一、膠原酶簡介

膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)按其存在(zai)的(de)(de)(de)(de)方式不同可分為(wei)人(ren)體內(nei)源(yuan)性(xing)膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)和(he)藥用膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)兩種(zhong)。人(ren)體內(nei)源(yuan)性(xing)膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)是(shi)指(zhi)(zhi)人(ren)體內(nei)部本身所具有的(de)(de)(de)(de)膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)，如牙齦(yin)、觸膜等上皮組織和(he)關(guan)節滑膜、椎間盤內(nei)都不同程(cheng)度的(de)(de)(de)(de)存在(zai)著這種(zhong)膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)，它在(zai)體內(nei)膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)蛋白的(de)(de)(de)(de)分解(jie)過程(cheng)中發揮著不可或缺的(de)(de)(de)(de)作用。藥用膠(jiao)(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)是(shi)指(zhi)(zhi)利用生物(wu)制(zhi)藥的(de)(de)(de)(de)高科技手(shou)段從(cong)溶(rong)組織梭狀芽孢桿(gan)菌的(de)(de)(de)(de)發酵液中提(ti)取(qu)、純化(hua)并精制(zhi)而得的(de)(de)(de)(de)白色或類白色無菌凍干粉針生物(wu)制(zhi)劑。

膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)(mei)（collagenase）是從溶組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)梭(suo)狀細(xi)(xi)胞(bao)芽孢(bao)桿菌提取制備的(de)(de)，主要水解結締組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)中膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)蛋(dan)白成分。當擬(ni)消化的(de)(de)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)較(jiao)硬，內含較(jiao)多結締組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)或膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)成分時，用胰蛋(dan)白酶(mei)(mei)(mei)解離(li)細(xi)(xi)胞(bao)的(de)(de)效果較(jiao)差，這(zhe)時可采(cai)用膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)(mei)解離(li)細(xi)(xi)胞(bao)法。 膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)(mei)僅對(dui)細(xi)(xi)胞(bao)間質有消化作用而(er)對(dui)上皮細(xi)(xi)胞(bao)影響(xiang)不大。因此(ci)適于(yu)消化分離(li)纖維性組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)、上皮及(ji)癌組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)，可使上皮細(xi)(xi)胞(bao)與膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)成分分離(li)而(er)不受損(sun)害。常用劑量為(wei)最終濃度200U/ml（約為(wei)1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)(mei)分為(wei)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及(ji)肝細(xi)(xi)胞(bao)專用膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)(mei)，要根據所(suo)要分離(li)消化的(de)(de)組(zu)(zu)(zu)織(zhi)(zhi)類型選擇膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶(mei)(mei)(mei)類型。

1、膠(jiao)原酶Ⅰ用于上(shang)皮、肺(fei)，脂肪和腎(shen)上(shang)腺組(zu)織細胞(bao)的分(fen)離(li)。用于消化組(zu)織中連(lian)接部分(fen)使(shi)其成為單個細胞(bao)，用于哺(bu)乳動細胞(bao)的分(fen)離(li)。

2、膠原(yuan)酶Ⅳ包含至少7種(zhong)蛋(dan)白(bai)酶成分(fen)(fen)，分(fen)(fen)子(zi)量從68-130KD不等。它能消化多種(zhong)組織。

3、膠原酶Ⅴ包含至少(shao)7種蛋白酶成(cheng)分，分子量(liang)從(cong)68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離(li)，將結締組織分離(li)成(cheng)單個(ge)細胞。

4、膠原酶Ⅱ適用于肝臟(zang)(zang)，骨，甲(jia)狀腺，心臟(zang)(zang)和唾液腺組織(zhi)。

二、如何配置膠原酶

膠(jiao)原酶溶(rong)液同(tong)胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。

注意：因為Ⅰ型膠(jiao)原酶(mei)(mei)分子(zi)顆粒比胰酶(mei)(mei)大，不容易過濾(lv)，因此可以用(yong)蔡式濾(lv)器過濾(lv)除菌。 　　鈣、鎂離子(zi)和血(xue)清成分不會影響膠(jiao)原酶(mei)(mei)的消化作用(yong)，因而可用(yong)BSS（如D-hanks或(huo)者PBS）或(huo)含血(xue)清的培(pei)養液配制。

三、膠原酶的使用

1、將漂(piao)洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm左右小塊。

2、將組織(zhi)塊放(fang)入離心(xin)管（三(san)角燒(shao)瓶）中加(jia)入30~50倍(bei)體(ti)積的膠原酶溶液(ye)，旋緊蓋子(zi)（密(mi)封燒(shao)瓶）。

3、將燒(shao)瓶放入(ru)37℃水(shui)浴(yu)或(huo)者37℃孵箱內(nei)，每隔3min振搖一(yi)次，如能(neng)放在37℃的(de)恒(heng)溫震蕩水(shui)浴(yu)箱中則(ze)更好。消(xiao)化(hua)時間(jian)與(yu)組(zu)織的(de)類別很有關系，對(dui)(dui)于某(mou)些腫(zhong)瘤組(zu)織或(huo)其他(ta)較致密(mi)結締組(zu)織，消(xiao)化(hua)時間(jian)4~48h，對(dui)(dui)于容易(yi)消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織可(ke)以采用37℃震蕩消(xiao)化(hua)15~45min，也可(ke)以根據(ju)具體情(qing)況而(er)定。如組(zu)織塊(kuai)已分(fen)(fen)(fen)散而(er)失(shi)去塊(kuai)的(de)形狀，一(yi)經搖動即(ji)成(cheng)(cheng)細(xi)(xi)胞(bao)團或(huo)單個細(xi)(xi)胞(bao)，可(ke)以認為(wei)已消(xiao)化(hua)充分(fen)(fen)(fen)。上皮(pi)(pi)組(zu)織經膠原酶消(xiao)化(hua)后，由于上皮(pi)(pi)細(xi)(xi)胞(bao)對(dui)(dui)此酶有耐受性，可(ke)能(neng)仍有一(yi)些細(xi)(xi)胞(bao)團未完全分(fen)(fen)(fen)散，但成(cheng)(cheng)團的(de)上皮(pi)(pi)細(xi)(xi)胞(bao)比分(fen)(fen)(fen)散的(de)單個上皮(pi)(pi)細(xi)(xi)胞(bao)更易(yi)生長，因(yin)此，如無特殊(shu)需要可(ke)以不必(bi)再(zai)進一(yi)步處(chu)理。

4、收集消化液（有時含個別組織塊及(ji)沒有充分消化的組織碎屑則(ze)需用100目(mu)不銹鋼網過濾），離(li)心1000r/min，5min，去除上清(qing)，用Hanks液或者無血(xue)清(qing)培(pei)養液離(li)心漂洗(xi)1~2次，去除上清(qing)，加培(pei)養液制成細胞懸液，接種培(pei)養瓶。