一、培養基的制備常見問題及原因分析

培(pei)養基(ji)(ji)的(de)配制是微生物實驗(yan)人員的(de)基(ji)(ji)本技(ji)能(neng)之(zhi)一，適宜的(de)培(pei)養基(ji)(ji)制備(bei)方法、選擇正確的(de)滅菌方式、貯藏條件(jian)和質量(liang)控(kong)制試驗(yan)是提供(gong)優質培(pei)養基(ji)(ji)的(de)保證，在(zai)制備(bei)培(pei)養基(ji)(ji)的(de)過程中，可能(neng)會遇(yu)到以下幾(ji)種問題：

1、培養基不能凝固

（1）制備過程中過度(du)加熱。

（2）低pH造成培養(yang)基酸解。

（3）稱(cheng)量(liang)不正確瓊脂未(wei)完全溶解。

（4）培養基(ji)成分未充分混勻。

2、pH不正確

（1）制備(bei)過程中過度(du)加熱(re)。

（2）水質不佳。

（3）外部化(hua)學物質(zhi)污(wu)染(ran)。

（4）測(ce)定是溫(wen)度不正(zheng)確。

（5）pH計為正確校準。

（6）脫水培(pei)養基質量差。

3、顏色異常

（1）制備過程過度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫水培養基質量(liang)差。

4、產生沉淀

（1）制備過(guo)程過(guo)度(du)加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）原料中的雜質。

（5）脫水培養基質量(liang)差(cha)。

5、培養基出現抑制/低生長率

（1）制備過程過度加(jia)熱。

（2）水質不佳。

（3）脫(tuo)水培養(yang)基質量差。

（4）使用(yong)成分不正確，添加劑用(yong)量不正確。

（5）容器或水(shui)中的有(you)毒殘留物。

6、選擇性差

（1）制備過(guo)程過(guo)度加熱(re)。

（2）脫水培(pei)養基質量差。

（3）配方使用(yong)不對。

（4）添加成(cheng)分(fen)不正(zheng)確(que)，例如添加成(cheng)分(fen)是(shi)培養基過熱、添加濃度錯(cuo)誤等。

7、污染

（1）無菌操作(zuo)存(cun)在(zai)問題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當滅菌

二、制備培養基如何減少失敗率

制(zhi)備(bei)培養基的時(shi)候，因(yin)為操作不當可能會出現各(ge)種問題(ti)，導致制(zhi)備(bei)失敗，為了減少失敗率，制(zhi)備(bei)培養基時(shi)要注意：

1、選擇合適的培養基配方

同(tong)一種(zhong)培養(yang)基的配方在不同(tong)著(zhu)作(zuo)中常(chang)會有某些(xie)差(cha)別。因此(ci)，除所用(yong)(yong)的是標(biao)準方法(fa)，應嚴格(ge)按(an)其(qi)規定進行配制(zhi)外，一般均應盡(jin)量收集有關資(zi)料，加(jia)以比較核對，再依據自己的使用(yong)(yong)目(mu)的加(jia)以選(xuan)用(yong)(yong)，記錄(lu)其(qi)來(lai)源。

2、培養基成分的稱取要精確

培養基的各種成分必須(xu)精確稱(cheng)取并(bing)要注意(yi)防止錯亂(luan)，最好一次完(wan)成，不(bu)要中斷。可將(jiang)配方置于傍(bang)側，每稱(cheng)完(wan)一種成分即在配方上(shang)做出記號(hao)，并(bing)將(jiang)所需稱(cheng)取的藥品一次取齊(qi)，置于左側，每種稱(cheng)取完(wan)畢(bi)后(hou)(hou)，即移(yi)放于右側。完(wan)全稱(cheng)取完(wan)畢(bi)后(hou)(hou)，還應進行一次檢查(cha)。

3、培養基各成分的混合和溶化要注意

培養基所(suo)用(yong)(yong)(yong)化(hua)(hua)(hua)學藥品均應是化(hua)(hua)(hua)學純的。使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)的蒸(zheng)(zheng)煮鍋(guo)(guo)不(bu)得為銅鍋(guo)(guo)或(huo)(huo)鐵(tie)鍋(guo)(guo)，以(yi)防有(you)微量銅或(huo)(huo)鐵(tie)混入培養基中(zhong)，使(shi)(shi)細菌(jun)不(bu)易生長。最(zui)好使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)不(bu)銹鋼鍋(guo)(guo)加熱溶化(hua)(hua)(hua)，也(ye)可(ke)放(fang)入大燒(shao)杯或(huo)(huo)大燒(shao)瓶(ping)中(zhong)置高壓蒸(zheng)(zheng)汽滅菌(jun)器(qi)或(huo)(huo)流動蒸(zheng)(zheng)汽消毒器(qi)中(zhong)蒸(zheng)(zheng)煮溶化(hua)(hua)(hua)。在鍋(guo)(guo)中(zhong)溶化(hua)(hua)(hua)時、可(ke)先用(yong)(yong)(yong)溫水(shui)加熱并(bing)隨時擾動，以(yi)防焦化(hua)(hua)(hua)、如發現有(you)焦化(hua)(hua)(hua)現象、該培養基即不(bu)能使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)，應重(zhong)新制備(bei)。待大部分(fen)固(gu)體成分(fen)溶化(hua)(hua)(hua)后，再用(yong)(yong)(yong)較小火(huo)力(li)使(shi)(shi)所(suo)有(you)成分(fen)完全溶化(hua)(hua)(hua)。

4、調整好pH

培(pei)養基各(ge)成分完全溶解后(hou)，應(ying)進行(xing)pH的(de)初步(bu)調正(zheng)，因培(pei)養基在(zai)加熱(re)消毒過程中、pH會有所變化，例如(ru)，牛肉浸液約可降低pH0.2。而腸浸液pH卻會有顯著的(de)升高。因此，對這個步(bu)驟，操作者(zhe)應(ying)隨時注意探(tan)索經(jing)驗、以(yi)(yi)期(qi)能掌握(wo)培(pei)養基的(de)最終pH，保證培(pei)養基的(de)質量。pH調正(zheng)后(hou)，還應(ying)將(jiang)培(pei)養基煮沸數分鐘，以(yi)(yi)利培(pei)養基沉淀物的(de)析出。