一、培養基配制方法

培養基是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料，一般是根據配方配制而成的，配方沒有特殊要求的話，一般培養基的配制(zhi)方法步驟如下：

1、配料

配方(fang)換算→在容器中(zhong)加(jia)入(ru)少量(liang)水(shui)（蒸餾水(shui)，自然水(shui)）→按照(zhao)配方(fang)稱取各種藥(yao)品（依次加(jia)入(ru)）→加(jia)足所需(xu)水(shui)量(liang)（一藥(yao)一勺，取藥(yao)后立(li)即(ji)蓋上(shang)瓶蓋）。

2、溶解

淀粉溶解：少(shao)量(liang)冷(leng)水調成(cheng)糊狀。

加熱溶解，特別(bie)是(shi)加有瓊脂(zhi)的培養(yang)基，一定要煮沸，瓊脂(zhi)的熔解溫度(du)95-97℃ ，且需要邊加熱邊攪拌以(yi)防止燒焦。

3、調PH

用(yong)1N的(de)(de)鹽酸或1N的(de)(de) NaOH把(ba)培養基調節到所要求的(de)(de)值。

4、過濾

濾(lv)紙(zhi)或棉花進(jin)行過濾(lv)。（有時可以省去）

5、分裝

一般培養(yang)基放在三角瓶或試管(guan)中滅菌使用。

（1）三角瓶

若(ruo)作靜置培(pei)養(yang)，則100ml培(pei)養(yang)基/250ml的(de)三角(jiao)(jiao)瓶(ping)，最多(duo)不能(neng)超過150ml培(pei)養(yang)基/250ml的(de)三角(jiao)(jiao)瓶(ping)，否則滅菌(jun)時培(pei)養(yang)基沸(fei)騰容(rong)易污(wu)染棉塞，造成染菌(jun)；若(ruo)作搖(yao)瓶(ping)培(pei)養(yang)，則15-20ml培(pei)養(yang)基/250ml的(de)三角(jiao)(jiao)瓶(ping)，保(bao)證通氣(qi)良好。

（2）試管分裝

液體培養基一般裝(zhuang)4-5ml，約試(shi)管的(de)1/4高度(du)(du)；固體斜面培養基一般裝(zhuang)3-4ml，約試(shi)管的(de)1/5高度(du)(du)。

6、包扎

分裝好(hao)后，塞上(shang)棉(mian)塞，在用(yong)牛皮紙將棉(mian)塞包裹(guo)好(hao)，防止(zhi)滅菌時(shi)水(shui)份進入把(ba)棉(mian)塞弄濕。

7、滅菌

按配方(fang)上要求(qiu)的(de)溫度、壓(ya)力進(jin)行高壓(ya)蒸汽滅(mie)菌。如(ru)果(guo)滅(mie)菌的(de)溫度太(tai)高，營養成(cheng)分會被(bei)破壞，培(pei)養基中的(de)糖、氨基酸會使培(pei)養基的(de)顏色(se)變深。

8、擺斜面

滅菌后(hou)需要擺(bai)斜(xie)面的試管要趁熱斜(xie)著擺(bai)放，使其凝固成為一個斜(xie)面，約占試管長度的1/2。

9、貯存

培養(yang)基在30℃下放置(zhi)一(yi)天，無污(wu)染的即(ji)可使用。一(yi)般用牛皮紙包裹好存(cun)放于2-8℃冰(bing)箱中備用。

二、培養基配制注意事項

1、分裝好的(de)(de)培養基應當天進行滅(mie)菌(jun)處理（2小時內滅(mie)菌(jun)最佳），分裝的(de)(de)量不宜超(chao)過(guo)容器的(de)(de)2/3以免滅(mie)菌(jun)時外溢。

2、實驗(yan)室采用(yong)濕熱滅(mie)菌(jun)對培(pei)養基(ji)進行(xing)滅(mie)菌(jun)處(chu)理，按(an)照培(pei)養基(ji)使用(yong)說(shuo)明采用(yong)合適的滅(mie)菌(jun)溫度和(he)時間。尤其含糖量較高的培(pei)養基(ji)溫度不應太高，過高會導致糖分焦化，影(ying)響質量。

3、每次制備培(pei)(pei)養基均應(ying)有配制記(ji)(ji)(ji)錄，記(ji)(ji)(ji)錄應(ying)復制一份(fen)，原記(ji)(ji)(ji)錄保存備查，復制記(ji)(ji)(ji)錄隨制好(hao)的(de)培(pei)(pei)養基一同存放(fang)、以防發生(sheng)混亂。

4、培(pei)養(yang)基應存放(fang)于冷(leng)暗(an)處，最好(hao)放(fang)于普通冰箱內。放(fang)置(zhi)時間(jian)不(bu)宜(yi)超過一(yi)周，傾(qing)注的平板培(pei)養(yang)基不(bu)宜(yi)超過3天。每批培(pei)養(yang)基均必須(xu)附有該批培(pei)養(yang)基制備記錄(lu)副頁或(huo)明顯標簽。

三、培養基的配制原則有哪些

培養基的配制(zhi)除(chu)了要注意(yi)正確的方法(fa)以(yi)及(ji)一些(xie)注意(yi)事(shi)項(xiang)外，還(huan)要注意(yi)遵循以(yi)下幾(ji)個(ge)原(yuan)則：

1、選擇適宜的營養物質

總體而言，所有(you)微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)長繁殖均需要培(pei)養(yang)(yang)基含有(you)碳源(yuan)、氮源(yuan)、無(wu)機鹽、生(sheng)(sheng)(sheng)長因(yin)子、水及能(neng)源(yuan)，但由(you)于微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)營(ying)養(yang)(yang)類型復雜，不同(tong)微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)對(dui)營(ying)養(yang)(yang)物(wu)質的(de)需求(qiu)是(shi)不一樣的(de)，因(yin)此首先要根(gen)據不同(tong)微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)的(de)營(ying)養(yang)(yang)需求(qiu)配(pei)制(zhi)針對(dui)性強的(de)培(pei)養(yang)(yang)基。

就微生(sheng)物主(zhu)要類(lei)型而言，有細(xi)菌(jun)(jun)、放線菌(jun)(jun)、酵母菌(jun)(jun)、霉(mei)菌(jun)(jun)、原生(sheng)動(dong)物、藻類(lei)及病毒(du)之分，培(pei)養(yang)它(ta)們所需的培(pei)養(yang)基(ji)各不相同(tong)。在實驗(yan)室中常用牛肉膏蛋白胨培(pei)養(yang)基(ji)（或簡稱普通肉湯(tang)培(pei)養(yang)基(ji)）培(pei)養(yang)細(xi)菌(jun)(jun)，用高氏(shi)I號合成培(pei)養(yang)基(ji)培(pei)養(yang)放線菌(jun)(jun)，培(pei)養(yang)酵母菌(jun)(jun)一(yi)般(ban)(ban)用麥(mai)芽汁培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)霉(mei)菌(jun)(jun)則一(yi)般(ban)(ban)用查氏(shi)合成培(pei)養(yang)基(ji)。

2、營養物質濃度及配比合適

培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)營養(yang)物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)濃(nong)(nong)度合適時微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)才能(neng)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)良(liang)好(hao)，營養(yang)物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)濃(nong)(nong)度過低(di)時不(bu)能(neng)滿足微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)正常生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)所(suo)需，濃(nong)(nong)度過高時則可能(neng)對微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)起抑制作用(yong)。另外，培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)各營養(yang)物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)之間的濃(nong)(nong)度配比(bi)也直接影響微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)的生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)繁殖和(he)（或）代謝(xie)產物(wu)(wu)的形(xing)成和(he)積(ji)累，其中(zhong)碳(tan)(tan)氮(dan)比(bi)（C/N）的影響較大。嚴格地講，碳(tan)(tan)氮(dan)比(bi)指培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)碳(tan)(tan)元(yuan)素(su)與氮(dan)元(yuan)素(su)的物(wu)(wu)質(zhi)(zhi)的量比(bi)值，有時也指培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)還原糖與粗蛋白之比(bi)。

3、控制pH條件

培養(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)pH必須控制(zhi)在一定(ding)的(de)(de)范圍內，以滿足(zu)不同(tong)類型(xing)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)(chang)繁殖(zhi)或產(chan)生(sheng)(sheng)(sheng)代(dai)(dai)謝(xie)(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)。各類微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)(chang)繁殖(zhi)或產(chan)生(sheng)(sheng)(sheng)代(dai)(dai)謝(xie)(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)最適pH條件各不相同(tong)，一般來講，細(xi)菌(jun)與放線(xian)菌(jun)適于在pH7-7.5范圍內生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)(chang)，酵(jiao)母菌(jun)和霉菌(jun)通常(chang)在pH4.5-6范圍內生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)(chang)。值得注意(yi)的(de)(de)是，在微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)(chang)繁殖(zhi)和代(dai)(dai)謝(xie)(xie)(xie)過程中(zhong)(zhong)，由于營養(yang)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)質(zhi)被分解利(li)用和代(dai)(dai)謝(xie)(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)的(de)(de)形成(cheng)與積累(lei)，會導(dao)致(zhi)(zhi)培養(yang)基(ji)(ji)pH發生(sheng)(sheng)(sheng)變化，若不對培養(yang)基(ji)(ji)pH條件進行控制(zhi)，往(wang)往(wang)導(dao)致(zhi)(zhi)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)生(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)(chang)速度下降(jiang)或（和）代(dai)(dai)謝(xie)(xie)(xie)產(chan)物(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)產(chan)量下降(jiang)。因此，為了維持(chi)培養(yang)基(ji)(ji)pH的(de)(de)相對恒定(ding)，通常(chang)在培養(yang)基(ji)(ji)中(zhong)(zhong)加入pH緩沖劑(ji)。

4、控制氧化還原電位

不同類型微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)對(dui)(dui)氧(yang)化還原電(dian)位（F）的(de)(de)要求不一(yi)樣，一(yi)般(ban)好氧(yang)性(xing)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物在(zai)(zai)F值(zhi)(zhi)(zhi)為+0.1V以上時(shi)可正常生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)，一(yi)般(ban)以+0.3—+0.4V為宜，厭氧(yang)性(xing)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物只能在(zai)(zai)F值(zhi)(zhi)(zhi)低于+0.1V條(tiao)件下(xia)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)長(chang)(chang)，兼性(xing)厭氧(yang)微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物在(zai)(zai)F值(zhi)(zhi)(zhi)為+0.1V以上時(shi)進行好氧(yang)呼吸，在(zai)(zai)+0.1V以下(xia)時(shi)進行發酵。F值(zhi)(zhi)(zhi)與氧(yang)分壓和pH有關，也受某些微(wei)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物代謝(xie)產物的(de)(de)影響。在(zai)(zai)pH相對(dui)(dui)穩定的(de)(de)條(tiao)件下(xia)，可通過增加(jia)通氣量（如振蕩(dang)培(pei)養(yang)、攪(jiao)拌）提高培(pei)養(yang)基的(de)(de)氧(yang)分壓，或加(jia)入(ru)氧(yang)化劑，從而增加(jia)F值(zhi)(zhi)(zhi)；在(zai)(zai)培(pei)養(yang)基中加(jia)入(ru)抗壞(huai)血酸(suan)、硫化氫、半胱氨酸(suan)、谷胱甘肽、二硫蘇糖(tang)醇等還原性(xing)物質可降低F值(zhi)(zhi)(zhi)。

5、原料來源的選擇

在配制(zhi)培養基(ji)時，應盡(jin)量(liang)利(li)用(yong)(yong)(yong)廉價且易于(yu)獲得(de)的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)料(liao)作為培養基(ji)成(cheng)分，特(te)別是在發酵工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)中，培養基(ji)用(yong)(yong)(yong)量(liang)很(hen)大，利(li)用(yong)(yong)(yong)低成(cheng)本的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)料(liao)更體現出其(qi)經濟價值。例如，在微生(sheng)物(wu)單細胞蛋白的(de)(de)(de)(de)工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)生(sheng)產過(guo)程(cheng)中，常(chang)常(chang)利(li)用(yong)(yong)(yong)糖(tang)蜜（制(zhi)糖(tang)工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)中含(han)(han)有(you)蔗糖(tang)的(de)(de)(de)(de)廢(fei)(fei)(fei)液(ye)）、乳(ru)清（乳(ru)制(zhi)品(pin)工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)中含(han)(han)有(you)乳(ru)糖(tang)的(de)(de)(de)(de)廢(fei)(fei)(fei)液(ye)）、豆(dou)制(zhi)品(pin)工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)廢(fei)(fei)(fei)液(ye)及(ji)黑廢(fei)(fei)(fei)液(ye)（造(zao)紙(zhi)工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)中含(han)(han)有(you)戊糖(tang)和己(ji)糖(tang)的(de)(de)(de)(de)亞硫(liu)酸(suan)紙(zhi)漿）等都可作為培養基(ji)的(de)(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)(yuan)料(liao)。再如，工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)上(shang)的(de)(de)(de)(de)甲(jia)烷發酵主要利(li)用(yong)(yong)(yong)廢(fei)(fei)(fei)水、廢(fei)(fei)(fei)渣作原(yuan)(yuan)(yuan)料(liao)，而在我國農(nong)村，已(yi)推廣(guang)利(li)用(yong)(yong)(yong)人畜(chu)糞(fen)便及(ji)禾草(cao)為原(yuan)(yuan)(yuan)料(liao)發酵生(sheng)產甲(jia)烷作為燃料(liao)。另外，大量(liang)的(de)(de)(de)(de)農(nong)副產品(pin)或制(zhi)品(pin)，如鼓皮、米糠(kang)、玉米漿、酵母(mu)浸膏、酒糟、豆(dou)餅、花生(sheng)餅、蛋白胨(dong)等都是常(chang)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)發酵工(gong)(gong)(gong)業(ye)(ye)原(yuan)(yuan)(yuan)料(liao)。

6、滅菌處理

要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進行嚴格的滅菌。對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養基用1.05kg/cm²，121.3℃條件下維持15-30min可(ke)(ke)達到滅(mie)菌(jun)目的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。在高(gao)壓(ya)蒸汽滅(mie)菌(jun)過程中(zhong)(zhong)，長時間高(gao)溫(wen)會使某(mou)些不耐(nai)熱物(wu)質(zhi)遭到破壞，如使糖(tang)類(lei)物(wu)質(zhi)形成(cheng)(cheng)氨基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)糖(tang)、焦糖(tang)，因此含糖(tang)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)常(chang)在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘(zhong)進(jin)(jin)行滅(mie)菌(jun)，某(mou)些對糖(tang)類(lei)要求較高(gao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)，可(ke)(ke)先將糖(tang)進(jin)(jin)行過濾除菌(jun)或間歇滅(mie)菌(jun)，再與(yu)其他已滅(mie)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)成(cheng)(cheng)分混(hun)合(he)；長時間高(gao)溫(wen)還會引起磷(lin)酸(suan)(suan)鹽(yan)、碳(tan)酸(suan)(suan)鹽(yan)與(yu)某(mou)些陽離(li)子(zi)（特別是鈣、鎂、鐵離(li)子(zi)）結合(he)形成(cheng)(cheng)難溶(rong)性復合(he)物(wu)而產(chan)生(sheng)沉(chen)(chen)淀，因此，在配(pei)制(zhi)用于(yu)觀察和定(ding)量測定(ding)微(wei)生(sheng)物(wu)生(sheng)長狀況的(de)(de)(de)(de)(de)(de)合(he)成(cheng)(cheng)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)時，常(chang)需(xu)在培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)中(zhong)(zhong)加入少量螯(ao)合(he)劑，避免(mian)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)中(zhong)(zhong)產(chan)生(sheng)沉(chen)(chen)淀，常(chang)用的(de)(de)(de)(de)(de)(de)螯(ao)合(he)劑為乙二胺四乙酸(suan)(suan)（EDTA）。還可(ke)(ke)以將含鈣、鎂、鐵等(deng)離(li)子(zi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)成(cheng)(cheng)分與(yu)磷(lin)酸(suan)(suan)鹽(yan)、碳(tan)酸(suan)(suan)鹽(yan)分別進(jin)(jin)行滅(mie)菌(jun)，然(ran)后再混(hun)合(he)，避免(mian)形成(cheng)(cheng)沉(chen)(chen)淀；高(gao)壓(ya)蒸汽滅(mie)菌(jun)后，培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)pH會發(fa)生(sheng)改變（一般使pH降(jiang)低），可(ke)(ke)根據(ju)所培(pei)(pei)養(yang)(yang)微(wei)生(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)要求，在培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)前后加以調整。

在(zai)配制培(pei)養基過程中，泡(pao)(pao)沫(mo)(mo)的存在(zai)對(dui)滅菌(jun)處(chu)理極不利，因為(wei)泡(pao)(pao)沫(mo)(mo)中的空氣形(xing)成隔熱層(ceng)，使泡(pao)(pao)沫(mo)(mo)中微生(sheng)物難以(yi)被(bei)殺死。因而有時需要在(zai)培(pei)養基中加入消泡(pao)(pao)沫(mo)(mo)劑以(yi)減(jian)少泡(pao)(pao)沫(mo)(mo)的產生(sheng)，或適當提高(gao)滅菌(jun)溫度。