豬(zhu)(zhu)瘟(wen)病毒(du)存活時間 豬(zhu)(zhu)瘟(wen)疫苗
豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)俗稱“爛腸(chang)瘟(wen)(wen)(wen)”,是由黃病毒(du)科豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)屬的豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)引起的一(yi)種急性、發(fa)熱(re)、接觸(chu)性傳染傳染病。具(ju)有高(gao)度(du)傳染性和致死性。
1病情詳情
豬瘟俗(su)稱(cheng)"爛腸瘟"是一種具有高度傳(chuan)染(ran)性(xing)疫(yi)病,是威脅(xie)養豬業的主(zhu)要傳(chuan)染(ran)病之一,其特征是:急(ji)性(xing),呈敗(bai)血性(xing)變化,實質器官出(chu)血,壞死和梗(geng)死;慢(man)性(xing)呈纖維素性(xing)壞死性(xing)腸炎,后期常(chang)有副傷寒及巴氏桿菌病繼發。
豬(zhu)瘟是豬(zhu)的(de)(de)一種急性接觸(chu)性傳染病,又(you)稱豬(zhu)霍(huo)亂。1885年(nian)(nian)首先在(zai)美國發(fa)(fa)現,以后傳播到世界各大洲。中(zhong)國大部分省都有發(fa)(fa)生(sheng)(sheng)。1903年(nian)(nian)美國獸(shou)醫學家德希(xi)尼茲和(he)多賽特(te)鑒(jian)定本病的(de)(de)病原是披蓋病毒(du)科的(de)(de)瘟病毒(du)屬(Pestivirus)中(zhong)的(de)(de)豬(zhu)瘟病毒(du)。主要通過直接接觸(chu),或由(you)于接觸(chu)污(wu)染的(de)(de)媒(mei)介物(wu)而發(fa)(fa)病。消化(hua)道、鼻腔粘膜(mo)和(he)破裂的(de)(de)皮膚均是感(gan)染途徑(jing)。一年(nian)(nian)四季(ji)都可(ke)發(fa)(fa)生(sheng)(sheng),以春(chun)夏多雨季(ji)節為多。
人(ren)工接種的(de)(de)(de)豬(zhu),一(yi)般在36~48小時后(hou)體(ti)溫(wen)(wen)升(sheng)(sheng)高(gao)(gao)。而自然感染的(de)(de)(de)潛伏期常(chang)為3~6天(tian),間有(you)延(yan)長(chang)到24天(tian)的(de)(de)(de)。典型病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)例表現為最(zui)(zui)急(ji)(ji)性(xing)(xing)、亞(ya)(ya)急(ji)(ji)性(xing)(xing)或(huo)(huo)慢(man)性(xing)(xing)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)程,死(si)亡率(lv)高(gao)(gao)。最(zui)(zui)急(ji)(ji)性(xing)(xing)型較(jiao)(jiao)少見(jian),病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)豬(zhu)體(ti)溫(wen)(wen)升(sheng)(sheng)高(gao)(gao),常(chang)無(wu)其他癥(zheng)狀,1~2天(tian)內死(si)亡。急(ji)(ji)性(xing)(xing)型最(zui)(zui)常(chang)見(jian),體(ti)溫(wen)(wen)可(ke)上(shang)升(sheng)(sheng)到41℃以(yi)上(shang),食欲減退(tui)或(huo)(huo)消失(shi),可(ke)發生眼(yan)結膜(mo)(mo)炎(yan)(yan)并有(you)膿性(xing)(xing)分泌物,鼻腔(qiang)也常(chang)流出(chu)膿性(xing)(xing)粘(zhan)(zhan)液,間有(you)嘔吐,有(you)時排泄物中帶(dai)血(xue)(xue)(xue)(xue)液,甚至便血(xue)(xue)(xue)(xue)。初期耳根、腹部、股內側的(de)(de)(de)皮(pi)膚(fu)常(chang)有(you)許多點(dian)狀出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)或(huo)(huo)較(jiao)(jiao)大(da)紅點(dian)。病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)程一(yi)般為1~2周,最(zui)(zui)后(hou)絕大(da)多數死(si)亡。亞(ya)(ya)急(ji)(ji)性(xing)(xing)型常(chang)見(jian)于本病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)流行地區,病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)程可(ke)延(yan)至2~3周;有(you)的(de)(de)(de)轉為慢(man)性(xing)(xing),常(chang)拖延(yan)1~2個月。表現粘(zhan)(zhan)膜(mo)(mo)蒼白,眼(yan)瞼有(you)出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)點(dian)。皮(pi)膚(fu)出(chu)現紫斑,病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)豬(zhu)極(ji)度消瘦。死(si)亡以(yi)仔豬(zhu)為多,成年(nian)豬(zhu)有(you)的(de)(de)(de)可(ke)以(yi)耐過。非典型病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)豬(zhu)臨診(zhen)癥(zheng)狀不明顯,呈慢(man)性(xing)(xing),常(chang)見(jian)于“架子豬(zhu)”。剖檢時急(ji)(ji)性(xing)(xing)型以(yi)出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)變為主,常(chang)見(jian)腎皮(pi)質(zhi)和膀胱粘(zhan)(zhan)膜(mo)(mo)中有(you)小點(dian)出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue);腸系(xi)膜(mo)(mo)淋巴結腫脹,常(chang)出(chu)現出(chu)血(xue)(xue)(xue)(xue)性(xing)(xing)腸炎(yan)(yan),以(yi)大(da)腸粘(zhan)(zhan)膜(mo)(mo)中的(de)(de)(de)鈕扣狀潰(kui)瘍為典型。
根據(ju)流(liu)行病(bing)學、臨診(zhen)(zhen)癥狀和病(bing)理變化可作出初診(zhen)(zhen)。實驗室診(zhen)(zhen)斷手段(duan)多(duo)采(cai)(cai)用免(mian)(mian)疫(yi)螢(ying)(ying)光技術、酶聯(lian)免(mian)(mian)疫(yi)吸附(fu)測定(ding)法(fa)、血(xue)清(qing)中(zhong)和試(shi)驗、瓊脂凝(ning)膠沉淀(dian)試(shi)驗等,比較靈敏迅速(su),且特異性(xing)高(gao)。中(zhong)國現推廣應(ying)用免(mian)(mian)疫(yi)螢(ying)(ying)光技術和酶聯(lian)免(mian)(mian)疫(yi)吸附(fu)測定(ding)法(fa)。采(cai)(cai)用抗豬(zhu)瘟血(xue)清(qing)在病(bing)初可有(you)一定(ding)療(liao)效(xiao),此(ci)外尚無其他特效(xiao)藥物。中(zhong)國的豬(zhu)瘟兔化弱毒(du)(du)疫(yi)苗(miao)免(mian)(mian)疫(yi)期可達一年以上,已(yi)被公認為一種安全性(xing)良(liang)好、免(mian)(mian)疫(yi)原性(xing)優越(yue)、遺傳性(xing)穩定(ding)的弱毒(du)(du)疫(yi)苗(miao)。
本病與非(fei)(fei)洲(zhou)豬瘟不(bu)同。非(fei)(fei)洲(zhou)豬瘟在(zai)中國迄(qi)今尚未發現。
2流行特點
本病在(zai)自(zi)然(ran)條件下只感(gan)(gan)染豬(zhu),不同年(nian)齡、性別、品種的(de)豬(zhu)和野(ye)豬(zhu)都易感(gan)(gan),一年(nian)四季均可發生(sheng)。病豬(zhu)是主(zhu)要傳染源(yuan),病豬(zhu)排泄物和分泌物,病死豬(zhu)和臟(zang)器及尸體、急(ji)宰病豬(zhu)的(de)血、肉(rou)、內臟(zang)、廢水(shui)、廢料污染的(de)飼料,飲水(shui)都可散(san)播病毒,豬(zhu)瘟的(de)傳播主(zhu)要通過(guo)接觸,經消(xiao)化(hua)道感(gan)(gan)染。此外,患(huan)病和弱毒株感(gan)(gan)染的(de)母豬(zhu)也可以經胎盤(pan)垂直(zhi)感(gan)(gan)染胎兒,產生(sheng)弱仔豬(zhu)、死胎、木(mu)乃伊胎等。
3潛伏期
簡介
一(yi)般為5—7天,根據(ju)臨床癥狀可分為最急(ji)性(xing)、急(ji)性(xing)、慢性(xing)和溫和型四(si)種類型。
最急性型
A:最(zui)急性型:病(bing)豬常無明顯癥狀,突(tu)然(ran)死亡(wang),一(yi)般出現在初(chu)發病(bing)地區和(he)流行初(chu)期(qi)。
急性型
B:急(ji)性型(xing):病豬(zhu)精神差,發熱,體(ti)溫在40—42℃之間,呈現(xian)稽留熱,喜臥(wo)、弓背、寒(han)顫及行走(zou)搖晃。食欲(yu)減(jian)退或廢絕,喜歡(huan)飲水(shui),有(you)的(de)(de)發生嘔吐。結(jie)(jie)膜發炎(yan),流(liu)膿(nong)性分(fen)泌物,將上下眼瞼粘住,不能張開,鼻(bi)(bi)流(liu)膿(nong)性鼻(bi)(bi)液(ye)。初(chu)期便(bian)秘,干硬的(de)(de)糞(fen)球表面附有(you)大(da)量白(bai)色的(de)(de)腸粘液(ye),后(hou)(hou)期腹(fu)瀉,糞(fen)便(bian)惡臭(chou),帶有(you)粘液(ye)或血(xue)液(ye),病豬(zhu)的(de)(de)鼻(bi)(bi)端、耳后(hou)(hou)根、腹(fu)部及四(si)肢(zhi)內(nei)(nei)側的(de)(de)皮(pi)膚及齒齦、唇內(nei)(nei)、肛門等(deng)處粘膜出(chu)現(xian)針(zhen)尖狀出(chu)血(xue)點,指壓(ya)不退色,腹(fu)股溝淋巴結(jie)(jie)腫大(da)。公豬(zhu)包皮(pi)發炎(yan),陰鞘積尿,用(yong)手擠壓(ya)時有(you)惡臭(chou)渾濁液(ye)體(ti)射出(chu)。小豬(zhu)可出(chu)現(xian)神經癥狀,表現(xian)磨(mo)牙、后(hou)(hou)退、轉圈、強直、側臥(wo)及游泳狀,甚(shen)至昏迷等(deng)。
慢性型
C:慢(man)性(xing)型:多由急性(xing)型轉變而來,體(ti)溫時(shi)高時(shi)低,食(shi)欲不振,便秘與腹瀉交替出(chu)現,逐漸消瘦、貧血,衰弱(ruo),被毛(mao)粗(cu)亂,行走時(shi)兩后肢搖晃無(wu)力,行走不穩(wen)。有些病豬(zhu)的耳尖、尾端和四(si)肢下(xia)部成藍紫色或壞死(si)、脫(tuo)落,病程可長達一個(ge)月(yue)以上,最后衰弱(ruo)死(si)亡(wang),死(si)亡(wang)率極高。
溫和型
D:溫和型(xing):又稱非典型(xing),主要發生較多的(de)是斷奶后的(de)仔豬(zhu)(zhu)及架子豬(zhu)(zhu),表(biao)現癥(zheng)狀輕微,不典型(xing),病(bing)情(qing)緩和,病(bing)理變化不明顯,病(bing)程較長(chang)(chang)體溫稽留在40℃左右,皮(pi)膚(fu)無出血(xue)小點,但(dan)有淤血(xue)和壞(huai)死,食欲(yu)時好時壞(huai),糞便時干時稀(xi),病(bing)豬(zhu)(zhu)十分瘦弱,致死率(lv)較高,也(ye)有耐過的(de),但(dan)生長(chang)(chang)發育嚴重受阻。
4剖檢病變
急性型
全身皮膚、漿膜、粘膜和內臟器(qi)官有不(bu)同程(cheng)度的(de)出(chu)血。全身淋巴(ba)結腫脹,
多汁、充血(xue)(xue)、出血(xue)(xue)、外表(biao)呈現紫黑(hei)色(se),切(qie)面如(ru)大(da)理石狀,腎(shen)臟色(se)淡,皮質(zhi)有(you)針(zhen)尖(jian)至(zhi)小米(mi)狀的(de)出血(xue)(xue)點(dian),脾臟有(you)梗(geng)寒(han),以邊緣多見(jian),呈色(se)黑(hei)小紫塊,喉頭粘(zhan)膜及扁(bian)桃體出血(xue)(xue)。膀胱粘(zhan)膜有(you)散在的(de)出血(xue)(xue)點(dian)。胃、腸(chang)粘(zhan)膜呈卡他性炎癥。大(da)腸(chang)的(de)回盲瓣處形成紐扣狀潰(kui)瘍。
慢性型
主要(yao)表現為壞死性腸炎,全身性出血(xue)變(bian)化不(bu)明(ming)顯,由于(yu)鈣磷代謝的擾亂,
斷(duan)奶病(bing)豬可(ke)見(jian)肋骨(gu)末端(duan)和軟骨(gu)組織變(bian)界處,因骨(gu)化(hua)障礙而形成的黃色(se)骨(gu)化(hua)線(xian)。
實驗室診斷
在口述診斷的基礎上,可用免疫(yi)熒(ying)光抗體檢查,酶標(biao)記組(zu)織(zhi)抗
原定位法,免體(ti)交互免疫試驗,血清(qing)中和試驗,豬瘟單克隆抗體(ti)純化酶聯免疫吸(xi)附試驗等(deng)方法之一進行確診。
5防治措施
預防:A、免(mian)疫接(jie)種。B、開展免(mian)疫監測,采用酶(mei)聯免(mian)疫吸附試驗或(huo)正向間
接血凝試驗(yan)等(deng)方法開展免疫抗體監(jian)測(ce)。C、及(ji)時(shi)淘汰隱性(xing)感染(ran)帶毒種豬。D、堅(jian)持自繁自養,全進全出的(de)飼養管理制度。E、做(zuo)好豬場、豬舍的(de)隔離、衛生、消毒和(he)殺蟲工作,減少豬瘟病毒的(de)侵入。
6疫情處理
A、立即(ji)報告,及(ji)時診斷。B、劃定疫(yi)點。C、封鎖疫(yi)點、疫(yi)區。D、處理(li)病豬,做出無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)。E、緊急預防接(jie)種。疫(yi)區里(li)的(de)假(jia)定健康豬和受威脅(xie)地區的(de)生豬即(ji)接(jie)種豬瘟免弱毒疫(yi)苗。F、消(xiao)毒,認真消(xiao)毒被污染的(de)場(chang)地、圈舍、用具(ju)等,糞便(bian)堆(dui)積發(fa)酵、無(wu)害(hai)化(hua)處理(li)豬瘟(hogcholera,HC或SWliqefever,sF)
7疫苗種類
豬(zhu)瘟是一種傳染性(xing)非常(chang)強的(de)傳染病,常(chang)給養豬(zhu)業造成毀滅性(xing)損失。預防豬(zhu)瘟最(zui)有效的(de)方法就(jiu)是接種豬(zhu)瘟疫苗。為(wei)了使(shi)(shi)廣(guang)大養豬(zhu)戶正確(que)選擇和有效使(shi)(shi)用豬(zhu)瘟疫苗,這里(li)將豬(zhu)瘟疫苗的(de)種類和使(shi)(shi)用方法簡介如下(xia): 疫苗的(de)種類
目(mu)前市場(chang)上預防豬瘟的疫苗主要(yao)有以(yi)下三(san)種:
1.豬瘟活疫(yi)苗(miao)(I)———乳兔(tu)苗(miao)。
2.豬(zhu)瘟活疫苗(II)———細胞苗。
3.豬瘟活疫苗(I)———淋脾(pi)苗。
8使用方法
豬瘟活疫(yi)(yi)苗(miao)(I)———乳兔苗(miao)的用(yong)法該疫(yi)(yi)苗(miao)為肌肉或皮下注(zhu)(zhu)射(she)(she)。使用(yong)時(shi)按(an)(an)瓶(ping)簽注(zhu)(zhu)明頭份用(yong)無菌(jun)生理鹽水按(an)(an)每頭份1毫(hao)升稀(xi)釋,大小豬均為1毫(hao)升。該疫(yi)(yi)苗(miao)禁止與菌(jun)苗(miao)同時(shi)注(zhu)(zhu)射(she)(she)。注(zhu)(zhu)射(she)(she)本苗(miao)后(hou)(hou)可能有(you)少數豬在(zai)(zai)1天(tian)-2天(tian)內發生反應,但3日(ri)后(hou)(hou)即可恢復正常。注(zhu)(zhu)苗(miao)后(hou)(hou)如(ru)出現過(guo)敏反應,應及(ji)時(shi)注(zhu)(zhu)射(she)(she)抗過(guo)敏藥物,如(ru)腎上腺素等。該疫(yi)(yi)苗(miao)要(yao)在(zai)(zai)-15℃以下避光保存(cun),有(you)效期為12個(ge)月。該疫(yi)(yi)苗(miao)稀(xi)釋后(hou)(hou),應放在(zai)(zai)冷藏容器內,嚴禁結冰,如(ru)氣溫(wen)在(zai)(zai)15℃以下,6小時(shi)內要(yao)用(yong)完(wan);如(ru)氣溫(wen)在(zai)(zai)15℃-27℃,應在(zai)(zai)3小時(shi)內用(yong)完(wan)。注(zhu)(zhu)射(she)(she)的時(shi)間最好是進(jin)食后(hou)(hou)2小時(shi)或進(jin)食前。
豬(zhu)(zhu)瘟活疫苗(miao)(II)———細胞(bao)苗(miao)的用(yong)法該疫苗(miao)大(da)小豬(zhu)(zhu)都(dou)可使用(yong)。按標(biao)簽注(zhu)明(ming)頭(tou)份,每頭(tou)份加入無菌生(sheng)理(li)鹽水1毫(hao)升稀釋后(hou)(hou)(hou),大(da)小豬(zhu)(zhu)均(jun)皮下或肌肉注(zhu)射(she)1毫(hao)升。注(zhu)射(she)4天后(hou)(hou)(hou)即可產生(sheng)免疫力,注(zhu)射(she)后(hou)(hou)(hou)免疫期可達12個(ge)(ge)月(yue)。該疫苗(miao)宜在(zai)-15℃以下保存(cun),有效期為18個(ge)(ge)月(yue)。注(zhu)射(she)前應了(le)解當(dang)地確(que)無疫病流(liu)行。隨用(yong)隨稀釋,稀釋后(hou)(hou)(hou)的疫苗(miao)應放冷暗處(chu),并限2小時內用(yong)完(wan)。斷(duan)奶前仔豬(zhu)(zhu)可接種4頭(tou)份疫苗(miao),以防母源抗體干擾。
豬瘟活疫苗(miao)(miao)(I)———淋脾苗(miao)(miao)的用(yong)法該(gai)疫苗(miao)(miao)為肌肉或皮(pi)下注(zhu)(zhu)射(she)。使用(yong)時按瓶簽注(zhu)(zhu)明(ming)頭份用(yong)無菌生理鹽水按每頭份1毫升稀釋,大小(xiao)豬均1毫升。該(gai)疫苗(miao)(miao)應在(zai)(zai)-15℃以下避光保存,有效(xiao)期(qi)為12個月。疫苗(miao)(miao)稀釋后(hou),應放(fang)在(zai)(zai)冷藏容器內,嚴禁結冰。如氣溫(wen)在(zai)(zai)15℃以下,6小(xiao)時內用(yong)完。如氣溫(wen)在(zai)(zai)15℃-27℃,則應在(zai)(zai)3小(xiao)時內用(yong)完。注(zhu)(zhu)射(she)的時間最好(hao)是進食(shi)后(hou)2小(xiao)時或進食(shi)前(qian)。
注意事項
以上三種疫(yi)苗在沒有豬(zhu)瘟流行的地區,斷奶(nai)后無(wu)母(mu)源抗體的仔豬(zhu),注射1次(ci)即可(ke)。
在有疫(yi)情威脅(xie)時(shi),仔(zi)豬(zhu)可在21日齡(ling)(ling)-30日齡(ling)(ling)和(he)65日齡(ling)(ling)左右各注(zhu)射(she)1次(ci)。
被(bei)注射(she)疫苗的豬必須(xu)健康無(wu)病,如豬體質瘦弱、有病,體溫升高或(huo)食欲不(bu)振(zhen)等均不(bu)應注射(she)。
注(zhu)射免疫用各種工具,須在用前消毒(du)。每注(zhu)射1頭豬,必(bi)須更換一次煮(zhu)沸(fei)消毒(du)過(guo)的針頭,嚴禁(jin)打“飛針”。
注射部位應先剪毛(mao),然后用碘酒消毒,再進(jin)行(xing)注射。
以上三種(zhong)疫苗如果在有(you)豬瘟發生(sheng)的地(di)區使用,必須(xu)由(you)獸醫嚴(yan)格指導,注射(she)后防(fang)疫人員(yuan)應在1周(zhou)內進行(xing)逐日觀察(cha)。
9治療進展
簡介
在歐洲稱為(wei)古典豬(zhu)瘟{classicalswinefever.CSF),是由(you)豬(zhu)瘟病(bing)(bing)毒(HCV或CSFV)引(yin)起的一(yi)種高度(du)接觸性(xing)傳染病(bing)(bing),豬(zhu)是該病(bing)(bing)毒唯一(yi)的自然宿主(zhu)。于(yu)1833年首(shou)次發現(xian)于(yu)美國(guo)俄(e)(e)亥俄(e)(e)州(zhou),百余(yu)年來(lai)其流行(xing)遍(bian)及全(quan)球。國(guo)際(ji)獸疫局將(jiang)其定為(wei)A類傳染病(bing)(bing),中國(guo)《動物防疫法》將(jiang)其列為(wei)一(yi)類傳染病(bing)(bing).是目前危害中國(guo)養豬(zhu)業發展的主(zhu)要疫病(bing)(bing)之一(yi)。中國(guo)豬(zhu)瘟兔化弱(ruo)毒疫苗在防治豬(zhu)瘟中曾起到(dao)決定性(xing)作用(yong),但近幾年來(lai)出(chu)現(xian)免疫效(xiao)果不理想.應用(yong)組織培養弱(ruo)毒苗也發生免疫失(shi)敗,究(jiu)其原因比(bi)較多。由(you)于(yu)豬(zhu)瘟造成的經濟損失(shi)巨大(da).歷(li)來(lai)是各國(guo)研究(jiu)的熱點。
csFV基(ji)因結構與(yu)功能的研究
CSFV為(wei)有(you)囊膜病(bing)(bing)毒,40--60nm,單股正鏈RNA。CSFV基因組長約123kb,僅(jin)含(han)有(you)一(yi)(yi)(yi)個(ge)大(da)的開(kai)放性閱讀框架(ORF).此ORF翻(fan)譯成(cheng)含(han)3898個(ge)氨(an)基酸殘(can)基.分子量約438kDa的多聚蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai),并(bing)進一(yi)(yi)(yi)步在(zai)病(bing)(bing)毒和(he)(he)(he)宿主(zhu)細胞蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶的作用下加工為(wei)成(cheng)熟(shu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai).cSFV的所(suo)有(you)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)和(he)(he)(he)非(fei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)均(jun)由該ORF所(suo)編(bian)碼。ORF兩側是5’一(yi)(yi)(yi)端非(fei)翻(fan)譯區(qu)(5’-UTR)和(he)(he)(he)3’一(yi)(yi)(yi)端非(fei)翻(fan)譯區(qu)(3’-UTR).且5’一(yi)(yi)(yi)端無帽子結(jie)構(gou)(gou).3’一(yi)(yi)(yi)端無poly(A)尾(wei)巴。這一(yi)(yi)(yi)大(da)前體蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)以共(gong)翻(fan)譯和(he)(he)(he)后翻(fan)譯的形式在(zai)細胞蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶和(he)(he)(he)病(bing)(bing)毒特異蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)酶作用下.加工成(cheng)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)和(he)(he)(he)非(fei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai),其結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)和(he)(he)(he)非(fei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)在(zai)病(bing)(bing)毒RNA上的編(bian)碼順序為(wei)Npro、c、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。NS2-3可被加工成(cheng)NS2、NS3(P80),除c、E0、E1和(he)(he)(he)E2為(wei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)外(wai).其余均(jun)為(wei)非(fei)結(jie)構(gou)(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)。
目前已經定位(wei)的CSFV蛋白有5種(zhong),即Npro、c、Erns(E0)、E1和E2.它(ta)們均由CSFV的RNA-ORF5’一(yi)端(duan)所編(bian)碼。在結構蛋白中,最(zui)具(ju)有免疫防制研究價值的是EO和E2。
1.1c,是(shi)病(bing)(bing)毒的衣殼(ke)蛋白(bai),也(ye)稱(cheng)p14,由病(bing)(bing)毒ORF中的Setl69~Ala267組成.是(shi)CSFV核衣殼(ke)蛋白(bai)其(qi)N端由CSFV非結構蛋白(bai)p23的水解作(zuo)用產生,c端可能是(shi)由宿主細胞的信號肽酶作(zuo)用所(suo)致(zhi)。
1.2gp44/48,是病毒(du)的(de)(de)一種囊(nang)(nang)膜(mo)(mo)(mo)(mo)糖蛋白.也稱Erns.舊稱E0。有9個可(ke)(ke)能(neng)的(de)(de)糖基化(hua)位(wei)點,去糖基的(de)(de)蛋白骨架分子(zi)(zi)量約26KDa,由(you)(you)病毒(du)ORF中Glu168-Ala494組成(cheng)。在感染(ran)細胞(bao)中gp44/48在內質網內積累,并(bing)可(ke)(ke)存在于(yu)細胞(bao)膜(mo)(mo)(mo)(mo)表(biao)面或被(bei)分泌(mi)到(dao)胞(bao)外。在病毒(du)粒子(zi)(zi)中gp44/48以97KDa的(de)(de)同源(yuan)二(er)聚體形式存在于(yu)囊(nang)(nang)膜(mo)(mo)(mo)(mo)表(biao)面。由(you)(you)于(yu)其(qi)分子(zi)(zi)內缺乏疏(shu)水的(de)(de)膜(mo)(mo)(mo)(mo)錨定區,與病毒(du)囊(nang)(nang)膜(mo)(mo)(mo)(mo)結合力弱.易從囊(nang)(nang)膜(mo)(mo)(mo)(mo)上游(you)離下來。gp44/48可(ke)(ke)誘(you)(you)導(dao)產生豬瘟的(de)(de)中和抗體.免(mian)疫豬可(ke)(ke)誘(you)(you)導(dao)產生對致死量CSFV的(de)(de)保護性免(mian)疫。由(you)(you)于(yu)編(bian)碼gp44/48的(de)(de)核(he)酸序列(lie)在屬內比編(bian)碼gp55的(de)(de)序列(lie)保守程度高(gao),因此Erns可(ke)(ke)作為(wei)防治(zhi)豬瘟的(de)(de)一種靶蛋白。
Erns具(ju)有(you)RNase活性,作用于(yu)單(dan)鏈的(de)(de)RNA.且對富含u的(de)(de)序列活性最高。4ng的(de)(de)Ems在(zai)體外即可(ke)將(jiang)CSFV基因(yin)(yin)組(zu)RNA完全(quan)降(jiang)解(jie)。推(tui)測Ems沒(mei)有(you)將(jiang)其自身RNA降(jiang)解(jie)掉的(de)(de)原(yuan)因(yin)(yin)可(ke)能是由于(yu)空間(jian)上的(de)(de)隔(ge)離。在(zai)宿主細胞(bao)中,新合成的(de)(de)Erns在(zai)內(nei)(nei)質網腔內(nei)(nei).而其基因(yin)(yin)組(zu)RNA則在(zai)胞(bao)漿中:在(zai)病毒粒子中,定(ding)位于(yu)囊膜(mo)的(de)(de)Ems與(yu)其基因(yin)(yin)組(zu)RNA間(jian)隔(ge)著衣殼蛋白(bai).因(yin)(yin)此Erns是不會降(jiang)解(jie)其自身RNA的(de)(de)。編碼(ma)Ems的(de)(de)基因(yin)(yin)是瘟病毒屬病毒所特有(you)的(de)(de).黃(huang)病毒科中其他病毒基因(yin)(yin)組(zu)內(nei)(nei)無此基因(yin)(yin).推(tui)測該基因(yin)(yin)是病毒與(yu)宿主細胞(bao)的(de)(de)RNase基因(yin)(yin)重組(zu)得到的(de)(de)。
1.3gp33,是(shi)CSFV囊膜(mo)糖蛋(dan)白(bai)(bai).也(ye)稱E1,去糖基(ji)(ji)的(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)骨架分子量21.8KDa.由195個氨基(ji)(ji)酸殘基(ji)(ji)(ORF編碼的(de)(de)(de)Leu495至GlY68。組成,內有3個可能(neng)的(de)(de)(de)糖基(ji)(ji)化位點。其蛋(dan)白(bai)(bai)骨架中(zhong)有兩段(duan)疏水序列(Leu548~Pro579~Gly689)。在多聚蛋(dan)白(bai)(bai)轉位過程中(zhong),前一段(duan)是(shi)E1向內質網腔轉位的(de)(de)(de)終止信號,后一段(duan)則充(chong)當E2轉位的(de)(de)(de)信號肽,除此之外,這(zhe)二段(duan)疏水區還充(chong)當E1的(de)(de)(de)膜(mo)錨(mao)定位點。E1在病(bing)毒囊膜(mo)內.不能(neng)誘導豬產生(sheng)抗體。
1.4gp55.為(wei)(wei)CSFV的(de)(de)(de)(de)(de)(de)另一(yi)囊膜糖蛋(dan)白,又稱為(wei)(wei)E2,是病毒主要的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)原蛋(dan)白,也是三個(ge)病毒糖蛋(dan)白中(zhong)保守(shou)性最低.最易變(bian)異(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)(zi)。gp55常以100kDa的(de)(de)(de)(de)(de)(de)同(tong)源(yuan)二(er)聚體(ti)(ti)及與(yu)gp33形成75kDa的(de)(de)(de)(de)(de)(de)異(yi)源(yuan)二(er)聚體(ti)(ti)形式存在(zai)于病毒粒子(zi)(zi)及CSFV感染的(de)(de)(de)(de)(de)(de)細胞(bao)表面(mian)。在(zai)體(ti)(ti)外(wai)gp55可誘導產生(sheng)病毒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)中(zhong)和(he)抗(kang)體(ti)(ti),體(ti)(ti)內可誘導產生(sheng)抗(kang)CSFV的(de)(de)(de)(de)(de)(de)攻擊(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)體(ti)(ti)。Hulst用(yong)20μg昆曳(ye)細胞(bao)表達的(de)(de)(de)(de)(de)(de)E2雙相油包水(shui)乳劑免疫(yi)豬(zhu),能抵抗(kang)100LD50CSFVBrescia毒株強毒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)攻擊(ji)。gp55的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白骨(gu)架由(you)370個(ge)氨基(ji)(ji)酸(ORF編(bian)碼的(de)(de)(de)(de)(de)(de)690-1060氨基(ji)(ji)酸殘基(ji)(ji))組成.并以其c端的(de)(de)(de)(de)(de)(de)40個(ge)疏水(shui)氨基(ji)(ji)酸錨定在(zai)膜上。由(you)于糖基(ji)(ji)化(hua)程度不同(tong)。E2的(de)(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)(zi)量可為(wei)(wei)51-58kDa。E2分(fen)子(zi)(zi)內的(de)(de)(de)(de)(de)(de)15個(ge)Cys殘基(ji)(ji)在(zai)屬內均保守(shou),其中(zhong)N端6個(ge)Cys殘基(ji)(ji)參與(yu)抗(kang)原結(jie)構域的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形成,c端9個(ge)Cys殘基(ji)(ji)則參與(yu)同(tong)源(yuan)、異(yi)源(yuan)二(er)聚體(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形成。
gp55的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)決(jue)定區在其N端部分(ORF編碼(ma)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)第(di)690-866氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)),可分為2個(ge)獨(du)立的(de)(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元,四(si)個(ge)抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)A.B.C,D。其中結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)A又可分為A.,A2,A3三個(ge)亞域(yu)。結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)B.c屬于(yu)(yu)一(yi)(yi)個(ge)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元.均為中和(he)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)合位點.由(you)ORF編碼(ma)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)690~800氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji)參(can)(can)與(yu)構(gou)(gou)(gou)成。Cys693與(yu)CYS7377形成的(de)(de)(de)(de)(de)(de)二硫鍵對(dui)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)B、c的(de)(de)(de)(de)(de)(de)空間結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)至關重要。另一(yi)(yi)個(ge)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元含A.D抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)。A1、A2亞區定位于(yu)(yu)第(di)795-851氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji),在種內保守A1是(shi)一(yi)(yi)個(ge)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體的(de)(de)(de)(de)(de)(de)中和(he)位點。亞區A3定位于(yu)(yu)766-813氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji).而氨(an)(an)基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)基(ji)(ji)(ji)766-800則參(can)(can)與(yu)了結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)域(yu)D的(de)(de)(de)(de)(de)(de)構(gou)(gou)(gou)成。cys792~Cys856及Cys818~Cys828間的(de)(de)(de)(de)(de)(de)二硫鍵對(dui)這個(ge)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元空問結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形成是(shi)必需的(de)(de)(de)(de)(de)(de)。連(lian)接這兩個(ge)結(jie)(jie)(jie)(jie)(jie)構(gou)(gou)(gou)單(dan)(dan)元的(de)(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)一(yi)(yi)段屬內保守的(de)(de)(de)(de)(de)(de)疏水序列.推測這段序列參(can)(can)與(yu)了病(bing)毒侵入細胞過程中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)膜融合過程。
1.5Npro,也稱p23,CSFV的(de)(de)(de)(de)非(fei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai),是ORF編(bian)碼(ma)的(de)(de)(de)(de)多聚蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)N端的(de)(de)(de)(de)第(di)一(yi)個蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質。Npro由168個氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)組成.具有蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質水(shui)解酶(mei)活(huo)(huo)(huo)性(xing),能以自催(cui)化的(de)(de)(de)(de)方式從正在(zai)(zai)翻譯的(de)(de)(de)(de)多聚蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)上斷(duan)(duan)裂下(xia)來,成為成熟的(de)(de)(de)(de)病毒(du)(du)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)。序(xu)列比較發現,編(bian)碼(ma)p23的(de)(de)(de)(de)基(ji)(ji)(ji)因(yin)在(zai)(zai)瘟病毒(du)(du)屬(shu)中是較為保(bao)守的(de)(de)(de)(de)。它的(de)(de)(de)(de)斷(duan)(duan)裂位點在(zai)(zai)Cysl68與(yu)(yu)其下(xia)游(you)的(de)(de)(de)(de)病毒(du)(du)核衣殼p14N端第(di)一(yi)個氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)ser。間(jian)。Npro的(de)(de)(de)(de)cys69和His130可(ke)能位于其酶(mei)活(huo)(huo)(huo)性(xing)中心.能水(shui)解斷(duan)(duan)裂Cys與(yu)(yu)Ala及Gly與(yu)(yu)Ser間(jian)的(de)(de)(de)(de)肽鍵,斷(duan)(duan)列位點位于活(huo)(huo)(huo)性(xing)His殘(can)(can)基(ji)(ji)(ji)下(xia)游(you)38個氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)(can)基(ji)(ji)(ji)處。Npro不參(can)與(yu)(yu)CSFV的(de)(de)(de)(de)結(jie)構(gou)及非(fei)結(jie)構(gou)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)(de)(de)加工過程.其蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)活(huo)(huo)(huo)性(xing)在(zai)(zai)cSFV增殖過程中的(de)(de)(de)(de)作用還(huan)不清楚(chu)。Rumenapf等人使用定(ding)(ding)點突變技術對參(can)與(yu)(yu)Npro催(cui)化活(huo)(huo)(huo)性(xing)的(de)(de)(de)(de)氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)(can)基(ji)(ji)(ji)進(jin)行測定(ding)(ding).確(que)定(ding)(ding)了其中的(de)(de)(de)(de)GIu22、His49和Cys69是保(bao)持(chi)Npro蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶(mei)活(huo)(huo)(huo)性(xing)所(suo)必(bi)需(xu)的(de)(de)(de)(de)氨基(ji)(ji)(ji)酸(suan)(suan)殘(can)(can)基(ji)(ji)(ji),而His130并非(fei)必(bi)須(xu)。
實驗窒診斷
目(mu)前豬(zhu)瘟流行常常表(biao)現無(wu)規律的(de)地區性散發.發病特征(zheng)不典(dian)型(xing),以發熱、精神沉郁、食欲(yu)減退、咳嗽、共濟失調(diao)、結(jie)膜炎以及腹瀉、圍產期死亡、死胎(tai)、流產。中等毒力(li)及強毒感染(ran)有(you)以上這些(xie)癥狀(zhuang),并且在(zai)豬(zhu)群中不分(fen)年齡快(kuai)速傳(chuan)播。結(jie)合這些(xie)臨(lin)床癥狀(zhuang)進行實(shi)驗(yan)室診(zhen)斷是必要的(de)。
2.1病毒(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟病毒(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)快(kuai)速檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)對(dui)(dui)于豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟的(de)(de)(de)(de)(de)診(zhen)斷具有特別重(zhong)要的(de)(de)(de)(de)(de)意義(yi)。目前快(kuai)速、敏感的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)方法(fa)(fa)(fa)是利(li)(li)用免(mian)疫(yi)組(zu)(zu)化(hua)(hua)技(ji)術(shu)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)扁桃(tao)體(ti)組(zu)(zu)織(zhi)。扁桃(tao)體(ti)中豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟病毒(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)可早(zao)在感染(ran)后(hou)2d檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)到.淋巴結、脾(pi)臟以(yi)及(ji)(ji)胰腺均可作為病毒(du)(du)早(zao)期檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)(de)組(zu)(zu)織(zhi)樣(yang)(yang)品(pin)。DelasMulas等及(ji)(ji)Narita等報(bao)道了(le)一種檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟病毒(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)免(mian)疫(yi)組(zu)(zu)化(hua)(hua)方法(fa)(fa)(fa).即(ji)利(li)(li)用針對(dui)(dui)E2糖蛋白的(de)(de)(de)(de)(de)單克(ke)隆(long)抗(kang)(kang)體(ti)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)福(fu)爾馬(ma)(ma)林固(gu)定、石蠟包埋的(de)(de)(de)(de)(de)組(zu)(zu)織(zhi)樣(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)免(mian)疫(yi)組(zu)(zu)化(hua)(hua)方法(fa)(fa)(fa)。該方法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)(de)優點(dian)是能(neng)(neng)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)長期保(bao)存的(de)(de)(de)(de)(de)樣(yang)(yang)品(pin),缺點(dian)是較(jiao)費(fei)時.而且福(fu)爾馬(ma)(ma)林固(gu)定后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)組(zu)(zu)織(zhi)不能(neng)(neng)再進(jin)行病毒(du)(du)分(fen)離。利(li)(li)用鏈酶(mei)一生(sheng)物素一過氧化(hua)(hua)物酶(mei)(ABc)的(de)(de)(de)(de)(de)免(mian)疫(yi)組(zu)(zu)化(hua)(hua)方法(fa)(fa)(fa)也能(neng)(neng)用于豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟病毒(du)(du)組(zu)(zu)織(zhi)切片上抗(kang)(kang)原(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)。據報(bao)道流式細胞(bao)儀也可進(jin)行血樣(yang)(yang)中豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟病毒(du)(du)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce),但(dan)其敏感性(xing)(xing)較(jiao)低。以(yi)豬(zhu)(zhu)(zhu)瘟強(qiang)毒(du)(du)感染(ran)仔豬(zhu)(zhu)(zhu),利(li)(li)用抗(kang)(kang)原(yuan)捕(bu)獲ELISA方法(fa)(fa)(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)其病毒(du)(du)血癥,結果表明該方法(fa)(fa)(fa)可用于豬(zhu)(zhu)(zhu)群中流行病學(xue)的(de)(de)(de)(de)(de)調(diao)查。但(dan)其敏感性(xing)(xing)以(yi)及(ji)(ji)特異性(xing)(xing)均低于傳統的(de)(de)(de)(de)(de)實驗室方法(fa)(fa)(fa)。
2.2感(gan)(gan)染性病(bing)毒(du)的(de)(de)(de)(de)(de)檢(jian)測病(bing)毒(du)分(fen)離(li)是目前體外(wai)檢(jian)測感(gan)(gan)染性豬瘟病(bing)毒(du)最特異(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)方法。已(yi)(yi)報道有幾種(zhong)(zhong)方法可(ke)(ke)以從組織(zhi)、全血(xue)中(zhong)(zhong)分(fen)離(li)病(bing)毒(du),白(bai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)是分(fen)離(li)病(bing)毒(du)的(de)(de)(de)(de)(de)最佳(jia)樣(yang)品。然而一(yi)些研究(jiu)人員發(fa)現(xian),白(bai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)以及(ji)單(dan)核細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)在動物感(gan)(gan)染后較長時間才能感(gan)(gan)染病(bing)毒(du)。因此,對于豬瘟的(de)(de)(de)(de)(de)早(zao)期診斷(duan).全血(xue)或(huo)血(xue)漿可(ke)(ke)能比(bi)白(bai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)更(geng)為(wei)敏感(gan)(gan)。最常用(yong)于豬瘟病(bing)毒(du)分(fen)離(li)的(de)(de)(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)為(wei)豬腎細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(PKl5或(huo)SK6)或(huo)豬睪丸細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(sT)。日本建立了(le)一(yi)種(zhong)(zhong)豬腎由來的(de)(de)(de)(de)(de)傳代(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)系(FS-L3).FS-L3細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)在不(bu)感(gan)(gan)染病(bing)毒(du)的(de)(de)(de)(de)(de)情況(kuang)下呈大園(yuan)球狀.數(shu)倍至數(shu)十(shi)倍于普通細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao).但一(yi)旦感(gan)(gan)染了(le)豬瘟病(bing)毒(du),FS-L3細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)(de)(de)大園(yuan)球狀即消失(shi).這(zhe)一(yi)特性已(yi)(yi)被(bei)用(yong)作豬瘟病(bing)毒(du)的(de)(de)(de)(de)(de)中(zhong)(zhong)和試(shi)驗(yan)等各種(zhong)(zhong)生物學特性的(de)(de)(de)(de)(de)測定。經研究(jiu)發(fa)現(xian),產生細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)病(bing)變的(de)(de)(de)(de)(de)毒(du)株是因為(wei)它(ta)的(de)(de)(de)(de)(de)遺傳基因發(fa)生了(le)變化。從5’末端的(de)(de)(de)(de)(de)第一(yi)個核苷酸(suan)到4764個核苷酸(suan)均(jun)已(yi)(yi)缺失(shi).其中(zhong)(zhong)包括5’末端的(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)編碼區、自身蛋(dan)白(bai)分(fen)解酶、衣殼蛋(dan)白(bai)、糖蛋(dan)白(bai)(E0、E1、E2)、非(fei)結構蛋(dan)白(bai)NS-1、和NS-2的(de)(de)(de)(de)(de)基因均(jun)已(yi)(yi)缺失(shi)。
2.3豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)(du)基(ji)因組檢(jian)測(ce)(ce)已報道(dao)利用RT-PCR方(fang)法(fa)檢(jian)測(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)(du)RNA有數種程序。瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)(du)屬特異的(de)引物多選自基(ji)因組的(de)5’端保守(shou)區.其最突出的(de)優(you)點是其產物能用來(lai)直接(jie)測(ce)(ce)序,直接(jie)進行(xing)病毒(du)(du)株的(de)分型(xing)。一(yi)般來(lai)說套式RT-PCR方(fang)法(fa)是檢(jian)測(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)(du)更(geng)敏感(gan)(gan)的(de)方(fang)法(fa),但其缺點是比較費(fei)時.不適(shi)用于大量(liang)樣品的(de)檢(jian)測(ce)(ce)。McGoldrick等(deng)報道(dao)了(le)一(yi)種檢(jian)測(ce)(ce)豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)(du)的(de)單管熒光RT-PCR方(fang)法(fa)。此方(fang)法(fa)可檢(jian)測(ce)(ce)出仔豬(zhu)血樣中(zhong)感(gan)(gan)染(ran)了(le)中(zhong)等(deng)毒(du)(du)力或高(gao)等(deng)毒(du)(du)力的(de)豬(zhu)瘟(wen)(wen)(wen)病毒(du)(du),其敏感(gan)(gan)性高(gao)于病毒(du)(du)分離方(fang)法(fa).并且簡化了(le)試驗程序.減少了(le)污染(ran)的(de)風險(xian).還可進行(xing)大量(liang)樣品的(de)檢(jian)測(ce)(ce)。
2.4抗(kang)(kang)體(ti)檢測(ce)最(zui)常用(yong)(yong)的(de)(de)檢測(ce)豬瘟病毒抗(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)方法(fa)多以(yi)病毒中和試驗為基礎(chu)。目(mu)前(qian)已建立數(shu)個特異的(de)(de)檢測(ce)血清抗(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)ELlSA方法(fa).包括檢測(ce)針對(dui)粗(cu)蛋白(bai)、特異結構蛋白(bai)如E2、Erns以(yi)及(ji)非結構蛋白(bai)NS3抗(kang)(kang)體(ti)的(de)(de)方法(fa)。目(mu)前(qian)使用(yong)(yong)最(zui)廣泛(fan)的(de)(de)是CSFVE2ELISA,其敏感(gan)性(xing)與VNT相比(bi)為90%~99%.特異性(xing)為99%。Leforban等建立了一種(zhong)ELISA方法(fa),能夠區(qu)分(fen)BVDV、BDV以(yi)及(ji)CSFV抗(kang)(kang)體(ti)。這個方法(fa)對(dui)于BVDV/BDV高流行(xing)地區(qu)(如荷蘭)csF的(de)(de)檢測(ce)非常有(you)意義。ELISA特異性(xing)與敏感(gan)性(xing)的(de)(de)提(ti)高是目(mu)前(qian)面臨的(de)(de)最(zui)大(da)的(de)(de)挑戰(zhan)。
當前,豬(zhu)(zhu)瘟仍是(shi)世界(jie)養(yang)豬(zhu)(zhu)業(ye)的一大威脅.1997-1999年期間在(zai)德國、荷蘭、西班牙和意大利等(deng)國都曾多次暴發了豬(zhu)(zhu)瘟,在(zai)中國CSFV的持續性(xing)感染和疫(yi)苗保護效力(li)下降的現象也(ye)比較普遍,這(zhe)不僅給養(yang)豬(zhu)(zhu)業(ye)造成了嚴重的經濟損失,而且也(ye)給豬(zhu)(zhu)瘟防治政策的制定(ding)帶來了一定(ding)的困難。不過,相信隨著CSFV分子(zi)生物學(xue)和檢測方法研(yan)究(jiu)的進一步(bu)深入,這(zhe)些問題都會(hui)得到(dao)最終解決。