一、培養基的制備常見問題及原因分析

培(pei)(pei)養(yang)基的(de)配制(zhi)是微生物實驗人(ren)員(yuan)的(de)基本技能(neng)之一(yi)，適(shi)宜的(de)培(pei)(pei)養(yang)基制(zhi)備方法、選擇(ze)正確的(de)滅菌方式、貯藏(zang)條件(jian)和(he)質(zhi)量控制(zhi)試驗是提供優質(zhi)培(pei)(pei)養(yang)基的(de)保證，在制(zhi)備培(pei)(pei)養(yang)基的(de)過程(cheng)中，可能(neng)會遇到以下幾種問題：

1、培養基不能凝固

（1）制(zhi)備過程中過度加熱。

（2）低pH造成(cheng)培(pei)養基酸解(jie)。

（3）稱(cheng)量不正確(que)瓊脂未完全(quan)溶解(jie)。

（4）培養基成分未(wei)充分混勻。

2、pH不正確

（1）制備過程中過度加(jia)熱。

（2）水質不佳。

（3）外部化學(xue)物(wu)質污染。

（4）測定是溫(wen)度不正確。

（5）pH計為正確校準。

（6）脫水培養基質量差(cha)。

3、顏色異常

（1）制備(bei)過程(cheng)過度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）外來污染。

（5）脫水培(pei)養基(ji)質量(liang)差。

4、產生沉淀

（1）制備過(guo)程(cheng)過(guo)度加熱。

（2）水質不佳。

（3）pH不正確。

（4）原料中(zhong)的雜質。

（5）脫水培養基質(zhi)量差。

5、培養基出現抑制/低生長率

（1）制備(bei)過(guo)程過(guo)度加(jia)熱。

（2）水質不佳。

（3）脫水培養基質量差。

（4）使用成分不正確(que)，添加劑(ji)用量不正確(que)。

（5）容器或(huo)水(shui)中的(de)有(you)毒殘(can)留物。

6、選擇性差

（1）制備(bei)過(guo)程過(guo)度加熱(re)。

（2）脫水培養基(ji)質量差。

（3）配方使(shi)用不對。

（4）添加(jia)成(cheng)分不正確，例(li)如添加(jia)成(cheng)分是(shi)培養基過(guo)熱、添加(jia)濃度錯誤(wu)等。

7、污染

（1）無菌操作存(cun)在問題。

（2）添加劑污染。

（3）不適當滅菌

二、制備培養基如何減少失敗率

制(zhi)(zhi)備培養(yang)基的時候，因(yin)為操作不當可能會出現各(ge)種問題，導致制(zhi)(zhi)備失敗(bai)，為了減少失敗(bai)率，制(zhi)(zhi)備培養(yang)基時要注意：

1、選擇合適的培養基配方

同一種培養基的(de)配方在不(bu)同著(zhu)作中常會有某些(xie)差別。因此，除(chu)所用(yong)的(de)是(shi)標準方法，應嚴格按其規(gui)定進(jin)行配制外(wai)，一般(ban)均應盡量收集有關資(zi)料，加(jia)以(yi)比較核對，再依據自(zi)己的(de)使用(yong)目的(de)加(jia)以(yi)選用(yong)，記錄其來源(yuan)。

2、培養基成分的稱取要精確

培養(yang)基的(de)各種成(cheng)分(fen)必(bi)須精(jing)確(que)稱取(qu)并要注意防止錯亂，最好一次(ci)完(wan)(wan)成(cheng)，不要中(zhong)斷。可將配(pei)方置于(yu)傍側，每(mei)(mei)稱完(wan)(wan)一種成(cheng)分(fen)即在配(pei)方上做出記號，并將所(suo)需稱取(qu)的(de)藥(yao)品一次(ci)取(qu)齊，置于(yu)左側，每(mei)(mei)種稱取(qu)完(wan)(wan)畢(bi)后，即移放于(yu)右側。完(wan)(wan)全(quan)稱取(qu)完(wan)(wan)畢(bi)后，還(huan)應進行一次(ci)檢查(cha)。

3、培養基各成分的混合和溶化要注意

培(pei)養(yang)基所用(yong)化(hua)(hua)(hua)學藥品均應(ying)是化(hua)(hua)(hua)學純的。使(shi)用(yong)的蒸(zheng)煮鍋(guo)不得為(wei)銅鍋(guo)或(huo)(huo)(huo)鐵鍋(guo)，以(yi)防有微量銅或(huo)(huo)(huo)鐵混入(ru)培(pei)養(yang)基中(zhong)，使(shi)細菌不易生長。最好使(shi)用(yong)不銹鋼(gang)鍋(guo)加熱溶化(hua)(hua)(hua)，也可(ke)放入(ru)大(da)燒杯或(huo)(huo)(huo)大(da)燒瓶中(zhong)置高壓蒸(zheng)汽滅菌器(qi)或(huo)(huo)(huo)流動蒸(zheng)汽消毒器(qi)中(zhong)蒸(zheng)煮溶化(hua)(hua)(hua)。在鍋(guo)中(zhong)溶化(hua)(hua)(hua)時(shi)、可(ke)先用(yong)溫水加熱并隨時(shi)擾動，以(yi)防焦化(hua)(hua)(hua)、如發現有焦化(hua)(hua)(hua)現象、該培(pei)養(yang)基即不能使(shi)用(yong)，應(ying)重(zhong)新(xin)制備(bei)。待大(da)部分固(gu)體(ti)成分溶化(hua)(hua)(hua)后(hou)，再用(yong)較小(xiao)火力使(shi)所有成分完全溶化(hua)(hua)(hua)。

4、調整好pH

培(pei)養(yang)基(ji)各(ge)成分完全(quan)溶(rong)解后(hou)(hou)，應(ying)進行pH的(de)初步調正，因培(pei)養(yang)基(ji)在加(jia)熱(re)消毒過程中、pH會有所變化，例如，牛肉浸(jin)液約可降低pH0.2。而(er)腸浸(jin)液pH卻(que)會有顯著的(de)升高。因此，對這個步驟(zou)，操作者應(ying)隨時注意(yi)探索(suo)經驗、以期能掌握(wo)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)最終pH，保證(zheng)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)質量(liang)。pH調正后(hou)(hou)，還應(ying)將培(pei)養(yang)基(ji)煮(zhu)沸數分鐘，以利培(pei)養(yang)基(ji)沉淀(dian)物(wu)的(de)析出。