mol/mL無(wu)菌NaOH或(huo)HCl調pH至6.8±0.2。無(wu)菌操作將樣品(pin)轉至500mL錐形瓶(ping)中(zhong),如使用均質(zhi)(zhi)袋(dai),可直接進(jin)行培養(yang),于36 ℃±1℃培養(yang)8h~18h。
如為(wei)冷凍(dong)產(chan)品,應在45℃以下不(bu)超過(guo)15min,或2℃~5℃不(bu)超過(guo)18h解凍(dong)。
輕(qing)輕(qing)搖動培養過的樣品混合物(wu),移取1mL,轉種于(yu)10mL TTB內(nei),于(yu)42℃±1℃培養18h~24h。同時,另取1mL,轉種于(yu)10 mL SC內(nei),于(yu)36℃±1℃培養18h~24h。
分(fen)別(bie)用接(jie)種(zhong)環取增菌液(ye)1環,劃(hua)線接(jie)種(zhong)于一個(ge)BS瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)和一個(ge)XLD瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(或(huo)HE瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)或(huo)沙(sha)門氏菌屬顯色培(pei)(pei)養基(ji)平(ping)(ping)(ping)板(ban))。于36℃±1℃分(fen)別(bie)培(pei)(pei)養18h~24h(XLD瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)、HE瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)、沙(sha)門氏菌屬顯色培(pei)(pei)養基(ji)平(ping)(ping)(ping)板(ban))或(huo)40h~48h (BS瓊(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)),觀察各(ge)個(ge)平(ping)(ping)(ping)板(ban)上(shang)(shang)生長(chang)的菌落,各(ge)個(ge)平(ping)(ping)(ping)板(ban)上(shang)(shang)的菌落特征見表(biao)1。
表 1 沙(sha)門氏(shi)菌屬在(zai)不同選(xuan)擇性瓊脂平板上(shang)的菌落特征
選擇(ze)性瓊脂平板(ban) 沙門氏菌(jun)
BS 瓊(qiong)脂 菌(jun)落為(wei)黑(hei)色(se)有金(jin)屬光(guang)澤、棕(zong)褐色(se)或灰(hui)色(se),菌(jun)落周(zhou)圍培(pei)養(yang)基可呈黑(hei)色(se)或棕(zong)色(se);有些菌(jun)株(zhu)形成灰(hui)綠色(se)的菌(jun)落,周(zhou)圍培(pei)養(yang)基不變。
HE 瓊(qiong)脂 藍綠色或藍色,多數菌落中心黑色或幾乎全黑色;有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色。
XLD 瓊脂 菌(jun)(jun)(jun)落(luo)(luo)呈(cheng)(cheng)粉(fen)紅色(se)(se)(se),帶或(huo)(huo)不帶黑色(se)(se)(se)中(zhong)心(xin)(xin),有些菌(jun)(jun)(jun)株可呈(cheng)(cheng)現(xian)大的(de)帶光澤的(de)黑色(se)(se)(se)中(zhong)心(xin)(xin),或(huo)(huo)呈(cheng)(cheng)現(xian)全部黑色(se)(se)(se)的(de)菌(jun)(jun)(jun)落(luo)(luo);有些菌(jun)(jun)(jun)株為(wei)黃(huang)色(se)(se)(se)菌(jun)(jun)(jun)落(luo)(luo),帶或(huo)(huo)不帶黑色(se)(se)(se)中(zhong)心(xin)(xin)。
沙(sha)門(men)氏菌(jun)屬顯色(se)培養(yang) 按照顯色(se)培養(yang)基的說明進行判定。
自(zi)19世紀后期,沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)首(shou)次被鑒定(ding)為(wei)人(ren)(ren)類的(de)(de)(de)一(yi)(yi)種(zhong)病(bing)原以來(lai),檢(jian)測方(fang)法(fa)學(xue)都是建立在采(cai)取感染病(bing)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)糞便或(huo)血液作為(wei)臨(lin)(lin)床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料(liao)的(de)(de)(de)基礎上(shang)(shang)。此后的(de)(de)(de)60年間(jian),用于(yu)(yu)從食(shi)品(pin)(pin)(pin)中分(fen)離(li)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)實質(zhi)上(shang)(shang)與那些(xie)(xie)用于(yu)(yu)臨(lin)(lin)床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料(liao)的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)是相同(tong)的(de)(de)(de)。但(dan)至少(shao)有(you)三(san)個(ge)(ge)因(yin)素限制了(le)用于(yu)(yu)臨(lin)(lin)床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料(liao)的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)應用在食(shi)品(pin)(pin)(pin)分(fen)析(xi)上(shang)(shang)。第一(yi)(yi),通常,沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)含(han)量(liang)水平在污染食(shi)品(pin)(pin)(pin)中比有(you)感染病(bing)人(ren)(ren)的(de)(de)(de)病(bing)料(liao)中要低很(hen)(hen)多(duo);第二,食(shi)品(pin)(pin)(pin)本身(shen)的(de)(de)(de)性(xing)質(zhi)會干擾病(bing)原的(de)(de)(de)檢(jian)測,例(li)如,某些(xie)(xie)食(shi)品(pin)(pin)(pin)中固有(you)菌(jun)(jun)(jun)(jun)群可能處在一(yi)(yi)個(ge)(ge)很(hen)(hen)高(gao)的(de)(de)(de)水平,從而影(ying)響特定(ding)細菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)選擇(ze)性(xing)分(fen)離(li)和鑒定(ding);第三(san),與臨(lin)(lin)床(chuang)(chuang)(chuang)病(bing)料(liao)不同(tong)的(de)(de)(de)是,經過加(jia)工的(de)(de)(de)食(shi)品(pin)(pin)(pin),由于(yu)(yu)加(jia)熱、干燥、高(gao)含(han)鹽量(liang)、酸和冷凍等因(yin)素的(de)(de)(de)作用,其(qi)中的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)受到了(le)尚不致命的(de)(de)(de)損傷或(huo)稱“致傷”。這(zhe)就(jiu)形成了(le)一(yi)(yi)個(ge)(ge)具有(you)不同(tong)生長特性(xing)的(de)(de)(de)細菌(jun)(jun)(jun)(jun)群。這(zhe)種(zhong)現象(xiang)對那些(xie)(xie)希望從食(shi)物樣品(pin)(pin)(pin)中分(fen)離(li)出沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)食(shi)品(pin)(pin)(pin)分(fen)析(xi)家來(lai)說有(you)很(hen)(hen)大影(ying)響,因(yin)為(wei)在選擇(ze)培(pei)養基上(shang)(shang)直接培(pei)養“致傷”的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)通常是以細菌(jun)(jun)(jun)(jun)死亡和試驗失(shi)敗而告終。為(wei)克服這(zhe)些(xie)(xie)困難,人(ren)(ren)們建立了(le)一(yi)(yi)種(zhong)簡單的(de)(de)(de)微生物增殖步驟(zou),專門(men)(men)針對以食(shi)品(pin)(pin)(pin)為(wei)傳播載(zai)體的(de)(de)(de)病(bing)原。雖然這(zhe)些(xie)(xie)方(fang)法(fa)本身(shen)證明是可靠的(de)(de)(de),但(dan)卻(que)很(hen)(hen)費力、耗時,需要4~7天才能完成。因(yin)此,在需要及時、快速(su)評價食(shi)品(pin)(pin)(pin)中微生物的(de)(de)(de)安全(quan)性(xing)時,通常不被采(cai)用。隨(sui)著DNA和抗體技術的(de)(de)(de)發(fa)(fa)展(zhan)(zhan),近10~15年間(jian)發(fa)(fa)展(zhan)(zhan)了(le)無(wu)數改進的(de)(de)(de)方(fang)法(fa),其(qi)中許多(duo)可以在48h內檢(jian)出沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun),這(zhe)些(xie)(xie)方(fang)法(fa)通稱為(wei)快速(su)檢(jian)測。
利(li)用(yong)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)-抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)反應的(de)(de)顯(xian)著特(te)異性,來(lai)進(jin)(jin)行細(xi)菌(jun)的(de)(de)鑒別和血清學定(ding)型,已(yi)(yi)有半個多(duo)(duo)世紀(ji)的(de)(de)歷史。細(xi)菌(jun)菌(jun)體(ti)(ti)或鞭毛抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)特(te)異性抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)的(de)(de)存在(zai)(zai),使得人們可以建立一些快速(su)方法(fa)(fa)(fa)來(lai)檢(jian)(jian)測以食(shi)品為(wei)(wei)載(zai)體(ti)(ti)的(de)(de)病原(yuan)(yuan)。已(yi)(yi)經建立的(de)(de)沙門氏菌(jun)免(mian)(mian)疫(yi)學檢(jian)(jian)測方法(fa)(fa)(fa)有許多(duo)(duo)種(zhong)(zhong),大(da)致(zhi)可分(fen)為(wei)(wei)以酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ELISA),熒(ying)光(guang)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)染色(免(mian)(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)法(fa)(fa)(fa)),同位(wei)素標記抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(放射(she)免(mian)(mian)疫(yi)試驗)為(wei)(wei)基(ji)(ji)(ji)礎(chu)(chu)的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)及其(qi)它多(duo)(duo)種(zhong)(zhong)以抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)為(wei)(wei)基(ji)(ji)(ji)礎(chu)(chu),利(li)用(yong)乳膠凝集、免(mian)(mian)疫(yi)傳(chuan)感器、免(mian)(mian)疫(yi)擴(kuo)散(san)及免(mian)(mian)疫(yi)色譜技術的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)。但常(chang)規中(zhong)最廣泛采用(yong)的(de)(de)是以雙(shuang)位(wei)點(dian)(dian)ELISA技術即夾心ELISA為(wei)(wei)基(ji)(ji)(ji)礎(chu)(chu)的(de)(de)方法(fa)(fa)(fa)。此(ci)法(fa)(fa)(fa)改進(jin)(jin)后用(yong)有放射(she)活性的(de)(de)同位(wei)素替(ti)代標記抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),概括地說(shuo),是指以固定(ding)在(zai)(zai)固體(ti)(ti)基(ji)(ji)(ji)質上的(de)(de)“捕(bu)捉(zhuo)”抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)來(lai)捕(bu)捉(zhuo)目標抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan),經洗(xi)滌(di)除去未結合(he)的(de)(de)成分(fen),加(jia)入第二(er)種(zhong)(zhong)酶(mei)標抗(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti),此(ci)者結合(he)在(zai)(zai)捕(bu)捉(zhuo)到(dao)的(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)的(de)(de)不同位(wei)點(dian)(dian)上,第二(er)次洗(xi)滌(di)后加(jia)入酶(mei)作用(yong)基(ji)(ji)(ji)質,并令其(qi)與(yu)顏色成分(fen)反應,然后用(yong)分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa)(fa)(fa)即很容易檢(jian)(jian)測到(dao)目標抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)。采用(yong)微(wei)量滴定(ding)板作為(wei)(wei)固態基(ji)(ji)(ji)質使反應形式標準(zhun)化(hua),并促成其(qi)自動(dong)化(hua)。
黎兆(zhao)滾等(deng)人首(shou)次在(zai)國內口(kou)岸系統應用(yong)(yong)(yong)(yong)微(wei)量(liang)(liang)板(ban)(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對進(jin)(jin)出口(kou)動物產品(pin)(pin)(pin)(魚(yu)粉(fen)、肉(rou)骨(gu)粉(fen)等(deng))進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測。該法(fa)(fa)(fa)(fa)采用(yong)(yong)(yong)(yong)預先包被了(le)(le)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(A-E群)單克隆抗(kang)(kang)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)量(liang)(liang)板(ban)(ban),加(jia)(jia)入經增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin),反應后再加(jia)(jia)入一定(ding)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)指(zhi)示劑,作用(yong)(yong)(yong)(yong)畢后用(yong)(yong)(yong)(yong)酶標(biao)儀測定(ding)OD值來(lai)判定(ding)結(jie)(jie)果(guo)。食物樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)經適當的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li),也可(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)此(ci)法(fa)(fa)(fa)(fa)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)測。ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)出沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)極限范圍在(zai)105~106個細胞/ml,因(yin)此(ci),要(yao)得(de)(de)出可(ke)靠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)果(guo),食物樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)首(shou)先必(bi)需進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)、選擇性增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),通(tong)常還要(yao)在(zai)含有(you)D-甘露(lu)糖的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)肉(rou)湯(M肉(rou)湯)中進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun),以促進(jin)(jin)鞭毛發育。總的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)來(lai)說(shuo),標(biao)準(zhun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備,約需要(yao)經過(guo)40~48h的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)孵育才能完成(cheng)。黎兆(zhao)滾等(deng)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)量(liang)(liang)板(ban)(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備過(guo)程分(fen)三步,共耗時(shi)24h:①選用(yong)(yong)(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)湯進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)預增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(6h),使“致傷(shang)”、冷凍的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)復(fu)蘇(su)。②使用(yong)(yong)(yong)(yong)選擇性培養(yang)基(ji)RV進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(14h),使沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)大(da)量(liang)(liang)繁殖,同(tong)時(shi)抑制(zhi)(zhi)其它雜菌(jun)(jun)(jun)(jun)生長。③使用(yong)(yong)(yong)(yong)營養(yang)肉(rou)湯(蛋白胨(dong)水)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)后增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(4h),使沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)數(shu)量(liang)(liang)大(da)大(da)增(zeng)加(jia)(jia)。比上述標(biao)準(zhun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備過(guo)程縮(suo)短(duan)(duan)了(le)(le)一半的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian)。ELISA方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)本身,則(ze)僅需要(yao)大(da)約2h而已(其中30min是操作時(shi)間(jian),90min是孵育時(shi)間(jian))。相比之下,黎兆(zhao)滾等(deng)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)可(ke)在(zai)27h內完成(cheng),比上述方(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)縮(suo)短(duan)(duan)了(le)(le)一半的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)時(shi)間(jian),頗值得(de)(de)推廣應用(yong)(yong)(yong)(yong)。最新式(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)免疫學檢(jian)測法(fa)(fa)(fa)(fa),利用(yong)(yong)(yong)(yong)經特異性抗(kang)(kang)體敏化(hua)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)免疫色譜(pu)卡(ka)片(pian)為基(ji)礎。幾(ji)滴(di)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加(jia)(jia)到(dao)卡(ka)片(pian)上,結(jie)(jie)果(guo)可(ke)以直接用(yong)(yong)(yong)(yong)肉(rou)眼讀出。免疫色譜(pu)卡(ka)片(pian)極易操作,且(qie)由(you)于(yu)無需要(yao)特殊(shu)設備,很適合小型實驗室(shi)使用(yong)(yong)(yong)(yong)。盡管卡(ka)片(pian)檢(jian)測法(fa)(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)一樣(yang)(yang)(yang)需要(yao)對樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)進(jin)(jin)行(xing)(xing)(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)處理(li),但它(卡(ka)片(pian)法(fa)(fa)(fa)(fa))本身通(tong)常需時(shi)不超過(guo)10min,如果(guo)采用(yong)(yong)(yong)(yong)黎兆(zhao)滾等(deng)人的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)制(zhi)(zhi)備法(fa)(fa)(fa)(fa),則(ze)可(ke)使操作時(shi)間(jian)更(geng)為縮(suo)短(duan)(duan)。
細(xi)(xi)(xi)胞核酸DNA和(he)RNA是(shi)唯(wei)一(yi)一(yi)類可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)攜(xie)帶信息的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)大分子。由(you)于(yu)所有(you)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)胞都含(han)有(you)這(zhe)(zhe)種(zhong)分子,可(ke)(ke)以(yi)(yi)(yi)利(li)用(yong)(yong)(yong)它(ta)作(zuo)為(wei)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)靶。標(biao)靶通常是(shi)一(yi)個(ge)(ge)(ge)特異(yi)性(xing)核酸序(xu)列(lie),它(ta)可(ke)(ke)通過以(yi)(yi)(yi)補體(ti)(ti)核酸分子作(zuo)為(wei)探(tan)(tan)針來檢(jian)(jian)出(chu)。與免(mian)疫(yi)學方(fang)(fang)法相似,探(tan)(tan)針也需(xu)(xu)要(yao)(yao)(yao)加附(fu)適當的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)記(ji)(ji),如放射性(xing)同(tong)位(wei)素(su)、酶(mei)或發(fa)光(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)標(biao)識物。Fitts等(deng)人(ren)在(zai)食(shi)(shi)品(pin)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)中(zhong)引入了(le)第(di)一(yi)代DNA—RNA雜交(jiao)技(ji)(ji)術,此(ci)法應(ying)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)探(tan)(tan)針含(han)有(you)用(yong)(yong)(yong)放射性(xing)同(tong)位(wei)素(su)標(biao)記(ji)(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)DNA片(pian)段,其(qi)敏感(gan)(gan)性(xing)高,經(jing)大約48h的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)步驟(zou)后,檢(jian)(jian)測(ce)(ce)極限可(ke)(ke)達108個(ge)(ge)(ge)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)/ml,但由(you)于(yu)要(yao)(yao)(yao)使用(yong)(yong)(yong)放射性(xing)同(tong)位(wei)素(su),只能(neng)在(zai)專門(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)實驗室應(ying)用(yong)(yong)(yong),此(ci)方(fang)(fang)法的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)點(dian)(dian)(dian)都被抵(di)消了(le)。為(wei)此(ci),以(yi)(yi)(yi)核酸雜交(jiao)為(wei)基礎(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)第(di)二(er)代技(ji)(ji)術—比(bi)色(se)計已發(fa)展(zhan)起(qi)來。這(zhe)(zhe)種(zhong)方(fang)(fang)法依(yi)賴于(yu)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)核糖(tang)體(ti)(ti)RNA(rRNA)—核糖(tang)體(ti)(ti)發(fa)育過程中(zhong)儲存的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)核酸成(cheng)分的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。核糖(tang)體(ti)(ti)是(shi)細(xi)(xi)(xi)胞蛋白質合成(cheng)器的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)部(bu)分,每個(ge)(ge)(ge)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)細(xi)(xi)(xi)胞中(zhong)存在(zai)5000~20000個(ge)(ge)(ge)復制體(ti)(ti),而(er)相比(bi)之下染色(se)體(ti)(ti)DNA復制體(ti)(ti)僅2~10個(ge)(ge)(ge)。這(zhe)(zhe)種(zhong)天然(ran)富含(han)rRNA標(biao)靶序(xu)列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況使得用(yong)(yong)(yong)無輻(fu)射計檢(jian)(jian)測(ce)(ce)成(cheng)為(wei)可(ke)(ke)能(neng),同(tong)時又(you)保(bao)持了(le)與放射性(xing)同(tong)位(wei)素(su)方(fang)(fang)法相當或更(geng)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏感(gan)(gan)性(xing)。其(qi)另一(yi)優(you)點(dian)(dian)(dian)是(shi)由(you)于(yu)rRNA為(wei)單(dan)鏈(而(er)DNA為(wei)雙鏈),雜交(jiao)前無需(xu)(xu)經(jing)過變性(xing)步驟(zou)。要(yao)(yao)(yao)得到陽性(xing)結果,此(ci)法需(xu)(xu)要(yao)(yao)(yao)105個(ge)(ge)(ge)靶細(xi)(xi)(xi)胞/ml,因(yin)此(ci)對(dui)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)來說(shuo),需(xu)(xu)要(yao)(yao)(yao)進(jin)行預增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)選擇性(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),總共約50h。rRNA探(tan)(tan)針法比(bi)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)ELISA法(酶(mei)聯(lian)免(mian)疫(yi)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)法)更(geng)耗(hao)時,但二(er)者成(cheng)本相近。食(shi)(shi)品(pin)細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)法的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)最新(xin)進(jin)展(zhan)是(shi)在(zai)化(hua)學擴增(zeng)(zeng)體(ti)(ti)系(xi)方(fang)(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)展(zhan),即聚合酶(mei)鏈反(fan)(fan)應(ying)(PCR),用(yong)(yong)(yong)該體(ti)(ti)系(xi)可(ke)(ke)對(dui)制備好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣品(pin)進(jin)行細(xi)(xi)(xi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)DNA擴增(zeng)(zeng),以(yi)(yi)(yi)便更(geng)易于(yu)用(yong)(yong)(yong)諸(zhu)如凝膠(jiao)電泳(yong)法或比(bi)色(se)型ELISA法檢(jian)(jian)測(ce)(ce)。用(yong)(yong)(yong)于(yu)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)和(he)其(qi)它(ta)以(yi)(yi)(yi)食(shi)(shi)物為(wei)載(zai)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)(fang)法業已建立,其(qi)中(zhong)一(yi)些(xie)方(fang)(fang)法顯示了(le)極好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏感(gan)(gan)性(xing)。但該法較難自(zi)動(dong)化(hua),且必需(xu)(xu)經(jing)選擇性(xing)增(zeng)(zeng)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)以(yi)(yi)(yi)稀釋可(ke)(ke)能(neng)干(gan)擾檢(jian)(jian)測(ce)(ce)反(fan)(fan)應(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)某些(xie)成(cheng)分。一(yi)個(ge)(ge)(ge)完整的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)(yi)PCR為(wei)基礎(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法,需(xu)(xu)要(yao)(yao)(yao)2天才能(neng)完成(cheng),很大程度上抵(di)銷了(le)其(qi)高敏感(gan)(gan)性(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)點(dian)(dian)(dian),但這(zhe)(zhe)種(zhong)方(fang)(fang)法對(dui)那些(xie)含(han)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)較少或沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)“致傷”嚴重難以(yi)(yi)(yi)復蘇而(er)仍保(bao)有(you)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣品(pin)尤(you)其(qi)有(you)效。