沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)是一(yi)種(zhong)常見(jian)的(de)食(shi)(shi)源性致(zhi)病(bing)菌(jun)(jun)(jun)。沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)鑒定的(de)傳統方(fang)法(fa)主要是根據(ju)形態(tai)學特(te)征(zheng)、培養特(te)征(zheng)、生理生化特(te)征(zheng)、抗原特(te)征(zheng)、噬(shi)菌(jun)(jun)(jun)體特(te)征(zheng)等。1885年沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)等在(zai)霍亂(luan)流行(xing)時分離到(dao)豬霍亂(luan)沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun),故定名為沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)屬(shu)。沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)屬(shu)有的(de)專對人(ren)類(lei)(lei)致(zhi)病(bing),有的(de)只(zhi)對動(dong)物致(zhi)病(bing),也(ye)有對人(ren)和(he)動(dong)物都致(zhi)病(bing)。沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)病(bing)是指由(you)各(ge)種(zhong)類(lei)(lei)型沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)所引起(qi)的(de)對人(ren)類(lei)(lei)、家畜以及野生禽獸不同(tong)形式的(de)總稱。感染沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)的(de)人(ren)或帶(dai)菌(jun)(jun)(jun)者的(de)糞便污染食(shi)(shi)品,可使人(ren)發生食(shi)(shi)物中毒。據(ju)統計在(zai)世(shi)界(jie)各(ge)國(guo)的(de)種(zhong)類(lei)(lei)細菌(jun)(jun)(jun)性食(shi)(shi)物中毒中,沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)引起(qi)的(de)食(shi)(shi)物中毒常列(lie)榜首。我國(guo)內(nei)陸(lu)地區(qu)也(ye)以沙(sha)門(men)(men)(men)氏(shi)(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)為首位(wei)。
沙(sha)門氏菌(jun)(jun)(jun)病(bing)的(de)(de)病(bing)原體。屬腸桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)科(ke),革蘭氏陰性腸道桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)。已(yi)發現的(de)(de)近(jin)一千(qian)種(或(huo)菌(jun)(jun)(jun)株)。按其(qi)抗原成分,可分為甲(jia)、乙(yi)、丙、丁(ding)、戊等(deng)基本菌(jun)(jun)(jun)組。其(qi)中(zhong)與人(ren)體疾(ji)(ji)病(bing)有(you)關的(de)(de)主要有(you)甲(jia)組的(de)(de)副(fu)傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)甲(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),乙(yi)組的(de)(de)副(fu)傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)乙(yi)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)鼠傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),丙組的(de)(de)副(fu)傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)丙桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)豬霍亂桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun),丁(ding)組的(de)(de)傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)腸炎桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)等(deng)。除傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)、副(fu)傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)甲(jia)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)和(he)副(fu)傷(shang)(shang)(shang)寒(han)(han)(han)乙(yi)桿(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)引(yin)起人(ren)類(lei)(lei)的(de)(de)疾(ji)(ji)病(bing)外,大多數僅能引(yin)起家畜、鼠類(lei)(lei)和(he)禽(qin)類(lei)(lei)等(deng)動物(wu)的(de)(de)疾(ji)(ji)病(bing),但有(you)時也可污染人(ren)類(lei)(lei)的(de)(de)食物(wu)而引(yin)起食物(wu)中(zhong)毒。
沙門氏菌在(zai)水中不易(yi)繁殖,但可生存2-3周,冰箱中可生存3-4個月,在(zai)自(zi)然環境的糞便中可存活1-2個月。沙門氏菌最適繁殖溫度為37℃,在(zai)20℃以上即能大量繁殖,因此,低溫儲存食品是一項重(zhong)要預(yu)防措施。
菌(jun)體大(da)小(0.6~0.9)×(1~3)微米無芽胞,一般無莢膜,除雞(ji)白痢沙門氏菌(jun)和(he)雞(ji)傷寒沙門氏菌(jun)外,大(da)多(duo)有(you)周身(shen)鞭毛。營養(yang)要(yao)求不(bu)高,分離培(pei)養(yang)常采(cai)用腸道選擇鑒別培(pei)養(yang)基。生化(hua)反應對本屬菌(jun)的鑒別具有(you)重要(yao)參考意(yi)義(見(jian)表)。不(bu)液化(hua)明膠,不(bu)分解尿素,不(bu)產生吲(yin)哚,不(bu)發(fa)酵(jiao)乳(ru)糖和(he)蔗糖,能發(fa)酵(jiao)葡萄糖、甘(gan)露醇、麥芽糖和(he)衛芽糖,大(da)多(duo)產酸(suan)產氣(qi)(qi),少數只產酸(suan)不(bu)產氣(qi)(qi)。VP試驗陰性(xing),有(you)賴氨酸(suan)脫羧酶。DNA的G+C含量為50~53%。對熱抵抗力不(bu)強,在60℃15分鐘(zhong)可被殺死(si)。在水中存活2~3周。在5%的石炭酸(suan)中,5分鐘(zhong)死(si)亡。
本屬菌(jun)(jun)按生化(hua)(hua)反(fan)應分(fen)為(wei)4個亞(ya)屬。亞(ya)屬Ⅰ是生化(hua)(hua)反(fan)應典型(xing)的(de)(de)和(he)(he)最常見(jian)的(de)(de)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun);亞(ya)屬Ⅱ和(he)(he)Ⅳ是生化(hua)(hua)反(fan)應不典型(xing)的(de)(de)沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun);亞(ya)屬Ⅲ是亞(ya)利桑那沙(sha)(sha)門(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)。
沙(sha)門氏菌具(ju)有復(fu)雜的抗原(yuan)(yuan)結構,一般(ban)可(ke)分為菌體(O)抗原(yuan)(yuan)、鞭毛(H)抗原(yuan)(yuan)和表(biao)面(Vi)抗原(yuan)(yuan)3種。
生化反(fan)應很(hen)活潑(po),能分解多種糖類和醇。
1)需氧及兼性厭氧菌。
2)在普通瓊脂培養(yang)基上生長良好,培養(yang)24h后,形(xing)成中(zhong)等大小、圓形(xing)、表面(mian)光滑、無色半透明(ming)、邊緣整齊的菌落(luo),其菌落(luo)特征(zheng)亦與大腸桿菌相(xiang)似(無糞臭味)。
3)鑒別培養(yang)基(麥康(kang)凱、SS、伊(yi)紅美(mei)藍(lan)):一般無色菌落(luo)。
4)三糖鐵瓊(qiong)脂斜面:斜面為紅色(se),底(di)部變(bian)黑并產氣。
1)發酵(jiao)葡萄糖,麥(mai)芽糖,甘露醇(chun)和山梨(li)醇(chun)產氣(qi);
2)不發酵乳糖、蔗糖和側金盞花(hua)醇;
3)不產吲哚、V-P反應(ying)陰(yin)性;
4)不(bu)水解尿素和對苯丙(bing)氨(an)酸不(bu)脫(tuo)氨(an)。
傷(shang)(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)、雞(ji)傷(shang)(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)及一(yi)部分(fen)雞(ji)白(bai)痢沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)發(fa)酵糖(tang)(tang)不產氣,大多(duo)數雞(ji)白(bai)痢沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)不發(fa)酵麥芽糖(tang)(tang);除雞(ji)白(bai)痢沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)、豬傷(shang)(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)、甲型副(fu)傷(shang)(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)、傷(shang)(shang)寒(han)沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)和仙臺沙(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)等(deng)外,均(jun)能利用枸(gou)櫞酸鹽。
沙(sha)(sha)門氏菌具有復雜的抗(kang)原(yuan)結構,一般沙(sha)(sha)門氏菌具有菌體(O)抗(kang)原(yuan)、鞭(bian)毛(H)抗(kang)原(yuan)和表面抗(kang)原(yuan)(莢膜(mo)或包膜(mo)抗(kang)原(yuan))三種抗(kang)原(yuan)。
肉(rou)(rou)及(ji)其制(zhi)品的(de)沙(sha)門(men)氏菌檢(jian)出率(lv)美國(guo)為(wei)(wei)20%-25%、英國(guo)為(wei)(wei)9.9%、日本檢(jian)查進口家禽的(de)污(wu)染率(lv)為(wei)(wei)10.3%,國(guo)內肉(rou)(rou)類(lei)沙(sha)門(men)氏菌檢(jian)出率(lv)在1.1%-39.5%。
中國蛋(dan)及其制品沙門氏菌檢出率為3.9%-43.7%,由于吃(chi)蛋(dan)引起鼠傷寒病的(de)病例報(bao)告逐漸(jian)有(you)增加的(de)趨勢。
食品(pin)在(zai)加工、運(yun)輸、出售過程(cheng)中(zhong)往往被沙門氏菌污(wu)染。沙門氏菌在(zai)糞便、土壤、食品(pin)、水中(zhong)可生存5個(ge)月至2年(nian)之久。
恢復期(qi)患者和無癥狀的帶菌者也是常見的傳(chuan)染(ran)源。
廣(guang)泛分(fen)布于自然界,常(chang)常(chang)寄(ji)居在人和(he)動物體內,特別是(shi)家(jia)(jia)禽(qin)、家(jia)(jia)畜(chu)及寵物的(de)腸道(dao)中。主(zhu)要污染的(de)食品有:肉和(he)肉制(zhi)品、蛋和(he)蛋制(zhi)品、奶(nai)和(he)奶(nai)制(zhi)品等。由于沙門氏菌(jun)不(bu)分(fen)解蛋白質,食物被其污染后表面看起來似乎并沒有變化.
沙(sha)門氏菌(jun)感染(ran)癥(zheng)為人畜(chu)共(gong)患感染(ran)性疾(ji)病,主要(yao)由(you)食(shi)用遭(zao)受污染(ran)的食(shi)物(wu)導致,是許多國家食(shi)物(wu)中毒的重要(yao)病源。
典型癥(zheng)狀包括發熱、惡心、嘔(ou)吐、腹(fu)瀉及腹(fu)部絞痛等癥(zheng)狀,通常在(zai)發熱后(hou)72小時內會好轉。嬰(ying)兒、老年人、免疫功能(neng)(neng)低下(xia)的(de)患者則可能(neng)(neng)因沙門氏(shi)菌(jun)進(jin)入血液(ye)而(er)出現嚴重且危及生命的(de)菌(jun)血癥(zheng),少數還會合并腦膜(mo)炎或骨(gu)髓炎。
一般沙(sha)門氏(shi)菌造成的(de)腸胃炎不需要給(gei)予抗生素治療(liao);而(er)以補充水分與電解(jie)質為主;但對于(yu)新生兒、免疫(yi)功能低下患者及特(te)殊(shu)傷員;則需要視情況(kuang)紿予抗生素治療(liao)。
1、餐前、便后、接觸食物前、接觸動物或生蛋后應仔細洗凈雙手。
2、處理生食和熟(shu)食的砧(zhen)板要分開。
3、食物(wu)要熟透(tou)再(zai)吃(尤其是雞蛋(dan)與(yu)家(jia)禽類)。
4、非(fei)現做現吃的食物應(ying)以(yi)保鮮(xian)膜包覆后放進冰(bing)箱保存,再次食用前應(ying)加熱或煮熟。
5、撲(pu)滅(mie)并阻隔蒼蠅等病媒。被蒼蠅沾染、過(guo)期或腐敗(bai)的(de)不(bu)潔(jie)食物(wu)均應丟棄(qi),切(qie)勿食用。
6、水塔(ta)應經常(chang)清洗、消毒。
7、旅(lv)行或野營(ying)時的飲(yin)用水應煮沸并(bing)消毒。
8、如有嘔吐(tu)、腹瀉或(huo)發熱等癥狀(zhuang),應盡快(kuai)就醫。
沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)是美國(guo)(guo)食物(wu)(wu)中(zhong)毒(du)致死的(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)要(yao)原因(yin)。美國(guo)(guo)人(ren)(ren)對(dui)(dui)這種病(bing)菌(jun)(jun)(jun)(jun)一(yi)點都(dou)不(bu)陌生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng),每年全(quan)國(guo)(guo)大(da)(da)(da)約報告40000例(li)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)感(gan)染病(bing)例(li)。但實(shi)際的(de)(de)(de)(de)(de)感(gan)染人(ren)(ren)數可能(neng)要(yao)達20倍以(yi)上(shang),因(yin)為許多輕型(xing)病(bing)人(ren)(ren)可能(neng)未確診,據不(bu)完全(quan)統(tong)計,每年大(da)(da)(da)約有(you)(you)(you)1000人(ren)(ren)死于急(ji)性沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)感(gan)染。但是,以(yi)前各州爆發(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)疫情幾乎都(dou)與(yu)人(ren)(ren)們吃(chi)了(le)(le)染上(shang)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)肉(rou)類(lei)、蛋(dan)類(lei)、乳類(lei)有(you)(you)(you)關,但迄今為止,很少聽說吃(chi)蔬(shu)果(guo)大(da)(da)(da)面(mian)積受沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)污(wu)染甚(shen)至在(zai)(zai)人(ren)(ren)群中(zhong)引(yin)發(fa)大(da)(da)(da)疫情的(de)(de)(de)(de)(de)。對(dui)(dui)此(ci),周福(fu)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)教授(shou)解(jie)釋說,這可能(neng)是西(xi)紅(hong)(hong)柿在(zai)(zai)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長的(de)(de)(de)(de)(de)過(guo)程(cheng)中(zhong),由于空(kong)氣中(zhong)紫外線不(bu)夠(gou)強烈,植物(wu)(wu)在(zai)(zai)灌溉過(guo)程(cheng)或因(yin)土(tu)壤(rang)中(zhong)含有(you)(you)(you)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun),這樣(yang)才使西(xi)紅(hong)(hong)柿的(de)(de)(de)(de)(de)表皮上(shang)沾染了(le)(le)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun),加上(shang)不(bu)少人(ren)(ren)有(you)(you)(you)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)食西(xi)紅(hong)(hong)柿的(de)(de)(de)(de)(de)習慣(guan),如果(guo)沒有(you)(you)(you)清洗干凈(jing),就完全(quan)有(you)(you)(you)可能(neng)發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)感(gan)染。不(bu)光(guang)是食用西(xi)紅(hong)(hong)柿,其他瓜果(guo)蔬(shu)菜也(ye)一(yi)樣(yang)。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)主(zhu)要(yao)污(wu)染肉(rou)類(lei)食品(pin),魚、禽、奶、蛋(dan)類(lei)食品(pin)也(ye)可受此(ci)菌(jun)(jun)(jun)(jun)污(wu)染。沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)食物(wu)(wu)中(zhong)毒(du)全(quan)年都(dou)可發(fa)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng),吃(chi)了(le)(le)未煮透的(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)、死牲(sheng)畜肉(rou)或在(zai)(zai)屠宰后其他環節污(wu)染的(de)(de)(de)(de)(de)牲(sheng)畜肉(rou)是引(yin)起沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)食物(wu)(wu)中(zhong)毒(du)的(de)(de)(de)(de)(de)最主(zhu)要(yao)原因(yin)。有(you)(you)(you)食品(pin)專家指(zhi)出美國(guo)(guo)人(ren)(ren)吃(chi)雞蛋(dan)的(de)(de)(de)(de)(de)習慣(guan)與(yu)國(guo)(guo)人(ren)(ren)不(bu)同(tong),他們喜(xi)歡(huan)吃(chi)半熟的(de)(de)(de)(de)(de)雞蛋(dan)甚(shen)至是生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan),所以(yi)一(yi)旦(dan)雞蛋(dan)里含有(you)(you)(you)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun),感(gan)染的(de)(de)(de)(de)(de)幾率(lv)就比較高(gao)。“在(zai)(zai)國(guo)(guo)內(nei),生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)雞蛋(dan)里含有(you)(you)(you)沙(sha)(sha)(sha)門(men)(men)(men)(men)氏(shi)(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)其實(shi)并不(bu)奇怪,只不(bu)過(guo)國(guo)(guo)人(ren)(ren)喜(xi)歡(huan)將雞蛋(dan)煮熟吃(chi),這樣(yang)就大(da)(da)(da)大(da)(da)(da)減(jian)少了(le)(le)感(gan)染的(de)(de)(de)(de)(de)幾率(lv)。”
由沙門(men)氏菌(jun)引起(qi)(qi)的食(shi)品中毒癥(zheng)狀(zhuang)主要有惡(e)心、嘔吐、腹痛、頭痛、畏寒和腹瀉等,還伴有乏力、肌肉(rou)酸痛、視覺(jue)模糊、中等程度發(fa)熱、躁動不(bu)安和嗜睡,延續(xu)時(shi)間2~3d,平均致死率為4.1%。其主要原(yuan)因是由于攝(she)入了(le)含(han)有大量沙門(men)氏菌(jun)屬的非寄主專一(yi)(yi)性菌(jun)種或血清型的食(shi)品所引起(qi)(qi)的。在攝(she)入含(han)毒食(shi)品之后.癥(zheng)狀(zhuang)一(yi)(yi)般在12~14h內(nei)出現(xian),有些潛伏期較長。
防止沙門氏菌污(wu)染食(shi)品(pin);控制食(shi)品(pin)中沙門氏菌的繁殖;加熱以徹底殺(sha)滅病原(yuan)菌。
沙門氏菌(jun)(jun)(jun)不耐(nai)高溫,食物的(de)中心溫度達70℃以上,持(chi)續5分鐘一般(ban)都可以殺(sha)死(si)包(bao)括沙門氏菌(jun)(jun)(jun)等常見食源性致病菌(jun)(jun)(jun)。家庭中一般(ban)的(de)熱處理烹調方式都可有效殺(sha)滅(mie)該菌(jun)(jun)(jun)。
稱取(qu)25g(mL)樣品(pin)(pin)放入盛有(you)(you)225 mL BPW的無(wu)菌(jun)均(jun)(jun)(jun)質(zhi)杯中(zhong),以(yi)8000 r/min~10 000 r/min均(jun)(jun)(jun)質(zhi)1min~2min,或置于盛有(you)(you)225 mL BPW的無(wu)菌(jun)均(jun)(jun)(jun)質(zhi)袋中(zhong),用(yong)拍(pai)擊式均(jun)(jun)(jun)質(zhi)器拍(pai)打1min~2min。若(ruo)樣品(pin)(pin)為液(ye)態,不需要均(jun)(jun)(jun)質(zhi),振蕩(dang)混勻。如(ru)需測定(ding)pH值(zhi),用(yong)1mol/mL無(wu)菌(jun)NaOH或HCl調pH至(zhi)6.8±0.2。無(wu)菌(jun)操作將樣品(pin)(pin)轉至(zhi)500mL錐形瓶中(zhong),如(ru)使用(yong)均(jun)(jun)(jun)質(zhi)袋,可(ke)直接進行(xing)培養,于36 ℃±1℃培養8h~18h。
如為冷凍(dong)(dong)產(chan)品,應在45℃以下不(bu)超過15min,或2℃~5℃不(bu)超過18h解凍(dong)(dong)。
輕輕搖動(dong)培(pei)養(yang)過的樣品(pin)混(hun)合物,移取1mL,轉(zhuan)種于(yu)10mL TTB內,于(yu)42℃±1℃培(pei)養(yang)18h~24h。同時(shi),另取1mL,轉(zhuan)種于(yu)10 mL SC內,于(yu)36℃±1℃培(pei)養(yang)18h~24h。
分別用接種環取(qu)增菌(jun)(jun)液(ye)1環,劃線接種于一(yi)個BS瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)和一(yi)個XLD瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)(或(huo)HE瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)或(huo)沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)屬(shu)顯色培(pei)(pei)養(yang)基平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban))。于36℃±1℃分別培(pei)(pei)養(yang)18h~24h(XLD瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)、HE瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)、沙(sha)門(men)(men)氏菌(jun)(jun)屬(shu)顯色培(pei)(pei)養(yang)基平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban))或(huo)40h~48h (BS瓊(qiong)(qiong)脂(zhi)平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)),觀察各個平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)上(shang)生(sheng)長的(de)菌(jun)(jun)落,各個平(ping)(ping)(ping)板(ban)(ban)(ban)上(shang)的(de)菌(jun)(jun)落特征見表1。
表(biao) 1 沙門氏菌(jun)(jun)屬在不同選擇(ze)性瓊脂(zhi)平板上(shang)的菌(jun)(jun)落特征
選擇性瓊脂平(ping)板 沙門氏菌
BS 瓊脂(zhi) 菌落(luo)為(wei)黑色(se)(se)有金屬光澤、棕褐(he)色(se)(se)或灰(hui)色(se)(se),菌落(luo)周(zhou)圍(wei)培養基可呈黑色(se)(se)或棕色(se)(se);有些(xie)菌株形(xing)成灰(hui)綠色(se)(se)的(de)菌落(luo),周(zhou)圍(wei)培養基不(bu)變。
HE 瓊脂(zhi) 藍綠色或藍色,多(duo)數菌(jun)落中心黑(hei)色或幾(ji)乎全黑(hei)色;有(you)些菌(jun)株(zhu)為黃色,中心黑(hei)色或幾(ji)乎全黑(hei)色。
XLD 瓊(qiong)脂 菌(jun)(jun)落(luo)(luo)呈(cheng)粉(fen)紅色(se),帶(dai)或(huo)不帶(dai)黑(hei)色(se)中(zhong)心(xin),有些(xie)菌(jun)(jun)株可呈(cheng)現(xian)大的帶(dai)光澤(ze)的黑(hei)色(se)中(zhong)心(xin),或(huo)呈(cheng)現(xian)全部黑(hei)色(se)的菌(jun)(jun)落(luo)(luo);有些(xie)菌(jun)(jun)株為黃色(se)菌(jun)(jun)落(luo)(luo),帶(dai)或(huo)不帶(dai)黑(hei)色(se)中(zhong)心(xin)。
沙門氏菌屬(shu)顯色(se)培(pei)養(yang)(yang) 按照顯色(se)培(pei)養(yang)(yang)基的說明進行判定。
自19世紀后期,沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)首次被(bei)鑒(jian)定(ding)為(wei)人(ren)類的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)種病(bing)(bing)(bing)原(yuan)以來,檢測(ce)方(fang)法(fa)(fa)學都(dou)是建(jian)立(li)在(zai)(zai)采取感染病(bing)(bing)(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)糞(fen)便或血液作為(wei)臨床(chuang)(chuang)病(bing)(bing)(bing)料(liao)(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)基(ji)礎上(shang)。此后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)60年間(jian),用(yong)(yong)于(yu)(yu)從食(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)(li)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)實質上(shang)與(yu)那些(xie)用(yong)(yong)于(yu)(yu)臨床(chuang)(chuang)病(bing)(bing)(bing)料(liao)(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)是相同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)。但至少有(you)(you)三個因(yin)素限制了用(yong)(yong)于(yu)(yu)臨床(chuang)(chuang)病(bing)(bing)(bing)料(liao)(liao)(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)應用(yong)(yong)在(zai)(zai)食(shi)品(pin)(pin)分(fen)析(xi)上(shang)。第(di)一(yi),通(tong)(tong)常,沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)含量水(shui)平(ping)在(zai)(zai)污染食(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)比有(you)(you)感染病(bing)(bing)(bing)人(ren)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)料(liao)(liao)(liao)中(zhong)(zhong)(zhong)要低很多;第(di)二(er),食(shi)品(pin)(pin)本身(shen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)性(xing)質會干擾病(bing)(bing)(bing)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢測(ce),例如,某些(xie)食(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)固有(you)(you)菌(jun)(jun)群可能(neng)(neng)處(chu)在(zai)(zai)一(yi)個很高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)水(shui)平(ping),從而影(ying)響(xiang)特定(ding)細(xi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)選(xuan)擇性(xing)分(fen)離(li)(li)和鑒(jian)定(ding);第(di)三,與(yu)臨床(chuang)(chuang)病(bing)(bing)(bing)料(liao)(liao)(liao)不同(tong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)是,經過加工的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)品(pin)(pin),由于(yu)(yu)加熱(re)、干燥、高含鹽量、酸和冷凍等因(yin)素的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)作用(yong)(yong),其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)受到了尚不致(zhi)命的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)損傷或稱“致(zhi)傷”。這就形(xing)成(cheng)了一(yi)個具(ju)有(you)(you)不同(tong)生(sheng)長特性(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)菌(jun)(jun)群。這種現象對(dui)那些(xie)希(xi)望從食(shi)物(wu)樣品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)(li)出沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)食(shi)品(pin)(pin)分(fen)析(xi)家來說有(you)(you)很大影(ying)響(xiang),因(yin)為(wei)在(zai)(zai)選(xuan)擇培養(yang)(yang)基(ji)上(shang)直接培養(yang)(yang)“致(zhi)傷”的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun)通(tong)(tong)常是以細(xi)菌(jun)(jun)死亡(wang)和試(shi)驗(yan)失敗而告終。為(wei)克服這些(xie)困難(nan),人(ren)們(men)建(jian)立(li)了一(yi)種簡單的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)微生(sheng)物(wu)增殖步驟(zou),專門(men)針對(dui)以食(shi)品(pin)(pin)為(wei)傳播載(zai)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)原(yuan)。雖(sui)然這些(xie)方(fang)法(fa)(fa)本身(shen)證明是可靠的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de),但卻(que)很費(fei)力、耗時,需(xu)要4~7天才能(neng)(neng)完成(cheng)。因(yin)此,在(zai)(zai)需(xu)要及時、快(kuai)速(su)評價食(shi)品(pin)(pin)中(zhong)(zhong)(zhong)微生(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)安全性(xing)時,通(tong)(tong)常不被(bei)采用(yong)(yong)。隨著(zhu)DNA和抗(kang)體技術(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)發展,近10~15年間(jian)發展了無數改(gai)進(jin)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa),其(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)許多可以在(zai)(zai)48h內檢出沙(sha)(sha)(sha)門(men)氏(shi)菌(jun)(jun),這些(xie)方(fang)法(fa)(fa)通(tong)(tong)稱為(wei)快(kuai)速(su)檢測(ce)。
利用抗(kang)(kang)原(yuan)-抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)反(fan)應(ying)(ying)的(de)(de)顯著特異性(xing),來進(jin)行(xing)細菌的(de)(de)鑒別和血清學定(ding)(ding)型,已有(you)半個(ge)多世紀(ji)的(de)(de)歷史。細菌菌體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)或鞭毛抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)特異性(xing)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)存在,使(shi)得人(ren)們可以(yi)建立(li)一(yi)些快速方(fang)法(fa)(fa)來檢(jian)(jian)測(ce)(ce)以(yi)食(shi)品(pin)為(wei)(wei)載(zai)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)病原(yuan)。已經建立(li)的(de)(de)沙門氏菌免(mian)疫(yi)(yi)(yi)學檢(jian)(jian)測(ce)(ce)方(fang)法(fa)(fa)有(you)許多種,大致可分(fen)(fen)為(wei)(wei)以(yi)酶(mei)標抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ELISA),熒光抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)染色(免(mian)疫(yi)(yi)(yi)熒光法(fa)(fa)),同位(wei)素(su)標記抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(放射(she)免(mian)疫(yi)(yi)(yi)試驗(yan))為(wei)(wei)基(ji)(ji)礎的(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)及其(qi)它多種以(yi)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)為(wei)(wei)基(ji)(ji)礎,利用乳膠(jiao)凝集、免(mian)疫(yi)(yi)(yi)傳感器、免(mian)疫(yi)(yi)(yi)擴散(san)及免(mian)疫(yi)(yi)(yi)色譜(pu)技術的(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)。但常規(gui)中最(zui)廣(guang)泛采用的(de)(de)是以(yi)雙位(wei)點ELISA技術即夾心ELISA為(wei)(wei)基(ji)(ji)礎的(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)。此法(fa)(fa)改進(jin)后用有(you)放射(she)活性(xing)的(de)(de)同位(wei)素(su)替(ti)代標記抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti),概括地說(shuo),是指以(yi)固定(ding)(ding)在固體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)基(ji)(ji)質上(shang)的(de)(de)“捕捉”抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)來捕捉目(mu)標抗(kang)(kang)原(yuan),經洗(xi)(xi)滌(di)除去(qu)未結合的(de)(de)成分(fen)(fen),加(jia)入第(di)(di)二(er)種酶(mei)標抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)(ti),此者結合在捕捉到的(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)不(bu)同位(wei)點上(shang),第(di)(di)二(er)次洗(xi)(xi)滌(di)后加(jia)入酶(mei)作(zuo)(zuo)用基(ji)(ji)質,并令其(qi)與顏色成分(fen)(fen)反(fan)應(ying)(ying),然后用分(fen)(fen)光光度(du)法(fa)(fa)即很(hen)容易檢(jian)(jian)測(ce)(ce)到目(mu)標抗(kang)(kang)原(yuan)。采用微量滴定(ding)(ding)板作(zuo)(zuo)為(wei)(wei)固態基(ji)(ji)質使(shi)反(fan)應(ying)(ying)形式標準化,并促成其(qi)自(zi)動(dong)化。
黎兆滾等(deng)人(ren)首次(ci)在國內口(kou)岸系統(tong)應用(yong)(yong)(yong)(yong)微量(liang)板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonelletest1)對(dui)進(jin)(jin)出口(kou)動(dong)物(wu)產品(pin)(pin)(魚粉(fen)(fen)、肉(rou)骨粉(fen)(fen)等(deng))進(jin)(jin)行(xing)(xing)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測。該法(fa)(fa)(fa)(fa)采用(yong)(yong)(yong)(yong)預(yu)先包被了(le)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(A-E群)單(dan)克隆抗體(ti)(ti)的(de)(de)(de)微量(liang)板(ban),加入(ru)經(jing)增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理的(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin),反應后再加入(ru)一定的(de)(de)(de)指示(shi)劑,作用(yong)(yong)(yong)(yong)畢后用(yong)(yong)(yong)(yong)酶標(biao)(biao)儀(yi)測定OD值(zhi)(zhi)來判定結(jie)果。食(shi)物(wu)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)經(jing)適(shi)當(dang)的(de)(de)(de)增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理,也可(ke)用(yong)(yong)(yong)(yong)此法(fa)(fa)(fa)(fa)進(jin)(jin)行(xing)(xing)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)(jian)測。ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)出沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)極(ji)限范圍在105~106個細胞/ml,因此,要(yao)(yao)得出可(ke)靠的(de)(de)(de)結(jie)果,食(shi)物(wu)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)首先必需(xu)進(jin)(jin)行(xing)(xing)預(yu)增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)、選(xuan)擇性增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),通(tong)常還(huan)要(yao)(yao)在含有D-甘露糖的(de)(de)(de)肉(rou)湯(M肉(rou)湯)中(zhong)(zhong)進(jin)(jin)行(xing)(xing)后增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun),以促進(jin)(jin)鞭(bian)毛發育(yu)。總的(de)(de)(de)來說,標(biao)(biao)準的(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)制(zhi)備(bei),約需(xu)要(yao)(yao)經(jing)過(guo)40~48h的(de)(de)(de)孵育(yu)才能完成。黎兆滾等(deng)人(ren)的(de)(de)(de)微量(liang)板(ban)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(Salmonellatest1)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)制(zhi)備(bei)過(guo)程(cheng)分三步,共耗時24h:①選(xuan)用(yong)(yong)(yong)(yong)營養肉(rou)湯進(jin)(jin)行(xing)(xing)預(yu)增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(6h),使(shi)“致傷”、冷凍的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)復蘇(su)。②使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)選(xuan)擇性培養基(ji)RV進(jin)(jin)行(xing)(xing)增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(14h),使(shi)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)大量(liang)繁殖,同時抑(yi)制(zhi)其(qi)它(ta)雜(za)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)生長。③使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)營養肉(rou)湯(蛋白(bai)胨水)進(jin)(jin)行(xing)(xing)后增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(4h),使(shi)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)的(de)(de)(de)數量(liang)大大增加。比上(shang)(shang)述標(biao)(biao)準的(de)(de)(de)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)制(zhi)備(bei)過(guo)程(cheng)縮(suo)短(duan)了(le)一半的(de)(de)(de)時間(jian)。ELISA方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)本身,則僅需(xu)要(yao)(yao)大約2h而已(yi)(其(qi)中(zhong)(zhong)30min是操(cao)作時間(jian),90min是孵育(yu)時間(jian))。相比之下,黎兆滾等(deng)人(ren)的(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)可(ke)在27h內完成,比上(shang)(shang)述方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)縮(suo)短(duan)了(le)一半的(de)(de)(de)時間(jian),頗值(zhi)(zhi)得推(tui)廣應用(yong)(yong)(yong)(yong)。最新式(shi)的(de)(de)(de)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)免(mian)(mian)疫(yi)學檢(jian)(jian)測法(fa)(fa)(fa)(fa),利用(yong)(yong)(yong)(yong)經(jing)特(te)(te)異(yi)性抗體(ti)(ti)敏化的(de)(de)(de)免(mian)(mian)疫(yi)色(se)(se)譜(pu)卡片(pian)(pian)為(wei)(wei)基(ji)礎。幾滴樣(yang)(yang)品(pin)(pin)加到卡片(pian)(pian)上(shang)(shang),結(jie)果可(ke)以直接用(yong)(yong)(yong)(yong)肉(rou)眼讀出。免(mian)(mian)疫(yi)色(se)(se)譜(pu)卡片(pian)(pian)極(ji)易操(cao)作,且由于無(wu)需(xu)要(yao)(yao)特(te)(te)殊設備(bei),很(hen)適(shi)合小(xiao)型實驗(yan)室使(shi)用(yong)(yong)(yong)(yong)。盡管卡片(pian)(pian)檢(jian)(jian)測法(fa)(fa)(fa)(fa)與ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)一樣(yang)(yang)需(xu)要(yao)(yao)對(dui)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)進(jin)(jin)行(xing)(xing)增菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)處(chu)理,但(dan)它(ta)(卡片(pian)(pian)法(fa)(fa)(fa)(fa))本身通(tong)常需(xu)時不超(chao)過(guo)10min,如果采用(yong)(yong)(yong)(yong)黎兆滾等(deng)人(ren)的(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)制(zhi)備(bei)法(fa)(fa)(fa)(fa),則可(ke)使(shi)操(cao)作時間(jian)更為(wei)(wei)縮(suo)短(duan)。
細(xi)(xi)胞核(he)酸(suan)DNA和(he)RNA是(shi)(shi)唯一(yi)一(yi)類可(ke)以(yi)(yi)(yi)攜帶信(xin)息的(de)(de)(de)(de)(de)(de)大(da)分(fen)子。由(you)(you)于(yu)所有的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞都含(han)有這種(zhong)分(fen)子,可(ke)以(yi)(yi)(yi)利(li)用(yong)它作為(wei)(wei)檢(jian)測(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標靶(ba)(ba)。標靶(ba)(ba)通常是(shi)(shi)一(yi)個(ge)(ge)(ge)特異性(xing)(xing)核(he)酸(suan)序(xu)列(lie),它可(ke)通過(guo)(guo)以(yi)(yi)(yi)補體(ti)(ti)(ti)核(he)酸(suan)分(fen)子作為(wei)(wei)探(tan)針來(lai)檢(jian)出。與(yu)免疫學(xue)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)(xiang)似(si),探(tan)針也(ye)需(xu)(xu)要(yao)(yao)加(jia)附適當的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標記(ji),如(ru)放射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)、酶(mei)或(huo)發(fa)(fa)光(guang)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)標識物。Fitts等人(ren)在(zai)食品(pin)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)測(ce)中(zhong)引入了(le)第一(yi)代DNA—RNA雜交技術,此法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)應(ying)用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)探(tan)針含(han)有用(yong)放射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)標記(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)傷寒沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)DNA片段(duan),其(qi)(qi)(qi)敏感(gan)性(xing)(xing)高,經(jing)大(da)約(yue)48h的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)菌(jun)(jun)步驟(zou)后(hou),檢(jian)測(ce)極限可(ke)達108個(ge)(ge)(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)/ml,但由(you)(you)于(yu)要(yao)(yao)使用(yong)放射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su),只能在(zai)專(zhuan)門(men)(men)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)實驗室應(ying)用(yong),此方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)點都被抵(di)消了(le)。為(wei)(wei)此,以(yi)(yi)(yi)核(he)酸(suan)雜交為(wei)(wei)基礎(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第二代技術—比色(se)(se)計已發(fa)(fa)展起來(lai)。這種(zhong)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)依(yi)賴于(yu)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)核(he)糖體(ti)(ti)(ti)RNA(rRNA)—核(he)糖體(ti)(ti)(ti)發(fa)(fa)育過(guo)(guo)程中(zhong)儲存的(de)(de)(de)(de)(de)(de)核(he)酸(suan)成(cheng)分(fen)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)。核(he)糖體(ti)(ti)(ti)是(shi)(shi)細(xi)(xi)胞蛋白質合成(cheng)器的(de)(de)(de)(de)(de)(de)一(yi)部分(fen),每個(ge)(ge)(ge)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)細(xi)(xi)胞中(zhong)存在(zai)5000~20000個(ge)(ge)(ge)復(fu)制體(ti)(ti)(ti),而(er)相(xiang)(xiang)比之下染(ran)色(se)(se)體(ti)(ti)(ti)DNA復(fu)制體(ti)(ti)(ti)僅2~10個(ge)(ge)(ge)。這種(zhong)天然富含(han)rRNA標靶(ba)(ba)序(xu)列(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情況使得用(yong)無(wu)輻射(she)(she)計檢(jian)測(ce)成(cheng)為(wei)(wei)可(ke)能,同(tong)時又保(bao)(bao)持了(le)與(yu)放射(she)(she)性(xing)(xing)同(tong)位(wei)素(su)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)相(xiang)(xiang)當或(huo)更(geng)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏感(gan)性(xing)(xing)。其(qi)(qi)(qi)另一(yi)優(you)點是(shi)(shi)由(you)(you)于(yu)rRNA為(wei)(wei)單(dan)鏈(lian)(lian)(而(er)DNA為(wei)(wei)雙鏈(lian)(lian)),雜交前無(wu)需(xu)(xu)經(jing)過(guo)(guo)變性(xing)(xing)步驟(zou)。要(yao)(yao)得到(dao)陽性(xing)(xing)結果,此法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)需(xu)(xu)要(yao)(yao)105個(ge)(ge)(ge)靶(ba)(ba)細(xi)(xi)胞/ml,因此對(dui)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)檢(jian)測(ce)來(lai)說,需(xu)(xu)要(yao)(yao)進(jin)行預增(zeng)菌(jun)(jun)和(he)選擇性(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun),總共約(yue)50h。rRNA探(tan)針法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)比沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(酶(mei)聯免疫檢(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa))更(geng)耗時,但二者成(cheng)本(ben)相(xiang)(xiang)近。食品(pin)細(xi)(xi)菌(jun)(jun)檢(jian)測(ce)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)新(xin)進(jin)展是(shi)(shi)在(zai)化學(xue)擴增(zeng)體(ti)(ti)(ti)系(xi)方(fang)(fang)(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)展,即聚合酶(mei)鏈(lian)(lian)反(fan)(fan)應(ying)(PCR),用(yong)該體(ti)(ti)(ti)系(xi)可(ke)對(dui)制備好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)進(jin)行細(xi)(xi)菌(jun)(jun)DNA擴增(zeng),以(yi)(yi)(yi)便更(geng)易(yi)于(yu)用(yong)諸如(ru)凝膠電泳(yong)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)或(huo)比色(se)(se)型ELISA法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)檢(jian)測(ce)。用(yong)于(yu)檢(jian)測(ce)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)和(he)其(qi)(qi)(qi)它以(yi)(yi)(yi)食物為(wei)(wei)載體(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)病原的(de)(de)(de)(de)(de)(de)PCR方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)業已建立(li),其(qi)(qi)(qi)中(zhong)一(yi)些(xie)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)顯(xian)示了(le)極好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)敏感(gan)性(xing)(xing)。但該法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)較(jiao)難(nan)自動化,且必需(xu)(xu)經(jing)選擇性(xing)(xing)增(zeng)菌(jun)(jun)以(yi)(yi)(yi)稀(xi)釋可(ke)能干擾檢(jian)測(ce)反(fan)(fan)應(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)。一(yi)個(ge)(ge)(ge)完(wan)(wan)整(zheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)以(yi)(yi)(yi)PCR為(wei)(wei)基礎(chu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa),需(xu)(xu)要(yao)(yao)2天才能完(wan)(wan)成(cheng),很大(da)程度上(shang)抵(di)銷了(le)其(qi)(qi)(qi)高敏感(gan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)優(you)點,但這種(zhong)方(fang)(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)對(dui)那些(xie)含(han)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)較(jiao)少或(huo)沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)“致傷”嚴(yan)重(zhong)難(nan)以(yi)(yi)(yi)復(fu)蘇而(er)仍保(bao)(bao)有沙(sha)門(men)(men)氏(shi)菌(jun)(jun)rRNA的(de)(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)尤其(qi)(qi)(qi)有效。