一、膠原酶簡介

膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)按其(qi)存在的(de)(de)方式(shi)不(bu)同(tong)可分為人體(ti)內源性膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)和藥用(yong)膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)兩種(zhong)。人體(ti)內源性膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)是指人體(ti)內部本身所具有(you)的(de)(de)膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)，如牙齦(yin)、觸膜(mo)等上皮組織(zhi)和關節(jie)滑(hua)膜(mo)、椎間(jian)盤內都不(bu)同(tong)程度的(de)(de)存在著這種(zhong)膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)，它在體(ti)內膠(jiao)原(yuan)(yuan)蛋(dan)白的(de)(de)分解過程中(zhong)發(fa)揮著不(bu)可或缺的(de)(de)作用(yong)。藥用(yong)膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)是指利用(yong)生物制(zhi)(zhi)藥的(de)(de)高科技手(shou)段(duan)從(cong)溶組織(zhi)梭狀芽孢桿(gan)菌的(de)(de)發(fa)酵液中(zhong)提(ti)取、純化并(bing)精(jing)制(zhi)(zhi)而得的(de)(de)白色或類白色無菌凍干粉針生物制(zhi)(zhi)劑。

膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶（collagenase）是從溶組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)梭狀細(xi)(xi)胞芽(ya)孢桿菌(jun)提取制備(bei)的(de)，主要(yao)水解結締組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)中膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)蛋白(bai)成分(fen)(fen)(fen)。當擬消(xiao)(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)較硬，內含(han)較多結締組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)或膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)成分(fen)(fen)(fen)時，用(yong)胰蛋白(bai)酶解離細(xi)(xi)胞的(de)效果較差，這時可采用(yong)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶解離細(xi)(xi)胞法。 膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶僅對(dui)細(xi)(xi)胞間質有消(xiao)(xiao)化作用(yong)而對(dui)上(shang)皮細(xi)(xi)胞影響不大(da)。因此適于消(xiao)(xiao)化分(fen)(fen)(fen)離纖維性組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)、上(shang)皮及(ji)癌(ai)組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)，可使上(shang)皮細(xi)(xi)胞與(yu)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)成分(fen)(fen)(fen)分(fen)(fen)(fen)離而不受損害(hai)。常用(yong)劑量為(wei)(wei)最終濃(nong)度200U/ml（約(yue)為(wei)(wei)1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶分(fen)(fen)(fen)為(wei)(wei)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型(xing)(xing)以及(ji)肝細(xi)(xi)胞專用(yong)膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶，要(yao)根據(ju)所要(yao)分(fen)(fen)(fen)離消(xiao)(xiao)化的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)(zhi)類型(xing)(xing)選擇膠(jiao)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)酶類型(xing)(xing)。

1、膠原(yuan)酶Ⅰ用(yong)于(yu)上(shang)皮、肺，脂肪和腎上(shang)腺(xian)組織(zhi)細胞的分離。用(yong)于(yu)消化組織(zhi)中連接部(bu)分使其成為(wei)單個細胞，用(yong)于(yu)哺乳動細胞的分離。

2、膠原酶Ⅳ包含(han)至少(shao)7種蛋白(bai)酶成分，分子量(liang)從(cong)68-130KD不等。它能消化多種組(zu)織。

3、膠(jiao)原酶Ⅴ包含(han)至少7種蛋(dan)白酶成(cheng)分，分子(zi)量從68-130KD不等。它(ta)可用于(yu)胰腺(xian)小島組織(zhi)的分離，將結締組織(zhi)分離成(cheng)單個細胞。

4、膠原酶Ⅱ適用(yong)于肝臟，骨，甲狀(zhuang)腺(xian)，心臟和唾液腺(xian)組織。

二、如何配置膠原酶

膠原(yuan)酶(mei)溶液(ye)同胰蛋(dan)白酶(mei)一樣配制、消毒滅菌和儲藏。

注意：因為Ⅰ型膠原(yuan)酶(mei)分(fen)子(zi)顆粒(li)比(bi)胰酶(mei)大，不(bu)容易過濾，因此可以用(yong)(yong)蔡式濾器(qi)過濾除菌(jun)。 　　鈣、鎂離子(zi)和(he)血(xue)清(qing)成分(fen)不(bu)會影響(xiang)膠原(yuan)酶(mei)的消化作用(yong)(yong)，因而可用(yong)(yong)BSS（如(ru)D-hanks或者PBS）或含血(xue)清(qing)的培養(yang)液(ye)配制。

三、膠原酶的使用

1、將(jiang)漂洗、修剪干凈的(de)組織剪成1~2mm左右小塊。

2、將組織塊(kuai)放(fang)入(ru)離(li)心管(guan)（三角燒瓶）中加(jia)入(ru)30~50倍體積的(de)膠原酶溶液，旋緊蓋(gai)子（密封燒瓶）。

3、將(jiang)燒瓶放入(ru)37℃水浴或者37℃孵箱內(nei)，每隔3min振搖(yao)一(yi)次，如能(neng)放在37℃的(de)恒溫震蕩(dang)水浴箱中則更好。消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)時間與組織的(de)類別很有關系，對(dui)于(yu)某些腫瘤組織或其他較致密結締組織，消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)時間4~48h，對(dui)于(yu)容易(yi)消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)的(de)組織可以采用37℃震蕩(dang)消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)15~45min，也可以根據具(ju)體情(qing)況(kuang)而定。如組織塊(kuai)已分(fen)(fen)散(san)而失去塊(kuai)的(de)形(xing)狀，一(yi)經(jing)搖(yao)動即成細(xi)胞(bao)(bao)團(tuan)或單(dan)個(ge)(ge)細(xi)胞(bao)(bao)，可以認為已消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)充分(fen)(fen)。上皮組織經(jing)膠原酶消(xiao)(xiao)(xiao)化(hua)后，由于(yu)上皮細(xi)胞(bao)(bao)對(dui)此(ci)酶有耐受性(xing)，可能(neng)仍(reng)有一(yi)些細(xi)胞(bao)(bao)團(tuan)未完全分(fen)(fen)散(san)，但成團(tuan)的(de)上皮細(xi)胞(bao)(bao)比分(fen)(fen)散(san)的(de)單(dan)個(ge)(ge)上皮細(xi)胞(bao)(bao)更易(yi)生長(chang)，因此(ci)，如無特殊(shu)需要可以不必再進一(yi)步處理。

4、收集(ji)消化液（有時含個別組織(zhi)塊(kuai)及沒(mei)有充(chong)分消化的(de)組織(zhi)碎屑則需用100目不銹鋼網過濾），離心1000r/min，5min，去(qu)除上(shang)清(qing)，用Hanks液或者無血清(qing)培養液離心漂(piao)洗1~2次，去(qu)除上(shang)清(qing)，加培養液制成(cheng)細胞(bao)懸(xuan)液，接種(zhong)培養瓶。