一、培養基滅菌的方法有哪些

培養基配制好后，必須立即滅菌，因為如果長時間不進行滅菌，培養料內的微生物就會在料內發酵生長，從而破壞培養基內的營養成分。一般來說，培養基的滅菌方法主(zhu)要有(you)以下六種：

1、干熱滅菌

多用(yong)于耐熱器(qi)(qi)皿滅(mie)菌(jun)，例如移(yi)液管和(he)玻璃平皿等、玻璃試管或(huo)者金(jin)屬器(qi)(qi)皿等等，可(ke)在170攝氏度滅(mie)菌(jun)2-4h，也可(ke)在200所說的滅(mie)菌(jun)0.5-1h。接(jie)種(zhong)(zhong)環(huan)，接(jie)種(zhong)(zhong)針等、涂布棒之類的實驗(yan)器(qi)(qi)材，可(ke)用(yong)酒(jiu)精燈(deng)直接(jie)灼燒滅(mie)菌(jun)。

滅菌效(xiao)果(guo)：滅菌效(xiao)果(guo)好，能殺(sha)死一切微生物，芽孢也不例外(wai)。

注意事項：干(gan)熱(re)(re)滅(mie)菌過(guo)程的熱(re)(re)穿(chuan)透效果差且比較慢，因(yin)此(ci)在烘(hong)箱內(nei)進行干(gan)熱(re)(re)滅(mie)菌時，不可擺放(fang)過(guo)滿；塑料、橡膠(jiao)等(deng)不耐熱(re)(re)材質(zhi)不可采用此(ci)方法(fa)滅(mie)菌；紙、棉的滅(mie)菌溫度不能超(chao)過(guo)170℃。

2、高壓蒸氣滅菌（濕熱滅菌）

通常用(yong)于(yu)實驗室大(da)部分(fen)培養(yang)基的(de)滅菌(jun)(jun)(jun)，亦可(ke)用(yong)在玻璃器皿上、金屬器皿滅菌(jun)(jun)(jun)。通常采用(yong)121°C高壓滅菌(jun)(jun)(jun)15-20min或116°C高壓滅菌(jun)(jun)(jun)30min，滅菌(jun)(jun)(jun)參數可(ke)以(yi)依據培養(yang)基的(de)不同而調節。

滅(mie)菌效果：它能殺死(si)一切微生物，芽孢也不例外。

注意事項(xiang)：滅菌(jun)時冷(leng)空氣沒有排(pai)出、培養基(ji)本(ben)身含有過(guo)(guo)多的(de)芽孢、滅菌(jun)方式不(bu)當、滅菌(jun)鍋(guo)中的(de)物品放置(zhi)過(guo)(guo)滿(man)，均會造成滅菌(jun)的(de)失敗；在進(jin)行容器(qi)滅菌(jun)時，容器(qi)不(bu)可密封(feng)，需與(yu)滅菌(jun)鍋(guo)內空氣流通。

3、水浴-加熱-流動蒸汽滅菌

常用(yong)(yong)于(yu)含有(you)不耐(nai)熱成(cheng)分培(pei)養基的滅(mie)(mie)菌，如XLD瓊脂(zhi)等、亞(ya)硒酸鹽胱氨酸增菌液等、亞(ya)硫酸鉍瓊脂(zhi)等等。用(yong)(yong)流動蒸汽對培(pei)養基進行滅(mie)(mie)菌，若無對應流動蒸汽滅(mie)(mie)菌設備，既可用(yong)(yong)水浴加熱，也可用(yong)(yong)“蒸”法(fa)殺菌。

滅菌(jun)效果：能(neng)殺(sha)死微生物(wu)的繁(fan)殖(zhi)體(ti)，無(wu)法殺(sha)死芽孢體(ti)，用這種方法殺(sha)菌(jun)的培養基，一(yi)般抑菌(jun)性(xing)較強，或者需(xu)要(yao)很(hen)短的時間。

注意事項：不同培(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)成分耐熱(re)性有(you)差別，加熱(re)時應注意，如(ru)將含(han)有(you)亞硒酸(suan)鹽的(de)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)（SC、SBG等）加熱(re)到90°C左右，過高的(de)加熱(re)可導致亞硒酸(suan)氫鈉的(de)分解(jie)，培(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)變紅(hong)色，含(han)有(you)瓊(qiong)脂(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)(ji)可以(yi)加熱(re)沸騰4-6次(ci)，也可以(yi)沸水浴后20-30min讓瓊(qiong)脂(zhi)充分溶解(jie)。

4、過濾滅菌

多用(yong)(yong)于抗生素或含(han)有不(bu)耐熱成分(fen)的培養(yang)基滅(mie)菌(jun)，通常采(cai)(cai)用(yong)(yong)孔(kong)徑為0.22μm微(wei)孔(kong)濾(lv)(lv)(lv)膜或者濾(lv)(lv)(lv)芯過(guo)濾(lv)(lv)(lv)除(chu)菌(jun)。實(shi)驗室生產無菌(jun)空氣時亦可(ke)使用(yong)(yong)此法，采(cai)(cai)用(yong)(yong)特殊(shu)濾(lv)(lv)(lv)芯或者濾(lv)(lv)(lv)網，過(guo)濾(lv)(lv)(lv)和除(chu)菌(jun)空氣。

滅菌(jun)效果(guo)：能去除常見(jian)的(de)細(xi)菌(jun)，真菌(jun)和芽孢體，卻(que)無法(fa)去除支原體，病毒(du)和其他體積微(wei)小的(de)生(sheng)物。

注意事(shi)項：使(shi)(shi)用(yong)前通常需按照說明書使(shi)(shi)濾膜(mo)或濾芯浸(jin)濕；需要嚴(yan)格遵守過濾器(qi)或者濾膜(mo)的指示，速度(du)過快或者過濾體積(ji)過大(da)都會(hui)造成濾膜(mo)的斷(duan)裂(lie)和除菌的失敗；黏度(du)較(jiao)大(da)或有沉淀的培養(yang)基(ji)不適合用(yong)此方式除菌。

5、輻照滅菌

微波、紫外(wai)線(xian)、X射(she)(she)線(xian)、γ射(she)(she)線(xian)都(dou)可(ke)以進行滅(mie)菌(jun)(jun)。γ射(she)(she)線(xian)具有很(hen)(hen)強的(de)(de)穿透力，滅(mie)菌(jun)(jun)效果良好(hao)，在(zai)食品(pin)中(zhong)得到了廣泛的(de)(de)應用、藥品(pin)行業的(de)(de)產品(pin)滅(mie)菌(jun)(jun)，亦多用于微生物培養(yang)基中(zhong)、實驗器(qi)材的(de)(de)滅(mie)菌(jun)(jun)。某些特(te)殊培養(yang)基或者添加劑(ji)成(cheng)分，由于不宜(yi)采用高溫蒸汽滅(mie)菌(jun)(jun)、過濾除菌(jun)(jun)等等，可(ke)用γ射(she)(she)線(xian)照射(she)(she)滅(mie)菌(jun)(jun)。紫外(wai)線(xian)殺菌(jun)(jun)作(zuo)用弱，很(hen)(hen)少(shao)有穿透力，一般只適用于實驗室內空氣(qi)或者物體(ti)表面的(de)(de)殺菌(jun)(jun)。

滅(mie)菌效果：γ射(she)線具有良(liang)好的(de)滅(mie)菌和穿透力，能(neng)殺滅(mie)一切微(wei)生物(wu)，芽(ya)孢體也不例(li)外。

注意(yi)事項：并非所有(you)培(pei)養基(ji)都(dou)可以(yi)(yi)采用(yong)γ射線輻照(zhao)滅(mie)菌方式，一(yi)些染料(liao)或(huo)不穩定成分經(jing)輻照(zhao)后會發生變化(hua)；γ射線對瓊(qiong)(qiong)脂有(you)一(yi)定的(de)(de)損傷，所以(yi)(yi)在固體培(pei)養基(ji)滅(mie)菌的(de)(de)過程中(zhong)，輻照(zhao)劑(ji)量(liang)及瓊(qiong)(qiong)脂的(de)(de)加入量(liang)均需適當調整；玻璃制(zhi)品、金屬制(zhi)品一(yi)般不可采用(yong)此方法(fa)滅(mie)菌。

6、化學試劑滅菌

通(tong)常用環(huan)氧(yang)乙(yi)烷殺菌，及各種消毒劑的(de)浸泡(pao)滅菌。環(huan)氧(yang)乙(yi)烷在平皿中曾經得(de)到廣泛應用、對一次(ci)性醫療產品(pin)進行滅菌，卻因環(huan)境污染(ran)大，滅過(guo)菌后的(de)制品(pin)需(xu)要(yao)較長時間放(fang)置(zhi)，讓(rang)環(huan)氧(yang)乙(yi)烷散(san)去，目(mu)前已逐漸為(wei)其他滅菌方式(shi)所代替。

滅(mie)菌(jun)效(xiao)果(guo)：不同消(xiao)毒劑(ji)的殺滅(mie)效(xiao)果(guo)是有(you)區別的，粗(cu)略地(di)可以分為低效(xiao)消(xiao)毒劑(ji)、中，高(gao)效(xiao)消(xiao)毒劑(ji)。環氧乙烷是一(yi)種高(gao)效(xiao)消(xiao)毒劑(ji)，能殺死(si)含有(you)芽(ya)孢(bao)等一(yi)切微生物。

注意事(shi)項：此類滅菌(jun)方式通(tong)常會有殘(can)留，且對環(huan)境有污染，因此一(yi)般不適合用于直接進行微生物培(pei)養(yang)相關器皿(min)滅菌(jun)；殺菌(jun)能力越強的消(xiao)毒(du)劑，刺激性、腐蝕性、毒(du)性往往越大，使用時需注意防護(hu)。

二、培養基滅菌用哪種方法好

培養基(ji)(ji)的(de)滅(mie)菌方法(fa)眾(zhong)多(duo)，采用不適當的(de)滅(mie)菌方法(fa)可(ke)能會(hui)破壞培養基(ji)(ji)的(de)質量，會(hui)改變顏色(se)、透明度(du)降低(di)、pH變化等，那么(me)哪種方法(fa)比(bi)較好呢(ni)？

由(you)于不(bu)同(tong)微生(sheng)物培(pei)養需要的(de)培(pei)養基不(bu)同(tong)，滅(mie)菌方(fang)法的(de)選(xuan)擇方(fang)面也有所不(bu)同(tong)，一(yi)般來說，培(pei)養基的(de)滅(mie)菌方(fang)法應按(an)照說明書(shu)或驗證試(shi)驗參數來采用不(bu)同(tong)方(fang)法，常規的(de)是采用濕(shi)熱滅(mie)菌，特(te)殊要求(qiu)的(de)采用薄膜過濾等(deng)。