一、培養基滅菌的方法有哪些

培養基配制好后，必須立即滅菌，因為如果長時間不進行滅菌，培養料內的微生物就會在料內發酵生長，從而破壞培養基內的營養成分。一般來說，培養基的滅菌方法(fa)主要有(you)以下六種：

1、干熱滅菌

多用于耐熱器皿滅(mie)菌(jun)，例如(ru)移液管和玻璃平皿等(deng)、玻璃試(shi)管或者(zhe)金屬(shu)器皿等(deng)等(deng)，可(ke)在170攝氏度(du)滅(mie)菌(jun)2-4h，也(ye)可(ke)在200所說的滅(mie)菌(jun)0.5-1h。接種(zhong)環(huan)，接種(zhong)針等(deng)、涂布(bu)棒(bang)之類的實驗器材，可(ke)用酒精燈直接灼燒滅(mie)菌(jun)。

滅菌(jun)(jun)效(xiao)果(guo)：滅菌(jun)(jun)效(xiao)果(guo)好，能(neng)殺死一切微生物(wu)，芽孢(bao)也不例外。

注意事項：干(gan)熱(re)滅(mie)菌(jun)過程(cheng)的熱(re)穿(chuan)透效(xiao)果差且比(bi)較慢，因此在烘箱(xiang)內進行(xing)干(gan)熱(re)滅(mie)菌(jun)時，不可擺放過滿；塑料(liao)、橡膠等不耐熱(re)材(cai)質(zhi)不可采用此方法滅(mie)菌(jun)；紙(zhi)、棉的滅(mie)菌(jun)溫度不能超過170℃。

2、高壓蒸氣滅菌（濕熱滅菌）

通常用(yong)于實驗室大部(bu)分培(pei)養基的滅菌，亦(yi)可用(yong)在玻璃器皿上、金(jin)屬(shu)器皿滅菌。通常采用(yong)121°C高壓滅菌15-20min或116°C高壓滅菌30min，滅菌參數可以(yi)依據培(pei)養基的不(bu)同(tong)而調節。

滅菌(jun)效果：它(ta)能殺死一切微生(sheng)物，芽孢也不例外。

注意(yi)事項：滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)時(shi)冷空(kong)(kong)氣沒(mei)有排出、培養(yang)基本身含有過多的芽孢(bao)、滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)方式不當、滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)鍋中的物品(pin)放置過滿，均會造(zao)成滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)的失(shi)敗；在進行容器滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)時(shi)，容器不可密封，需與滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)鍋內空(kong)(kong)氣流通。

3、水浴-加熱-流動蒸汽滅菌

常用(yong)于含有不耐熱成分培養(yang)(yang)基的滅菌，如XLD瓊脂等(deng)(deng)、亞(ya)硒(xi)酸鹽(yan)胱氨酸增菌液(ye)等(deng)(deng)、亞(ya)硫酸鉍瓊脂等(deng)(deng)等(deng)(deng)。用(yong)流動蒸(zheng)汽對(dui)培養(yang)(yang)基進行滅菌，若無(wu)對(dui)應流動蒸(zheng)汽滅菌設備(bei)，既可用(yong)水(shui)浴(yu)加熱，也可用(yong)“蒸(zheng)”法殺菌。

滅菌效果：能殺死(si)微生物(wu)的繁(fan)殖體，無法殺死(si)芽(ya)孢體，用這種(zhong)方法殺菌的培養基(ji)，一(yi)般抑菌性(xing)較強，或者需要很短的時間。

注(zhu)意事項：不同培(pei)(pei)養基成分(fen)(fen)耐熱(re)(re)(re)性(xing)有差別，加(jia)熱(re)(re)(re)時應注(zhu)意，如將含(han)有亞(ya)硒酸鹽(yan)的(de)培(pei)(pei)養基（SC、SBG等）加(jia)熱(re)(re)(re)到90°C左右，過高(gao)的(de)加(jia)熱(re)(re)(re)可(ke)導致亞(ya)硒酸氫鈉的(de)分(fen)(fen)解，培(pei)(pei)養基變紅(hong)色，含(han)有瓊脂的(de)培(pei)(pei)養基可(ke)以加(jia)熱(re)(re)(re)沸騰(teng)4-6次，也可(ke)以沸水浴(yu)后(hou)20-30min讓瓊脂充分(fen)(fen)溶解。

4、過濾滅菌

多用于(yu)抗(kang)生素或含有不耐熱成(cheng)分的培養基滅菌，通常采(cai)用孔徑為(wei)0.22μm微孔濾膜或者濾芯過(guo)(guo)濾除菌。實(shi)驗室生產(chan)無(wu)菌空氣時亦可使用此法，采(cai)用特殊濾芯或者濾網，過(guo)(guo)濾和(he)除菌空氣。

滅菌(jun)效果：能去(qu)除常見的細菌(jun)，真菌(jun)和芽孢體(ti)，卻無(wu)法(fa)去(qu)除支原體(ti)，病毒(du)和其他體(ti)積微(wei)小的生物。

注意事項：使用前通(tong)常需按(an)照(zhao)說明書(shu)使濾(lv)膜或濾(lv)芯浸濕；需要嚴(yan)格遵(zun)守(shou)過(guo)濾(lv)器或者濾(lv)膜的(de)指示，速度過(guo)快或者過(guo)濾(lv)體(ti)積過(guo)大都會造成濾(lv)膜的(de)斷裂和除(chu)菌(jun)的(de)失敗；黏度較大或有沉淀(dian)的(de)培養基不適合用此(ci)方式除(chu)菌(jun)。

5、輻照滅菌

微(wei)波、紫外線(xian)(xian)、X射線(xian)(xian)、γ射線(xian)(xian)都可以進(jin)行滅菌(jun)。γ射線(xian)(xian)具(ju)有(you)很強的(de)穿透(tou)力，滅菌(jun)效果良(liang)好，在(zai)食(shi)品中得到了(le)廣泛的(de)應用(yong)(yong)(yong)、藥(yao)品行業的(de)產品滅菌(jun)，亦多用(yong)(yong)(yong)于(yu)微(wei)生物(wu)培養(yang)基中、實驗(yan)器材的(de)滅菌(jun)。某(mou)些特殊(shu)培養(yang)基或者添加劑成分，由于(yu)不宜采用(yong)(yong)(yong)高溫蒸汽滅菌(jun)、過濾除菌(jun)等等，可用(yong)(yong)(yong)γ射線(xian)(xian)照射滅菌(jun)。紫外線(xian)(xian)殺菌(jun)作用(yong)(yong)(yong)弱，很少有(you)穿透(tou)力，一般只適用(yong)(yong)(yong)于(yu)實驗(yan)室內空氣或者物(wu)體表面的(de)殺菌(jun)。

滅(mie)菌效果：γ射線具有良好的滅(mie)菌和穿透(tou)力，能殺(sha)滅(mie)一切微生(sheng)物，芽(ya)孢體也不例外。

注意事項：并非所有培(pei)養基都(dou)可(ke)(ke)以(yi)(yi)采用(yong)γ射(she)線(xian)輻(fu)照(zhao)滅菌方式，一(yi)些染料或(huo)不穩(wen)定(ding)成分經(jing)輻(fu)照(zhao)后(hou)會發生變化(hua)；γ射(she)線(xian)對(dui)瓊(qiong)脂(zhi)有一(yi)定(ding)的損傷(shang)，所以(yi)(yi)在固體培(pei)養基滅菌的過程中，輻(fu)照(zhao)劑量(liang)及(ji)瓊(qiong)脂(zhi)的加入量(liang)均(jun)需適當調整(zheng)；玻璃制品、金(jin)屬制品一(yi)般不可(ke)(ke)采用(yong)此方法滅菌。

6、化學試劑滅菌

通常用(yong)環(huan)氧(yang)(yang)乙烷殺菌(jun)，及各種消毒劑的浸泡滅(mie)(mie)菌(jun)。環(huan)氧(yang)(yang)乙烷在平皿中(zhong)曾經得(de)到廣泛應用(yong)、對一次性(xing)醫療產品(pin)進行(xing)滅(mie)(mie)菌(jun)，卻因環(huan)境污染大，滅(mie)(mie)過菌(jun)后(hou)的制品(pin)需要較長時(shi)間放置，讓環(huan)氧(yang)(yang)乙烷散去(qu)，目前(qian)已逐(zhu)漸為其他(ta)滅(mie)(mie)菌(jun)方式(shi)所代替。

滅菌效(xiao)果：不(bu)同消毒劑(ji)的殺滅效(xiao)果是有區(qu)別(bie)的，粗(cu)略地可以分為低(di)效(xiao)消毒劑(ji)、中，高效(xiao)消毒劑(ji)。環氧乙烷是一種高效(xiao)消毒劑(ji)，能殺死含(han)有芽孢等一切微生物。

注意事項(xiang)：此類滅菌(jun)方式通常(chang)會有(you)殘留，且對環境有(you)污染(ran)，因此一(yi)般不適合用于直接(jie)進(jin)行微生物(wu)培養相關器(qi)皿滅菌(jun)；殺菌(jun)能力越強的(de)消毒劑，刺(ci)激性(xing)、腐蝕(shi)性(xing)、毒性(xing)往往越大，使用時需注意防(fang)護。

二、培養基滅菌用哪種方法好

培(pei)養基(ji)的(de)滅菌方(fang)法眾多，采(cai)用不適當的(de)滅菌方(fang)法可(ke)能會破(po)壞培(pei)養基(ji)的(de)質量，會改變顏色、透明度降低(di)、pH變化等，那么哪種方(fang)法比(bi)較(jiao)好呢？

由于不(bu)同微生物培養需要的培養基不(bu)同，滅菌(jun)方(fang)法的選(xuan)擇方(fang)面也有所(suo)不(bu)同，一般(ban)來說，培養基的滅菌(jun)方(fang)法應按照說明書或驗證試驗參(can)數(shu)來采(cai)用不(bu)同方(fang)法，常規的是采(cai)用濕熱滅菌(jun)，特殊要求的采(cai)用薄膜過(guo)濾等。